气调包装结合臭氧预处理保鲜鲟鱼片

本文研究了气调包装(MAP,50%CO2+10%O2+40%N2)结合臭氧处理用于鲟鱼片保鲜的效果。通过以未经过臭氧预处理的MAP做对照组,试验分别研究了臭氧预处理10min、20min和30min对鲟鱼片MAP保鲜期的影响。结果表明:臭氧预处理能有效减少鲟鱼片原始的带菌数,减缓贮藏期间细菌总数和TVB-N值的增加速度,以及减缓感官品质的下降。综合分析臭氧预处理时间对鲟鱼片贮藏期间感官品质、细菌总数、TVB-N值和肌肉持水力的影响,确定以臭氧预处理20min效果最好,与对照组比较,贮藏货架期延长3～5d。     

利用变性梯度凝胶电泳分析正红菇菌根围土壤真菌群落多样性

以正红菇（Russula griseocarnosa）菌根围土壤为研究对象,通过提取土壤基因组DNA,以通用引物扩增真菌18S rRNA基因V1+V2区,将PCR产物进行变性梯度凝胶电泳（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis）,获得土壤微生物群落的DNA特征指纹图谱,并对图谱中的优势条带回收测序,通过Blast进行同源性比对并构建系统发育树,进而分析正红菇菌根围真菌群落组成及多样性。同源性比对结果表明,在回收测序的19条DGGE条带中,4条为非真菌真核生物序列,系统发育分析显示全部序列可以分为4类菌群,GroupⅠ主要为担子菌门（Basidiomycota）真菌,GroupⅡ主要为子囊菌门（Ascomycota）真菌,GroupⅢ为未知真菌,GroupⅣ主要为节肢动物门生物（Arthropoda）。     

桑叶粗多糖最佳提取工艺研究

为探究桑叶粗多糖最佳提取工艺,利用正交试验设计对桑叶粗多糖的提取工艺进行优化。以桑叶粗多糖得率为评价指标,以加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为考察因素,设计3因素3水平正交试验,采用苯酚一硫酸比色法进行桑叶粗多糖含量测定,比较得出桑叶水提物的最佳制备工艺,并在此基础上考察不同浓度乙醇对桑叶粗多糖提取的影响。结果显示,煎煮次数对桑叶粗多糖提取率影响最大,当加水倍数为25倍,煎煮时间为2 h,煎煮2次时桑叶水提物中桑叶粗多糖提取率最高,为4.94%。但结合影响因素分析,最终确定桑叶水提物的最佳提取工艺为加25倍水,煎煮2 h,煎煮3次。乙醇浓度对桑叶粗多糖的含量及得率影响很大,70%乙醇醇沉所得水提物中桑叶粗多糖质量最大,40%乙醇醇沉所得桑叶粗多糖含量最高,平均含量达41.5%,显著高于其他乙醇浓度（P < 0.05）,提示乙醇浓度越高,桑叶粗多糖含量越低,但得率越高。桑叶粗多糖最佳提取工艺为：加水倍数为25倍,煎煮时间2 h,煎煮3次,采用70%乙醇醇沉。     

绿豆高密度分子遗传图谱的构建

【目的】在前期研究的基础上,进一步利用绿豆基因组SSR、EST-SSR、STS和普通菜豆基因组SSR等标记构建绿豆遗传连锁图谱,为绿豆重要性状相关基因的定位、克隆及分子标记辅助选育新品种等研究搭建技术平台。【方法】利用澳大利亚引进的Berken（高感豆象绿豆栽培种）× ACC41（高抗豆象绿豆野生种）及其重组自交系（recombinant inbreed line,RIL）群体,对6 686对引物进行PCR扩增及多态性筛选,包括6 100对绿豆基因组SSR、149对EST-SSR、13对STS和424对普通菜豆基因组SSR引物,将亲本间多态性引物,进一步分析重组自交系群体。结合前期研究的分子标记数据,利用Mapmarker/Exp 3.0软件构建遗传图谱,并设置LOD≥3.0,最大图距50.00 cM。用Joinmap 4.0软件进行图谱整合。【结果】用2个亲本共筛选了6 686对SSR引物,共有3 691对引物有稳定的扩增产物,得到有多态的引物有588对。其中,通过磁珠富集法开发的绿豆SSR引物6 100对,有效扩增3 459对,有效扩增率56.7%,得到多态性引物559对;通过转录组测序开发的绿豆MGCP引物149对,有效扩增126对,有效扩增率84.6%,得到多态性引物21对;通过磁珠富集法开发的菜豆SSR引物424对,有效扩增97对,有效扩增率22.9%,得到多态性引物6对;绿豆STS引物13对,有效扩增9对,有效扩增率69.2%,得到多态性引物2对。表明不同来源和种类的SSR引物在RIL群体亲本中的有效扩增率有明显差别,绿豆EST-SSR引物（84.6%）最高,绿豆STS引物（69.2%）和SSR引物（55.7%）次之,菜豆SSR引物（22.9%）最低。获得一张含有585个标记（499个SSR标记、74个RFLP标记、9个STS标记和3个RAPD标记）的绿豆遗传图谱,图谱总长732.9 cM,包括11个连锁群,每个标记间的平均距离为1.25 cM,平均长度为66.63 cM。每个连锁群长度为45.2-112.8 cM,每条染色体上面的标记数为35-92个,平均53.18个。标记位点数最多的连锁群LG1含92个标记,长度为112.8 cM;标记位点数最少的连锁群LG11仅含有35个标记,长度为48.7 cM。对图谱的585个标记位点进行χ2测验,在P＜0.05和P＜0.01条件下,分别有79个和151个标记表现为偏分离,占总标记位点数的39.3%。【结论】构建了一张目前国内外发表的标记数最多、密度最高的绿豆遗传连锁图谱。     

