肉牛业牛源问题思考

近几年,我国肉牛业发展遇到了牛源紧缺的问题,其主要原因是牛繁殖率低,牛源供给不足;肉牛繁育部门经济效益差,没有生产犊牛的积极性;牛个体的产肉量低,生产单位牛肉需要屠宰更多的牛;肉牛繁育户组织化程度低,一方面,实力弱小,没有代言人,在产业链中处于弱势地位,另一方面,难以提高生产水平和市场竞争力。解决牛源紧缺问题,要提高牛的繁殖效率．利用奶公牛产肉,增加牛源供给;要提高个体产肉量,少杀牛而多产肉,缓解牛源需求;借鉴国外经验,建立和发展农业合作社,提高技术、加强管理,提高应对市场的能力和提高影响力,从而提高肉牛繁育户的经济效益和权益。     

不同剂量环磷酰胺对昆明小鼠肝肾组织的损伤作用研究

为研究不同剂量的环磷酰胺对小鼠肝肾组织及功能的损害程度,试验选取40只5周龄健康雌性昆明小鼠,随机分为5组,除对照组外,其余4组小鼠连续3 d分别腹腔注射40、80、120及160 mg/（kg·BW）环磷酰胺溶液,注射后第7天采集肝脏和肾脏组织样品及血清,制备石蜡组织切片及透射电镜切片,观察肝脏和肾脏的组织学变化,检测血清中甘胆酸（CG）、胆碱酯酶（ChE）、血清前白蛋白（PA）、总胆汁酸（TBA）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）、尿酸（UA）含量/活性。结果显示,环磷酰胺可引起小鼠肝肾组织病理损害,呈剂量依赖性,肝脏比肾脏更早出现损伤。石蜡切片及透射电镜切片观察结果显示,环磷酰胺对肝脏的毒性作用主要表现在肝索紊乱、肝血窦扩张、微胆管淤胆、门管区及中央静脉周围炎性细胞浸润及纤维增生、组织间出血、肝细胞出现脂肪变性及气球样变性,凋亡及坏死细胞增多。肾脏组织损伤主要表现在出血及纤维增生,肾小管上皮细胞胞浆空泡样变、线粒体损伤、核固缩,上皮细胞基底膜增厚。环磷酰胺对膀胱的损害不严重。与对照组相比,40~160 mg/（kg·BW）剂量组小鼠血清中ChE活性及PA水平,120~160 mg/（kg·BW）剂量组AST活性,80~160 mg/（kg·BW）剂量组BUN水平及80 mg/（kg·BW）剂量组UA水平均显著升高（P<0.05）;其余生化指标与对照组差异不显著（P>0.05）。以上结果表明,环磷酰胺注射剂量在80~120 mg/（kg·BW）时可引起昆明小鼠肝脏和肾脏组织及细胞明显的病理损伤。该研究结果可为选择合适的环磷酰胺注射剂量用以制备动物肝脏免疫抑制模型提供试验依据。     

气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A （CctA）基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a （+）,双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍（Ni）柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为：抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1：8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D_{450 nm}值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。     

微生物发酵饲料对肉牛免疫机能的影响

试验旨在研究微生物发酵饲料对肉牛免疫机能的影响。选择90头月龄相近、体型结构相似、体重(373.4~425.3) kg的健康西杂牛,采用随机区组试验设计,将90头牛分为3组,每组5个重复,每个重复6头牛。对照组饲喂基础精料日粮,试验Ⅰ、Ⅱ组分别用25%和40%微生物发酵饲料替代基础精料,各组每头牛每天饲喂相同重量的精料(4 kg)和玉米秸秆颗粒(2.7 kg),酒糟自由采食,拴系饲喂,自由饮水;预试期10 d,正试期48 d。结果显示,与对照组相比,2个试验组中血清总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白A、G、M浓度显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)提高,谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性及丙二醛浓度均显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)下降;且总抗氧化能力和总超氧化物歧化酶的活性极显著增强(P＜0.01)。提示,利用微生物发酵饲料能提高肉牛免疫力。     

孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育研究

卵黄总免疫球蛋白Y(IgY)含量可以作为鸡胚健康状态的一种标志。本试验旨在研究孵化期卵黄总IgY动态变化与鸡胚生长发育规律。选取正常孵化的2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、21日胚龄种蛋各20个,对胚蛋、胚体、心脏、肝脏、肌胃、肠道等进行分离和称重,构建鸡胚生长模型;采集卵黄并制备卵黄总IgY样品,使用鸡免疫球蛋白Y的ELISA试剂盒检测卵黄总IgY水平。结果表明:孵化期卵黄总IgY水平为47.928~1813.484μg,鸡胚健康状况良好;2~12日胚龄卵黄总IgY水平缓慢下降,12日胚龄后卵黄总IgY水平急剧下降,14~16日胚龄卵黄总IgY水平下降幅度最大,卵黄IgY动态变化与鸡胚生长发育规律吻合;二次、三次、S三种非线性生长模型都能较好描述白来航鸡胚生长规律,3种曲线的拟合度均在0.99以上,其中S模型的拟合度最高,达到0.998;胚体重、心脏重、肝脏重、肠道重和肌胃重随着胚龄的增大而增加,各器官在胚胎发育中期的相对生长强度大于后期,各个器官在孵化期生长发育存在不平衡性。     

非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。     

鸡组织滴虫病PCR病原学诊断方法的建立

为建立鸡组织滴虫(H.meleagridis)的PCR检测方法,本研究以确诊的感染火鸡组织滴虫的阳性鸡的肝组织DNA为模板,设计针对18S rRNA基因高度保守的特异性引物,建立组织滴虫病的PCR诊断方法。敏感性试验显示阳性样品组织DNA的最低检出限为4 ng/μL。特异性试验表明与其他常见鸡寄生虫的DNA样品均无交叉反应。该PCR方法对临床样品的检出率为100%,与组织病理学诊断结果符合率为100%。该诊断方法敏感、特异,可以用于组织滴虫病的临床诊断。     

肉牛冻精细管无伤害制作技术

本文对日本和牛冻精细管生产过程中的种公牛饲养管理、采精管理、稀释液的配方及其配制过程,稀释过程,冷冻过程进行了详细描述。这项技术使细管冻精的平均活力由的0.3提高到0.4以上,大幅提高了冻精生产质量。     

播期对冀西北坝上农牧交错区青贮玉米产量和品质的影响

为确定冀西北坝上地区青贮玉米(Zea mays L.)适宜的播种日期,本研究以青贮玉米'德美亚1号'、'院军1号'、'巡天3号'、'德美亚2号'4个品种为材料,设置S1(5月2日)、S2(5月7日)、S3(5月12日)3个播期,开展播期试验,探究3个播期下青贮玉米的株高、茎粗、叶面积指数、叶绿素含量等农艺性状及产量、品...     

四川地区藏猪戊型肝炎病毒的检测和遗传演化分析

旨在调查四川地区藏猪戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）的流行情况和遗传演化,作者用RT-PCR法对2018—2020年采集自四川省甘孜藏族自治州和阿坝藏族自治州的22个藏猪场332份藏猪粪便样本进行HEV检测,并对阳性样本进行基因分型。RT-PCR检测结果表明HEV核酸阳性率为20.48%（68/332,95% CI=16.3%~25.2%）,22个规模藏猪场中HEV猪场阳性率为77.27%（17/22,95% CI=54.6%~92.2%）,健康样本阳性率为2.86%（3/105,95% CI=0.6%~8.1%）,腹泻样本阳性率为28.63%（65/227,95% CI=22.8%~35.0%）,系统进化分析显示所有阳性株均为G4型。为了进一步研究该地区流行毒株的演化过程,以贝叶斯进化分析软件进行分歧时间估算,结果表明,藏猪流行毒株的分歧时间最早为1999年,最晚为2016年。并分别从每年的样本中挑选1份阳性样本得到全基因组序列,核酸序列相似性为89.5%~93.1%。通过对3条全基因组重组分析发现SWU/301/2019存在重组现象,SWU/301/2019重组区域位于ORF1的3 746—4 655 bp。本研究首次对四川地区藏猪源HEV进行调查,结果表明四川藏猪中存在一定程度的HEV感染,为四川地区对藏猪感染HEV的防治以及深入研究四川藏猪源HEV遗传变异及生物学特性提供了参考依据。