两株H6N2亚型鸡源禽流感病毒的分离鉴定

本研究利用血凝抑制试验(HI)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、基因测序等方法,对广东省某活禽交易市场进行流行病学调查时获得的两株非H5、H9亚型禽流感病毒65株和C7株进行了亚型鉴定。结果表明这两株病毒均具有血凝活性,且能被抗H6亚型禽流感病毒标准阳性血清特异性抑制。用针对禽流感病毒的M基因、H6亚型禽流感病毒HA基因、N2亚型禽流感病毒NA基因特异性鉴定引物对65株和C7株进行RT-PCR扩增,分别获得特异性目的片段。测序及BLAST分析表明两株分离株与H6N2亚型禽流感广东分离株的HA基因和NA基因核苷酸序列相似性均高达95%以上。将该两分离株鉴定为H6N2亚型禽流感病毒,并命名为A/Chicken/Guangdong/65/2009、A/Chicken/Guangdong/C7/2009。     

一种从藤粉蝶分离的微孢子虫的生物学特性和分子系统发育研究

从广州市萝岗桑园周边捕捉到的野外昆虫藤粉蝶(Delias pasithoe)成虫体内分离到1株微孢子虫,经人工接种可在家蚕体内全身性寄生。用透射电子显微镜观察到该微孢子虫为双核,极丝11～12圈,极丝同型,基本符合Nosema属微孢子虫超微结构特征。该微孢子虫在其生活史发育过程中以偶倍数核为主,以二分裂方式增殖,形成双核孢子,发育周期为108 h。基于SSU rRNA和rRNA ITS序列的相似性比较和系统进化分析进一步证实该微孢子虫与Nosema属亲缘关系最近,应被分类为Nosema属‘true’Nosema亚群。     

华南蚕区蚕沙产地无害化和肥料化处理技术体系构建思路

调查华南蚕区现有的蚕沙处理主要有分散简易堆肥、沼气发酵和集中资源化利用处理3种模式。针对该蚕区高温多湿的环境,以及一年多次养蚕,蚕沙生产量大的情况,提出因地制宜,采用简易蚕沙池改造升级、小型设施堆肥处理、小规模集约化堆肥处理等多种模式相结合的蚕沙好氧堆肥处理技术,并通过蚕沙堆肥过程与条件的控制,达到蚕沙病原菌灭活无害化、蚕沙堆肥发酵完全熟化和蚕沙作为桑园肥料应用无风险的目的,构建蚕沙产地无害化和肥料化处理技术体系。     

日粮锌水平对4~6周龄肉仔鸡生长性能、胴体性能及肉品质的影响

研究日粮锌水平对4~6周龄肉仔鸡生长性能、胴体性能和肉品质的影响。360只1日龄Arbor Acres(AA)肉公雏,0~3周龄统一饲喂同种日粮(含锌86.25 mg/kg),于22日龄从中选取288只鸡按体重随机分成8个处理,每个处理分6个重复笼饲养,每个重复笼6只鸡。分别饲喂不添加锌的玉米-豆粕型基础日粮(对照组,含锌27.66 mg/kg)和在基础日粮中分别添加20、40、60、80、100、120和140 mg/kg锌(试剂级硫酸锌)日粮。试验期21 d。研究结果表明,日粮锌水平对4~6周龄肉仔鸡生长和胴体性能均无显著影响(P>0.10),但日粮中添加适宜水平的锌可显著降低肉仔鸡胸肌、腿肌的滴水损失和胸肌丙二醛含量,提高胸肌L^*值(P<0.10)。     

Optimized necrotic enteritis model producing clinical and subclinical infection of Clostridium perfringens in broiler chickens

