猪蛋白质二硫化物异构酶A4基因克隆及密码子偏好性分析

试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个不同物种PDIA4基因序列,对猪PDIA4基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子的使用差异和进化关系进行分析,同时对猪PDIA4基因与4个模式生物密码子使用偏性进行比较。结果表明,猪PDIA4基因编码区长1 941 bp,共编码646个氨基酸。与NCBI数据库公布的野猪PDIA4基因(GenBank登录号:NM_001267834.1)的相似性达99%。猪PDIA4基因偏好使用G/C结尾的密码子,27种密码子为猪PDIA4基因的偏好密码子(RSCU>1),其中使用频率最高的前3个密码子分别为CTG(RSCU=3.69)、GCC(RSCU=2.31)和CGC(RSCU=2.29)。比较19个物种PDIA4基因发现,不同物种间PDIA4基因的有效密码子数(ENc)、密码子适应指数(CAI)、GC含量以及T、C、A、G、G+C在密码子第3位含量(T3s、C3s、A3s、G3s、GC3s)均存在差异,且密码子偏好以G/C结尾;聚类分析发现,基于CDS序列的系统进化树更符合19个物种的真实分类系统。在密码子使用频率上,猪PDIA4基因与小鼠基因组间密码子使用偏好程度更为接近,故小鼠更适合作为猪PDIA4基因的遗传转化和异源表达的受体系统。     

灌溉与密度对沙打旺种子产量及其构成因素的影响

研究灌溉时间和灌溉比例对沙打旺(Astragalus adsurgens)种子产量及其构成因素的影响。结果表明:在灌溉总量相同的情况下,灌溉方式对沙打旺种子产量构成因素及实际种子产量的影响较大;开花期灌溉900m³/hm²,潜在种子产量和实际种子产量分别为1611.1与333kg/hm²,比对照(CK)分别提高105.7%和73.1%;在现蕾期和开花期灌溉450 m3/hm²,潜在种子产量和实际种子产量分别为1353.6和258.2kg/hm²,比CK提高72.9%和34.2%;穴栽行株距1.0 m,潜在种子产量达1022.4kg/hm²,实际种子产量为269.8 kg/hm²,比行株距1.5m(717.4和176.8 kg/hm²)分别提高42.5%和52.6%;条播中,行距115cm,潜在种子产量达1657.4kg/hm²,与行距75cm(1310.6kg/hm²)和90cm(1152.4 kg/hm²)相比,分别提高26.5%和43.8%,而行距115cm,实际种子产量为337.2kg/hm²,与行距75cm(316.2 kg/hm²)和90cm(223.4kg/hm²)相比,分别提高6.6%和50.9%。     

添喂两种植物雌激素对奶牛乳成分、血液生化指标和抗氧化性能的影响

试验旨在研究日粮中添喂两种植物雌激素及其组合物对奶牛乳成分、血液生化指标和抗氧化性能的影响。选取健康、年龄及泌乳期相近的40头荷斯坦奶牛,随机分为4组：1个对照组、3个试验组,每组10头。对照组饲喂全混合日粮,试验组在饲喂全混合日粮的基础上添加2.5 g大豆黄酮（试验Ⅰ组）、35 g芒柄花素（试验Ⅱ组）、1.25 g大豆黄酮和17.5 g芒柄花素（试验Ⅲ组）。预试期7 d,正试期120 d。分别于试验的第0、30、60、90、120天采集乳样,测定乳成分;颈静脉采集血液样品,3 500 r/min离心15 min,分离血浆,－20 ℃保存备用。结果表明,与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅲ组产奶量、乳蛋白产量均显著提高（P< 0.05）;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组乳糖产量显著提高（P< 0.05）;试验Ⅲ组T-AOC显著提高（P< 0.05）;试验Ⅱ、Ⅲ组GSH-Px活性显著提高（P< 0.05）;试验Ⅰ、Ⅱ组MDA含量极显著降低（P< 0.05）;乳脂产量、乳糖率及TP、ALB、GLB含量均无显著差异（P> 0.05）;CAT、SOD活性均有一定程度的提高。由此可见,日粮中添喂两种植物雌激素及其组合物能够在一定程度上提高荷斯坦奶牛的产奶量、乳蛋白含量和乳糖含量,能够提高奶牛机体抗氧化能力,增强免疫功能。     

高酸值米糠油酶法酯化脱酸研究

对脂肪酶Novozym 435催化高酸值米糠油酯化脱酸进行了研究.利用响应面分析法(RSM)优化脱酸条件.根据Box-Benhnken中心组合试验设计原理对试验条件进行优化,在分析各因素显著性及其交互作用的基础上,得出米糠油酯化脱酸最佳工艺参数为:酶质量分数1.1％、甘油添加量0.42 mg、温度56.4℃、反应时间23.2 h.实际测得脱酸后米糠油酸值(KOH)由56 mg/g降为5.04 mg/g,游离脂肪酸酯化率达到91％,与模型预测值基本相符.     

