影响猪精子介导基因转移效果的因素研究

为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。     

新城疫病毒D90毒株对肺癌A549细胞生物学特性的研究

本试验采用细胞培养、吖啶橙染色、电镜、流式细胞仪等方法,研究了新城疫D90病毒株对肺癌A549细胞的体外杀伤作用。D90感染的细胞经吖啶橙染色后,可见到典型的细胞凋亡的形态学变化;电镜下可观察到凋亡小体,同时也观察到了典型的坏死细胞;流式细胞仪的分析结果表明,在24h的时间段,病毒的作用机制主要表现为凋亡,在48h时间段内,病毒的作用机制主要表现为坏死。人胎儿肝细胞单层培养物中接种D90后,未观察到细胞病变。结果表明,新城疫D90毒株作用于肺癌A549细胞的机制主要为凋亡与坏死相结合,因此它有期望成为一种有效的抗肿瘤生物制剂。     

鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析

根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒（DPV）dUTPase基因（GenBank登录号DQ486149）序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a（＋）原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU。然后将其转化至E．coliBL21（DE3）进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66．8ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36．2％,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接EUSA效价为1：409600。通过免疫荧光技术进行DPVdUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4h的胞质中检测到特异性荧光,12h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48h胞核和胞质荧光均显著减弱。本研究为DPVdUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。     

不同培养条件对捕食性真菌Duddingtonia flagrans生长的影响

为了研究不同生长条件对捕食线虫性真菌Duddingtoniaflagrans生长的影响,本研究将带有D.flagrans菌丝的琼脂块分别接种于不同碳氮比及不同pH值(4.0~8.5)的CMA固体培养基中,在不同温度下(10℃~45℃)进行培养,每天定时观察菌株的发育情况,并测量菌丝生长长度。结果表明,D.flagrans生长最适pH值范围为6.5~7.0,其中以pH 7.0中生长最快;最适温度为35℃;最适碳氮比范围为5∶1~10∶1,其中在碳氮比为5∶1时,生长率最高。菌丝呈辐射状生长,纵横交错,无色,分隔,生长后期有缠绕圈和厚壁孢子的形成。上述结果为进一步研究D.flagrans的生长特性及捕食作用条件奠定了基础。     

猪伪狂犬病毒和猪细小病毒双重PCR方法的建立及初步应用

目的本研究旨在建立一种适用于临床样品和动物源性生物制品中猪伪狂犬病毒和猪细小病毒同时检测的双重PCR技术。方法针对猪伪狂犬病毒(PRV)的gE基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守区域分别设计引物。结果经条件优化后,所建立的双重PCR方法能特异性地检测出样品中的PRV(581bp)和PPV(202bp)。结论本方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,适用于临床样品中对PRV和PPV的同时检测,也可用于猪源性生物制品的检测。     

应用Excel软件分析敌敌畏农药对两广二号家蚕的安全间隔期

应用Excel软件中的曲线方程分析判断敌敌畏农药对两广二号家蚕的安全间隔期。结果表明：敌敌畏1000倍液的安全间隔期是6d多,其数学模型为幂函数曲线方：y=88．0653x-1834本方法克服以往家蚕的农药安全期无数学模型可循或使用的BASIC方法陈旧繁杂的缺点,也避免英文统计软件SPSS难以在农村普及的不足,是一种计...     

归芪甘草汤对小鼠免疫功能的影响

为研究归芪甘草汤对小鼠免疫功能的影响,该药液由黄芪、当归、炙甘草、熟地和党参组成,经传统水煎法获得浓度为1 g/mL药液;以环磷酰胺诱导建立小鼠免疫抑制模型,培健康小鼠和免疫抑制小鼠灌服药液;在试验第15天,应用流式细胞技术、溶血素测定法和腹腔巨噬细胞吞噬功能测定法,检测复方中药对小鼠T淋巴细胞亚群(CD4、CD8)、IgM和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响.结果显示对免疫抑制小鼠,灌服药液和灌服蒸馏水小鼠相比较,CD4+/CD8+、IgM、吞噬功能百分率和吞噬指数差异极显著(P＜0 01);对健康小鼠,灌服药液和灌服蒸馏水小鼠相比较,CD4+ /CD8+比值差异不显著(P＞0.05),IgM值和吞噬百分率差异显著(P＜0.05),吞噬指数差异极显著(P＜0.01).表明归芪甘草汤具有增强昆明系小鼠免疫功能的作用,尤其是对免疫抑制小鼠的免疫功能增强更为显著.     

蚕沙和稻秸不同比例组合对瘤胃微生物体外发酵的组合效应

本文采用瘤胃微生物体外发酵法研究了不同比例蚕沙(SE)和稻秸(RS)的组合效应。试验将SE:RS设计为100∶0(SE100组)、80∶20(SE80组)、60∶40(SE60组)、40∶60(SE40组)、20∶80(SE20组)、0∶100(SE0组)的比例,分别进行体外发酵批次培养24 h和体外发酵产气培养72 h,测定产气参数和发酵特性指标。结果表明:1)SE100组理论最大产气量显著高于其他各组(P<0.05),SE80组的24和72 h累积产气量显著高于其他组(P<0.05)。2)24 h时培养液总挥发性脂肪酸浓度为SE80组>SE100组>SE60组>SE40组>SE0组>SE20组,乙酸/丙酸为SE80组SE100组>SE60组>SE80组>SE40组>SE0组。4)随着蚕沙比例的升高,底物体外有机物消化率越高。5)SE80组多项指标组合效应指数为0.76,SE80组>SE40组>SE60组>SE20组。蚕沙和稻秸组合改善了体外瘤胃微生物发酵特性和产气参数,且蚕沙和稻秸的最佳比例为80∶20。     

Role of genome-wide mRNA-seq profiling in understanding the long-term sperm maintenance in the storage tubules of laying hens

Tropical Animal Health and Production - Sperm storage function of the sperm storage tubules (SSTs) is directly correlated with the fertility of laying hens. SSTs are located at the utero-vaginal...     

草坪型高羊茅种子活力的研究

对美国俄勒冈州引入的六个种子批的草坪型高羊茅种子用加速老化测定法、电导率测定法、温室出苗测定法、田间出苗测定法和标准发芽测定法进行的种子活力研究表明：不同种子批的活力有明显的差异。标准发芽测定中高发芽率且差异不显著的种子批其加速老化后的发芽率、田间出苗率、电导率都有显著的差异。加速老化后的发芽率、电导率与田间出苗率之间都存在极显著的相关关系。加速老化后的发芽率比标准发芽率测定的发芽率更接近田间出苗率。从高发芽率到低发芽率种子批也表现出种子活力从高到低，但标准发芽测定的发芽率从高到低降低的速度较加速老化后的发芽率和田间出苗率降低的速度缓和的多。各种子批的千粒重与种子活力、种苗芽长和种苗芽重之间不存在极显著的相关关系，但种苗的芽长和芽重在某种程度上受种子大小的影响。