In this study we assessed the roles of Eimeria infection and dietary manipulation (feeding a diet with a high level of fishmeal) in an Australian necrotic enteritis (NE) challenge model in broiler chickens. An experiment was designed to test the hypothesis that Eimeria infection and dietary manipulation, i.e., inclusion of fishmeal in the diet, are necessary to induce NE experimentally. The results showed that the combination of Eimeria administration and fishmeal feeding had a significant effect on induction of clinical and subclinical Clostridium perfringens infection. The majority of the mortality that occurred during the second week of the trial was due to an NE outbreak following the C. perfringens challenge. The mortality rate of the birds was 12.00% for the high-fishmeal (HFM; 500 g/kg) group and 9.33% for the low-fishmeal (LFM; 250 g/kg) group when the birds were subjected to C. perfringens and Eimeria. Fishmeal alone did not induce significant mortality in birds challenged only with C. perfringens but showed a significantly higher C. perfringens count than the non-fishmeal (NFM) control group. Eimeria administration had a significant effect on NE-related mortality but did not have an effect on the C. perfringens count. In accordance with the time course of bird mortality, it can be determined that of the 3 successive days of oral gavage with C. perfringens, the first inoculation was essential for inducing NE, but the third had no additional effect on NE-related mortality. Also, reducing the fishmeal level from 500 to 250 g/kg had no negative impact on the reproducibility of the model. It may be concluded that NE can be consistently induced under experimental conditions by feeding broilers a diet containing 250 g/kg fishmeal, using a single inoculation with low numbers of Eimeria, administering one or two oral C. perfringens inoculations, and maintaining appropriate ambient temperatures and diets.     

早期断奶仔猪的断奶应激与腹泻研究

早期断奶仔猪一方面消化系统发育不成熟,吸收养分能力差,消化酶和胃酸分泌不足,正常的肠道微生物系统尚未建立;另一方面断绝了从母体获得被动免疫的来源,而自身的主动免疫发育尚未成熟。所以断奶应激造成早期断奶仔猪出现消化不良、生长迟滞、抗病力弱等“仔猪早期断奶综合症”。仔猪肠道对日粮抗原过敏从而导致肠道损伤是断奶后腹泻的根本原因。早期补饲、逐步断奶、去母留仔、合理饲喂可预防早期断奶仔猪腹泻。     

应用cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因的研究

采用cDNA微阵列芯片技术，从所构建的猪蛔虫雌、雄成虫cDNA消减文库分别挑取1044和1119个克隆，PCR扩增其插入片段，经纯化后点样于预先处理好的基片上（双点杂交），制备成cDNA微阵列芯片。将分别标记荧光素Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的雌虫和雄虫cDNA探针，与制备好的cDNA芯片杂交（平行进行反标杂交试验）。根据每个点杂交后的Ratio值，筛选出双点杂交和正反标中都同时具有表达差异的基因克隆共1559个。将表达差异最明显的前831个克隆进行测序，获得720个有效序列，经生物信息学分析发现，雄虫特异表达的主要精于蛋白和雌虫特异表达的卵巢信息蛋白的基因序列多数与新杆属线虫存在同源性，有31个可能是新的ESTs。性别差异表达基因及其相关生物信息的获得为下一步研究基因功能奠定了基础。     

鸭源呼肠孤病毒DRV-GZ株S2基因的序列分析及其表达

采用RT-PCR方法从鸭源呼肠孤病毒DRV—GZ株中扩增出了S2基因片段,将其克隆到表达载体pET-28a（＋）中,测序验证后转化入表达宿主菌Rosetta^TM2（DE3）plysS,进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达出相对分子质量约为50000的重组融合蛋白,在浓度为0．6mmol／L的IPTG诱导4h的情况下表达效果最好。表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。表达产物经Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经Western-blot分析,所纯化的蛋白能与抗呼肠孤病毒DRV—GZ株阳性血清进行特异性的免疫印迹反应,证实表达的蛋白具有较好的反应原性。     

地毯草耐盐浓度梯度筛选与临界盐浓度研究

以地毯草(Axonopus compressus)为对象,利用水培法进行耐盐鉴定,初步研究不同盐浓度对地毯草坪用品质、叶色和枯黄率的影响,并对地毯草耐盐性进行了评价。结果表明,不同的处理之间存在显著或极显著性差异,在低浓度处理下（0～120 mmol·L-1）,叶色和坪用品质得分6分以上;而在高浓度处理下（140～180 mmol·L-1）,景观价值低于6分。叶片枯黄率与之正好相反,在低浓度下（0～140 mmol·L-1）,枯黄率较低;而在高浓度下（160～180 mmol·L-1）,枯黄率超过50%,从而导致地毯草草坪观赏价值过低。通过建立回归方程,以枯黄率50%作为确定存活的临界值指标,求得地毯草具有盐半致死临界浓度为141 mmol·L-1。     

Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒;标准曲线相关系数为0.995,扩增效率为103%;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏菌(Brucella.spp)及牛血液的核酸样本特异性检测结果均为阴性。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好,对Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。