覆盖栽培对烤烟叶绿素、酶活性及丙二醛含量的影响

研究了烤烟大田栽培期间,旺长期揭膜培土后垄上覆盖稻草与旺长期揭膜培土、全生育期覆盖地膜、全生育期覆盖稻草等4种垄体覆盖方式对烤烟叶片叶绿素含量、有关酶活性和丙二醛含量的影响。结果表明：旺长期揭膜培土后垄上覆盖稻草的处理较其他3种处理的叶绿素含量、硝酸还原酶（NR）活性和过氧化物酶（POD）活性略高,而丙二醛（MDA）含量略低;该农艺措施下,上述指标的变化态势与烤烟生长代谢的调控机理基本一致,在信阳乃至黄淮烟区都具有推广利用价值。     

饲粮添加复合酶和制粒对肉仔鸡生产性能、养分代谢率及血液指标的影响

试验旨在研究不同浓度复合酶制剂对肉鸡生产性能、养分代谢率及血液指标的影响。试验采用两因素2×3析因设计,试验设3个复合酶水平(0、253 g/t和335 g/t),2个加工工艺(不制粒、制粒)。选择1日龄的AA+肉鸡(公、母各半混养)1 200只,随机分为6个组,每组4个重复,每个重复50只,使各处理组之间鸡的重量差异不显著(P0.05),试验期28 d。结果表明:复合酶提高了肉鸡平均日增重、降低了料重比,335 g/t+制粒组效果较优;复合酶提高了肉鸡对养分的利用率,335 g/t+制粒组效果较优;复合酶提高了血糖含量、降低了血液中尿素氮含量,335 g/t+制粒组效果较优;复合酶提高Ig G含量,335 g/t+制粒组效果较优。由此可见,杂粕日粮中添加复合酶表现出较好的作用效果,以335 g/t+制粒组对肉鸡的作用效果最好。     

中国东西部中小城市景观格局及其驱动力

中小城市的数量及其所承载的城市人口迅速增加是当今和将来全球城市化的最为显著的特征之一.因此,对中小城市的发展规律及其城市化带来的生态和环境影响的研究日趋重要.然而,迄今为止的大多数有关城市化的研究聚焦于大型城市.通过对长三角地区和新疆地区24个中小城市的景观格局分析,结合人口经济数据,探究这两个地区总体城市景观格局的变化,城市间景观格局变化的变异性,以及城市景观格局变化的驱动力,并在此基础之上进行两地区间的对比分析.结果表明,1986年至2000年15a间,长三角地区和新疆地区中小城市的总体景观格局变化基本相似,景观的破碎化程度均不断上升,斑块形状更趋于不规则,景观多样性呈小幅增加;长三角地区中小城市间景观格局变异性下降,而新疆地区中小城市间景观格局变异性上升.长三角地区中小城市景观格局变化的驱动力主要是人口的增加和流动所导致的城市景观变化,新疆地区则为人口的增加和流动所导致的耕地景观面积增加.研究结果有助于解决我国中小城市急速发展所带来的一些生态和环境问题,以及通过土地利用规划来改善我国中小城市的可持续发展.     

Development and validation of an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay for the screening of tylosin and tilmicosin in muscle, liver, milk, honey and eggs

Incorrect use of tylosin and tilmicosin could result in allergy and select resistance. To monitor the illegal use of these antibiotics in animals, a monoclonal-based indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) has been established. Several haptens were synthesized and conjugated to carrier protein. Female Balb/c mice were inoculated with the four different conjugates to produce monoclonal antibodies according to the schemes of immunization. Aftercell fusion and culture several times, nine hybridoma cell lines were isolated. Only one, 3C4 that has isotype IgG2a, was selected for detailed study. The cross-reactivity of the monoclonal antibody 3C4 to tylosin and tilmicosin was 100% and 51% respectively. The standard curves based on the tylosin and tilmicosin matrix calibration ranged from 2.5 to 40 μg L(-1), with an IC(50) value of 6.1 μg L(-1) and 12.1 μg L(-1), respectively. The limits of detection of the ic-ELISA ranged from 5.1 μg kg(-1) to 13.8 μg kg(-1) in edible animal tissues. The recoveries were 74.1% to 120.7% with less than 18.6% of the coefficient of variation when tylosin and tilmicosin were spiked in various biological matrices with the concentrations of 25.0-200.0 μg kg(-1). Good correlations between the results of the ic-ELISA and high performance liquid chromatography were observed in the incurred tissues. These results suggest that the ic-ELISA is a sensitive, accurate and low-cost method that would be a useful tool for the screening of the residues of tylosin and tilmicosin in muscle, liver, milk, honey and eggs.     

B亚型禽偏肺病毒逆转录套式PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法.采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415 bp的目的片段.此方法具有高度特异性和敏感性,以H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒作为模板进行扩增,结果均为阴性.经检测,该方法第1次PCR扩增的敏感性为102 copies/μL,第2次扩增的敏感性为102 copies/μL,第2次扩增敏感性比第1次高105倍.应用本方法对采自山东省不同地区的64份可疑临床病料进行检测,最终从64份疑似病料中检测出37份为阳性.结果表明,所建立的套式PCR检测方法具有特异、敏感、实用等优点,为B亚型禽偏肺病毒的快速诊断以及深入研究奠定了基础.