人工饲养对黄喉拟水龟繁殖力的影响

在自然温度，人工环境及工人饲养条件下，黄喉拟水龟可以自然产卵，产卵高峰期在5－6月份，产卵时间有逐年集中并前移的趋势，饲养2年半中，产卵次数，产卵量及受精率逐年提高，产卵量增长了134％，受精率提高了7．8％，产卵次数增加到99％，产卵高峰期，受粗率,高峰期与日粮需求高峰期时间一致，环境的适应及饲料的质和量是决定繁殖力高低的主要因子。     

草炭水溶解态有机质与金属离子络合稳定常数的测定

采用离子交换平衡法测定草炭水溶解态有机质与 Cu2 +、Pb2 +、Zn2 +、Cd2 + 4种金属离子 ,在 2种 p H条件下的络合稳定常数 .结果表明 ,金属离子与草炭水溶解态有机质通常形成混合或多核络合物 ;2种 p H条件下的络合配位数和稳定常数序列均为 :Cu2 + >Pb2 + >Zn2 + >Cd2 + ,高 p H条件下 ,络合配位数和稳定常数均明显增大     

大菱鲆胚胎生长与核酸关系的研究

对大菱鲆胚胎发育过程进行观察,研究胚体的生长性能以及核酸、蛋白的变化,分析生长性状与生化指标间的关系。结果表明：（1） 在不同发育时期,大菱鲆胚体长度呈现“缩小-膨大-再缩小-再膨大”的变化过程,在受精后5 h 40 min出现最小值0.998 mm,在孵化期出现最大值1.089 mm。（2） 油球在卵裂期之前逐渐增大,在卵裂期之后逐渐缩短;在受精后9 h 40 min的多细胞期达到最高值0.192 mm,在受精后65 h达到最低值0.176 mm。（3） 胚体质量在原肠期之前呈增大趋势,原肠期之后呈降低趋势;在受精后7 h 30 min的128细胞期出现最低值0.340 mg,在9 h 40 min的多细胞期出现最高值0.674 mg。（4） RNA/DNA和蛋白质/DNA比率变化表明,大菱鲆胚胎发育至卵裂期后,胚体的生长以细胞增殖为主直至囊胚期;之后胚体生长以细胞增大为主直至原肠期;胚胎发育至原肠期后,胚体的生长以细胞增殖为主直至器官形成期;之后胚体生长以细胞增大为主直至孵出;即大菱鲆胚体的生长是细胞增殖和细胞增大周期性交替的过程。（5） 胚胎形态性状和胚体质量跟生化指标间均为“二项式”关系,而且RNA/DNA比率是与胚胎生长性状关系密切的指标。     

miRNA-181b在牛腺垂体中的表达规律及其调控作用研究(英文)

[目的]探索miRNA-181b在成熟(18月龄)和未成熟(1月龄)牛腺垂体中差异表达量及其调控功能。[方法]通过构建成熟(18月龄)和未成熟(1月龄)的延边黄牛腺垂体组织miRNAcDNA文库,对文库中的miRNA进行Solexa高通量深度测序,并对公牛腺垂体中的miRNA进行鉴别。从测序结果中挑选出具有差异表达的miRNA-181b,经实时荧光定量PCR验证其在不同发育期延边黄牛腺垂体中的表达规律,并通过TargetScanS预测miRNA-181b的靶基因。[结果]miRNA-181b在不同发育期牛腺垂体表达量存在显著差异,1月龄公牛腺垂体中miRNA-181b表达量是18月龄的4.05倍。miRNA181b与FSHβ基因3 非编码区838 ~844碱基可能是特异结合,其结合碱基为UGAAUGUA。[结论]该研究为FSHβ的转录后调控研究提供了理论依据。     

水牛犊牛血浆外泌体的分离与鉴定

研究旨在从水牛犊牛血浆中分离外泌体,并对分离的外泌体进行分子生物学特征分析和鉴定。采用差速离心法分离3头水牛犊牛的血浆外泌体,并在透射电子显微镜下观察其形态,使用纳米粒度及Zeta电位仪对提取的外泌体进行粒径大小分析,应用Western blotting方法检测外泌体标记蛋白钙联蛋白（Calnexin）、肿瘤易感基因101（TSG101）、CD9、CD81在3头水牛犊牛血浆外泌体中的表达情况。结果显示,从水牛犊牛血浆中分离的外泌体形态多为圆形和椭圆形,直径在30~150 nm;Western blotting检测结果表明,在水牛血浆外泌体表面,特异性蛋白Calnexin、TSG101和CD81阳性表达,CD9不表达。本研究从形态学和分子生物学特征等方面证实研究获得的提取物为外泌体,由此说明,差速离心法可以成功分离提取水牛犊牛血浆中的外泌体,为水牛外泌体的后续研究提供了重要技术基础和参考。     

皱纹盘鲍幼鲍室内越冬阶段电剥离技术的研究

对室内越冬幼鲍进行５种不同方式的剥离实验,以电剥离与温差刺激相结合的方式为最佳,单一使用温差刺激的剥离效果最差,酒精麻醉等其余３种幼鲍剥离方式的效果无显著差异。