鹅细小病毒VP3蛋白B细胞线性表位的精确定位

本试验旨在利用获得的4株抗鹅细小病毒(GPV)VP3的单克隆抗体,进一步对GPV VP3 B细胞线性抗原表位精确定位。根据笔者实验室已鉴定的线性抗原表位区结果,筛选出单抗所针对的优势抗原表位区。设计并合成互相重叠5 aa的10 aa短肽寡聚核酸片段,退火后,连入pET-32a载体,经转化鉴定,诱导表达后,获得相应的小片段融合蛋白,并利用单抗通过Western blot进行抗原性鉴定。同样方法进行短肽片段两端氨基酸的逐个缺失设计,进一步精确定位,结果鉴定出2个抗原表位,分别为430-435 aa和643-647 aa。     

禽蛋胚胎检测技术进展

禽蛋胚胎检测技术随着孵化厅自动化技术的发展而蓬勃发展,文章就光照检测、成像检测、激光检测、心跳检测、X光检测等各种禽蛋胚胎检测技术做了分析和总结,并对禽蛋检测技术的发展做了展望。     

貉源犬瘟热病毒CDV-ZC株分离鉴定、全基因测序与分析

应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒。分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC)。采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%。血凝素(H)基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T)。致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据。     

猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定

从规模化猪场疑似病例组织病料中分离到5株脑心肌炎病毒（EMCV），对其中的2株（EMCV BJC3和EMCV HB1）进行了系统鉴定。结果表明，病毒粒子大小约为27nm，呈圆形；2株病毒均不耐酸，对氯仿不敏感，对胰蛋白酶敏感性有所不同，60℃加热1h可被灭活，二价阳离子对病毒没有明显的保护作用。用EMCV多克隆抗体作间接免疫荧光，分离毒株感染的BHK-21细胞的胞浆中可见特异性荧光。对分离毒株进行了VP1和3D基因的扩增和序列测定，结果表明，2个毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为99．49％，氨基酸序列的同源性为98．46％，与GenBank中EMCV毒株的核苷酸序列同源性介于81．61％～99．59％，氨基酸序列同源性在95．5％以上；3D基因扩增片段序列与其它毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100％。基于VP1基因的系统进化树表明，2株分离毒均位于进化树的主干上，变异度不大。由此表明，EMCV感染已在我国猪场存在。     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据获得的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒（DHVⅠ）RNA聚合酶基因序列，应用Primer Premier5．0软件设计了1对引物，建立了检测DHVⅠ的RT-PCR方法。该法能从DHVⅠ中扩增到440bp的条带，而对正常鸭胚尿囊液、健康鸭肝、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、雏鹅新型病毒性肠炎病毒、禽流感病毒（H5N2亚型）、鸭病毒性肿头出血症病毒、鸭源多杀性巴氏杆菌（5：A）的扩增结果均为阴性。该法最低可以检测到30pg的DHV工核酸模板。RT-PCR对DHVⅠ强毒CHv-1株人工感染发病死亡鸭肝的检测结果与病毒分离和Dot—ELISA检测结果的阳性检出率均为100％，对脾、肺、脑病料的检出率显著（P≤0．01）高于病毒分离和Dot-ELISA。RT-PCR、病毒分离和Dot—ELSA对1987～2005年采集且保存于-20℃的经病毒分离已确诊为鸭肝炎的临床送检肝病料的检出率分别为100％（19／19）、36．84％（7／19）和57．98％（11／19），对2000-2005年采集且于-20℃保存的来源于中国18个省份发病鸭群的48份肝病料的检出率分别为100％（48／48）、56．25％（27／48）和75．00％（36／48）。结果表明，建立的RT—PCR方法具有良好的特异性和敏感性，可用于DHVⅠ的分离鉴定、临床病料的检测和分子流行病学调查。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

为建立一种快速、灵敏、简便的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）早期检测方法,本研究利用逆转录环介导恒温扩增技术（RT-LAMP）,针对PRRSV的ORF5基因片段设计了4条引物,利用Bst DNA聚合酶在65 ℃恒温条件下进行逆转录扩增,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和加入SYBR Green Ⅰ染料肉眼判断结果,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。结果表明,该检测方法具有良好的特异性,与其他常见病毒如猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒等无交叉反应,较普通RT-PCR灵敏性高100倍。采用RT-LAMP和RT-PCR分别对10份临床样本同时进行检测,符合率为100%。因此,本研究建立的RT-LAMP是一种可适用于临床PRRSV检测的快速、简单、灵敏、特异的检测方法。     

