传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白VP2、VP1和VP2-VP1串联基因的原核表达及其初步应用

为获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体检测用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分别设计引物扩增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并扩增VP2和VP1基因中抗原性和亲水性较好的重要区域,通过PCR扩增基因串联方法对截短的VP2和截短的VP1基因进行串联,首次获得VP2-VP1串联基因,并对VP2、VP1和VP2-VP1串联基因进行了原核表达和鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;诱导表达条件显示,3个重组质粒分别转入BL21菌株后经0.05 mmol/L IPTG诱导表达,分别得到分子量为69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白,且均以包涵体形式表达,3个重组蛋白分别于诱导后5、3和6 h时表达量最多。Western blot结果显示,表达的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白与鸡抗IBDV阳性血清均具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作为包被抗原对传染性支气管炎病毒(IBV)、呼肠孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4种阳性血清检测均为阴性,表明所获得的纯化蛋白具有高度的特异性;对免疫了IBD灭活疫苗,IBD基因工程疫苗和IBD弱毒疫苗的商业鸡群进行抗体检测,结果均能显示疫苗免疫后机体抗体水平的变化趋势。本研究表明利用该原核表达系统所表达的3个蛋白均具有良好的免疫反应活性,为IBDV特异性抗体的检测和新型亚单位疫苗的研发奠定基础。     

伪狂犬病毒SN株、SL株的分离鉴定

对琼扩试验检测为伪狂犬病毒 (PRV )阳性的病料 ,采用MDBK细胞进行病毒分离培养 ,获得了两株PRV ,进而经家兔接种和核酸杂交鉴定为PRV阳性 ,将其分别命名为PRVSN株、SL株。     

高效脂肪酶产生真菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

研究旨在筛选高产脂肪酶活性的菌株,并鉴定其菌属及确定其最佳产酶条件。采集富含油脂的土壤,通过溴甲酚紫平板法进行菌株分离筛选,并采用橄榄油乳化法测定脂肪酶活力。利用真菌ITS序列通用引物进行PCR扩增,将测序结果Blast比对,并建系统发育树。采用正交试验设计优化产酶条件。通过筛选得到1株产脂肪酶的真菌菌株GW-1,经鉴定为黑曲霉Aspergillus niger。经单因素试验和正交试验得到该菌的最佳产酶条件为:葡萄糖0.5%、黄豆粉2.0%、橄榄油1.0%、MgSO4.7H2O 0.1%、pH值9.0、接种量8%、装液量50 ml/250 ml、发酵4 d。在此发酵条件下,其产酶活力可达39.82 U/(ml.min)。试验结果显示,访菌株在产脂肪酶能力上具有显著优越性,且菌株GW-1产酶活力较优化前高出19.96 U/(ml.min),提高了100.50%。     

片形吸虫分泌排泄抗原和虫体抗原的分析

用牛源肝片吸虫（南京）、牛源大片吸虫（广西）和羊源肝片吸虫（实验感染）制备可溶性虫体抗原（BA）和和分泌排泄抗原（ES），以SDS－PAGE电泳分析比较，结果显示，3株虫体可溶性虫体抗原至少有20条以上的主要蛋白条带，分子量集中于10－90KD之间，它们之间无显著差异，而3株分泌排泄抗原蛋白成分较简单，明显可分的条带不超过5条，分子量集中于10－30KD之间，且均拥有26－28KD的蛋白成分，提示该蛋白应为片形吸虫ES抗原的主要免疫成分。     

禽类原始生殖细胞与转基因研究进展

综述了鸟类原始生殖细胞的特性、起源、迁移等以及对 PGCs进行操作和培养 ,转基因鸡的研究现状和进展     

Tono-Pen XL calibration curves for cats, cows and sheep

The objective of this study was to provide calibration curves for correcting intraocular pressure (IOP) measurements obtained using the Tono-Pen XL tonometer in cats, cows and sheep. Twelve eyes from 9 cats, 13 eyes from 7 cows, 10 eyes from 5 sheep were used. The anterior chamber of the eye was cannulated in vivo, in situ (immediately post mortem) or ex vivo with a fine needle and IOP was varied from 10 to 90 mmHg in steps of 10 mmHg by adjusting the height of a saline reservoir connected to the needle. For each pressure setting, several readings of IOP were made using the tonometer. The relationship between Tono-Pen reading and manometer setting was linear over the full range of measurement. However, the slope of the data regression line deviated significantly from 1 and indicated that the instrument systematically underestimated IOP. For cats the average slope was 0.62 and for cows and sheep it was 0.72 and 0.69, respectively. For the latter animals, the regression line also had a nonzero intercept of approximately 4.5 mmHg. Similar results were obtained from in vivo and ex vivo eyes and with different Tono-Pen XL tonometers. Although developed for use on humans, the Tono-Pen XL can provide reproducible and accurate measurement of IOP in cats, cows and sheep when suitably calibrated by manometry. The calibration curves provided here, and by implication those reported for other animals using this tonometer, differ in slope from those measured with earlier models of the Tono-Pen. The reproducibility of the curves we obtained implies that they can be used to correct IOP readings from the Tono-Pen XL when manometry is not possible.     

桑尺蠖越冬幼虫的耐寒性研究

研究了桑尺蠖越冬幼虫的耐寒能力 ,测定了虫体内抗寒物质的组成成分 ,并对其耐寒机理作了初步探讨。结果表明 :越冬幼虫从越冬初期至越冬滞育期 ,4龄幼虫的平均过冷却点从初期的-1 7 2℃下降至滞育期的 -2 4 4℃ ;5龄幼虫的平均过冷却点从 -1 3 4℃下降至 -2 4 8℃。越冬幼虫体内水分、糖元、脂肪含量下降 ,其中以糖元含量下降明显 ;越冬幼虫以“小分子糖—氨基酸—糖蛋白”物质系统形成抗寒基质 ,增强耐寒性。     

β-葡聚糖对肉仔鸡生产性能及免疫功能的影响

选用1日龄AA肉仔鸡480只(公雏),随机分为5个处理组。每个处理6个重复,对照组饲喂基础日粮,抗生素组饲喂基础日粮 林可霉素,三个β-葡聚糖组,在基础日粮中分别添加25、50、100mg/kgβ-葡聚糖,以研究添加β-葡聚糖对肉鸡生产性能、免疫器官、细胞和体液免疫、血清中溶菌酶含量以及盲肠内乳酸杆菌的影响。结果显示:肉仔鸡日粮中添加50mg/kgβ-葡聚糖,显著提高0～49日龄日增重和饲料转化效率(P<0.05);显著提高21日龄脾脏的相对重量(P<0.05);添加β-葡聚糖有提高非特异性免疫力的趋势。     

退化草地土壤生化活性研究

通过对三种不同退化程度的退化草地土壤生化活性进行测定和相关性分析，结果表明草地退化后其土壤生化活性受到不同程度的影响，表现为土壤生化活性随着退化程度增高而减小，但差异并非都达到统计学上的显著性，而土壤生化活性间的相关性则显著地与草地退化程度有关，说明退化草地土壤微生物间的协调作用受到显著影响，从而影响土壤氮素和碳素代谢途径。