牛分枝杆菌蛋白基因相互作用研究工具及其进展

目前有多种技术应用于结核分枝杆菌蛋白相互作用的研究：一是酵母双杂交技术,可以在生物体内验证2个蛋白的相互作用。二是构建分枝杆菌基因突变株,研究蛋白作用的机理,其基本策略为,基因敲除双链DNA的扩增;牛结核分枝杆菌/pJV53感受态细胞的制备;将基因敲除双链DNA片段转化至牛结核分枝杆菌细胞中;筛选、鉴定阳性菌落。三是通过GST pull-down试验检测已知蛋白和靶蛋白的相互作用。目前,研究牛分枝杆菌蛋白基因相互作用较多是RD1 区基因。研究表明,阐明分枝杆菌蛋白的作用机理有助于进一步研发高效的牛结核病诊断试剂和疫苗。     

荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用

荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测方法,快速诊断动物布鲁氏菌病和牛结核病,利用布鲁氏菌探针Bru-996和结核分枝杆菌探针MTB770,通过优化杂交温度、杂交时间和样品处理等关键条件,确定最佳检测程序;根据已知背景的菌株和临床样品,对Bru-996和MTB770探针的特异性和敏感性进行评价,最终建立了荧光复位杂交诊断方法。结果显示:反应条件优化后,该方法可在4h内完成布鲁氏菌检测;荧光标记Bru-996探针与布鲁氏菌待检菌株的杂交结果均为阳性,而与结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌和大肠杆菌杂交结果均为阴性,并从5个已知背景的组织病料中成功检出布鲁氏菌。牛结核分枝杆菌检测则需要6~8h,杂交前必须对样品用二甲苯和溶菌酶进行处理;MTB770探针可特异性识别并能从牛肺部结节中检出牛结核分枝杆菌。结果表明,荧光原位杂交方法快速、简便,而且Bru-996和MTB770探针分别在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测上具有较高的特异性,可替代传统的病原分离鉴定,作为动物布鲁氏菌病和牛结核病的实验室确诊方法。     

Evaluation of Spoligotyping and MIRU-VNTR for Mycobacterium bovis in Xinjiang, China

Mycobacterium bovis, the causative agent of bovine tuberculosis (bTB) in cattle, is also a pathogen for human and other mammals. In this study, 406 cows were screened for bTB by both single intradermal comparative cervical tuberculin (SICCT) test and IFN-γ assay. 135 M. bovis were isolated from 31 SICCT and IFN-γ double-positive cows in Xinjiang Uygur Autonomous Region of China. Spoligotyping and MIRU-VNTR were evaluated for genotyping, and 4 and 7 genotypes were identified, respectively. A new combination of nine MIRU-VNTR loci was most discriminative for M. bovis clones from Xinjiang. Interestingly, two new spoligotypes (SB1903 and SB1904) and special repeat numbers of three loci (ETR-D, QUB 1895 and QUB 3336) were discovered in this study. These results indicated a specific epidemic conservation in Xinjiang, China. M. bovis strains with the unique genotypes were isolated from the herds maintaining parent cows imported from the bTB-free countries, suggesting a possible transmission from the local breed of Xinjiang brown cattle.     

土壤中吡唑醚菌酯的残留分析方法和消解动态研究

对吡唑醚菌酯在土壤中的残留分析方法进行探讨,采用乙腈提取、Flolisil小柱净化、GC-μECD进行检测。结果表明：土壤中添加标准品0.02,0.2和1μg/g,回收率为93.0%,82.5%和83.1%。北京田间试验得到的吡唑醚菌酯在土壤上的消解动态方程为wt=w0×exp（-0.036 4t）,半衰期为19.0d。本方法灵敏度、准确度、精密度高,仪器耗材普遍易得,能够为大规模监测吡唑醚菌酯的残留情况提供参考。     

气相色谱法测定气体中苯活性炭的吸附与解吸研究

为提高分析效率,对活性炭管对气体中苯的吸附和解吸情况进行了实验改进,结果显示：活性炭管在0．5L/min流量下,吸气10min ,A段吸附了约8mg苯后开始穿透,在满足标准方法要求的吸附效率下,A、B两段共吸附了约8．5mg苯,折算浓度为1700mg/m3,因此,以相同的采样流量和时间,在此浓度以下,可对活性炭管A、B两段合并解吸进行分析测定,若高于此浓度值再分别解吸以判断是否符合解吸效率。改进的解吸方式可减少操作步骤,节省时间和有毒的CS2试剂。     

普通小麦中国春Chi基因的克隆、染色体定位及原核表达

利用ChiF/ChiR引物组合在普通小麦品种中国春中扩增几丁质酶基因,并对其序列进行分析,然后利用中国春缺四体材料对不同的几丁质酶基因进行染色体定位,并对定位成功的亚基进行原核表达以及诱导纯化,最后通过进化树分析小麦几丁质酶与其他物种几丁质酶之间的进化关系。结果表明,从中国春中分离出的30个几丁质酶基因可以划分为出6类,分别命名为Chi-1、Chi-2、Chi-3、Chi-4、Chi-5和Chi-6,登录号分别为KJ507385、KJ507386、KJ507387、KJ507388、KJ507389和KJ507390,它们都属于ClassⅠ几丁质酶。Chi-1、Chi-2、Chi-3、Chi-4和Chi-6分别定位在小麦的3A、2B、5B、1A和3D染色体,Chi-5定位失败。Chi-1、Chi-2、Chi-3、Chi-4和Chi-6的原核表达和纯化体系成功建立,最后发现小麦ClassⅠ型几丁质酶与水稻和大麦的ClassⅠ型几丁质酶进化关系更近,而与拟南芥的关系最远。总体来看,通过对小麦几丁质酶的克隆、序列分析、染色体定位、原核表达体系的建立以及进化分析,可知,小麦几丁质酶包括很多种不同的亚型,而且它们分布在不同的染色体上,同时它们与水稻和大麦的进化关系最近。     

盐碱地棉花施用磷肥的增产效应

连续四年六次试验结果表明,在豫东轻、中度盐碱土地区,棉田土壤既缺氮又缺磷,在施用氮肥基础上施用磷肥有较好的增产效果,增产幅度在10.3—53%之间,每公斤过磷酸钙增产皮棉0.4—0.76公斤。在土壤速效磷(P_2O_5)含量小于12ppm,亩产皮棉在40—60公斤产量水平下,每亩应施过磷酸钙(含P_2O_512%左右)50公斤,60—100公斤产量水平下,应施用55公斤为宜。     

A study of emissions and marker gases from smouldering combustion in Larix gmelinii plantations of the Daxing'an MountainsOA

Underground fires are characterized by smouldering combustion with a slow rate of spread rate and without flames. Although smouldering combustion releases large amounts of gaseous pollutants, it is difficult to discover by today’s forest fire monitoring technologies. Carbon monoxide(CO), nitrogen oxides(NO_x) and sulfur dioxide(SO₂) were identified as high concentration marker gases of smouldering combustion-easily-be monitored. According to a two-way ANOVA, combustion time ...