基于激光诱导击穿光谱的地下水中Fe和Mn的检测

采用激光诱导击穿光谱(LIBS)技术并结合在锌基板上液固转换的样品处理方法,对标准水溶液样品中Fe、Mn进行检测,并根据标准曲线法建立Fe、Mn的定量模型;再利用所建立的LIBS定量模型,对洞庭湖区地下水实际水样中Fe、Mn含量进行检测,并与电感耦合等离子体质谱法(ICP–MS)的检测结果进行比较。结果表明：得到Fe、Mn的LIBS定标曲线的决定系数均大于0.98,相对标准偏差均为4.3%,留一交叉验证均方根误差分别为0.024、0.007 mg/L,Fe、Mn的检出限分别为0.028、0.008 mg/L;采用LIBS对洞庭湖地下水实际水样中Fe、Mn含量检测的结果与ICP–MS的检测结果基本一致,平均相对误差小于10%。     

对农村信息共享与服务平台建设的探索与研究

本文从衢州市农村科技信息共享与服务平台建设实际情况出发,结合信息共享的特点,探讨、研究解决农村科技信息共享与服务平台建设的一些对策.     

味精蛋白对鸡代谢能和养分代谢率影响的研究

试验选用24只2kg左右的蛋公鸡,随机分为4个处理,每个处理6只鸡,前3个处理分别给每只鸡强饲占体重3%的待测原料,第4个处理作为内源对照组,测定内源排泄量,以评定味精蛋白对鸡代谢能和养分代谢率的影响。结果表明:味精蛋白的总能比豆粕高3.87%,而比玉米蛋白粉低15.56%;粗蛋白含量达到71.45%,分别比豆粕和玉米蛋白粉高64.03%和22.32%。味精蛋白的表观代谢能、真代谢能、粗蛋白表观消化率和真消化率、总氨基酸表观消化率和真消化率均极显著低于豆粕和玉米蛋白粉(P<0.01)。而干物质表观消化率和真消化率三者间无显著差异(P>0.05)。在已测定的17种氨基酸中,除甘氨酸外,味精蛋白粉其他氨基酸表观消化率和真消化率均极显著低于豆粕和玉米蛋白粉(P<0.01)。这表明味精蛋白的养分利用率低于豆粕和玉米蛋白粉。     

The 16MΔvjbR as an ideal live attenuated vaccine candidate for differentiation between Brucella vaccination and infection

Brucellosis brings great economic burdens for developing countries. Live attenuated vaccines are the most efficient means for prevention and control of animal Brucellosis. However, the difficulties of differentiating of infection from vaccine immunization, which is essential for eradication programs, limit their applications. Therefore, the development of a vaccine that could differentiate infection from immunization will overcome the limitations and get extensive application. VjbR is a quorum sensing regulator involving in Brucella's intracellular survival. The vjbR∷Tn5 mutants have been proven effective against wild type strain challenge, implying its possibility of use in vaccine candidate development. To further evaluate this candidate gene, in the present study, the antigenicity of purified recombinant VjbR protein was analyzed. Antibodies to Brucella melitensis VjbR could be detected in sera from patients and animals with brucellosis but not in control ones, implying the potential use of this protein as a diagnostic antigen. Then a vjbR mutant of B. melitensis 16M was constructed by replacing the vjbR with kanamycin gene. The mutant showed reduced survival in macrophage and mice. Vaccination of BALB/c mice with 16MΔvjbR conferred significant protective immunity against B. melitensis strain 16M challenges, being equivalent to which induced by the license vaccine Rev.1. The vjbR deletion mutant elicited an anti-Brucella-specific immunoglobulin G response and induced the secretion of gamma interferon and interleukin-10. The most importance is that, the use of vjbR mutants as vaccines in association with diagnostic tests based on the VjbR antigen would allow the serological differentiation between infected and vaccinated animals. These results suggest that 16MΔvjbR is an ideal live attenuated vaccine candidate against B. melitensis and deserves further evaluation for vaccine development.