不孕奶牛血液生理生化指标分析

为了探究奶牛不孕症的发病特点,有效防治不孕症的发生。本试验对患有久配不孕、子宫增生、子宫内膜炎、卵巢囊肿的奶牛进行血液生理生化指标测定。采用全自动血细胞分析仪和Vet Test生化分析仪对患病奶牛与健康奶牛的全血进行血液常规指标和生化指标检测。发现子宫内膜炎引起白细胞数量显著增多（P<0.05）;而红细胞数、血红蛋白含量、淋巴细胞百分数、单核细胞百分数和中性粒细胞百分数在四种病例中均无显著变化;卵巢囊肿可导致血液总蛋白量（TP）显著增加(P<0.05);丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALKP）和血糖（GLU）在各种病例中均无显著变化（P>0.05）;久配不孕、子宫内膜炎和卵巢囊肿均能显著降低血液中钙离子（Ca）浓度（P<0.05）;并且,久配不孕、子宫内膜炎和卵巢囊肿均能显著增高血液中磷离子（PHOS）浓度（P<0.05）,打破钙磷平衡;同时,在所有分组中发现,血糖浓度均低于正常标准值。由此可见,血液中钙磷平衡可以作为辅助指标预测奶牛不孕症的发生。在早期疾病诊断过程中,保持血液中钙磷比例平衡是防治奶牛不孕症发生的重要手段之一。     

程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3基因表达的研究

试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎,利用激光共聚焦和实时荧光定量PCR技术对各组胚胎进行细胞免疫荧光和C3 mRNA相对表达量的检测。结果发现,程序化冷冻前后的正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3在转录和翻译水平均有表达;正常孵化囊胚经冷冻处理后C3 mRNA相对表达量显著上调（P < 0.05）;休眠胚胎冷冻后C3 mRNA相对表达量与冷冻前相比显著下调（P < 0.05）;冷冻前休眠胚胎C3 mRNA相对表达量显著高于冷冻前正常孵化囊胚（P < 0.05）;冷冻后休眠胚胎C3 mRNA相对表达量显著低于冷冻后正常孵化囊胚（P < 0.05）。结果表明,胚胎中C3基因在转录水平的下调表达对胚胎抗冻具有一定的积极作用,C3基因很可能参与了胚胎抗冻过程的相关调控。     

奶牛子宫炎性腔液外泌体小RNA分布和组成分析

【目的】筛选奶牛子宫内膜炎诊断新型标志。【方法】采用贝博试剂盒分别从健康奶牛、患子宫内膜炎奶牛的子宫腔液中分离外泌体,透射电子显微镜检测外泌体形态和粒径大小,蛋白免疫印迹法检测外泌体蛋白标记CD9的表达,Trizol提取外泌体内RNA,Agilent 4200生物分析仪检测RNA的分布与组成。【结果】透射电子显微镜下奶牛子宫腔液外泌体呈囊泡形,有完整的膜结构,粒径大小为50～150nm之间;蛋白免疫印迹法检测到外泌体内均有CD9表达;生物分析仪检测显示子宫内膜炎症改变了子宫腔液内小RNA长度分布和组成。【结论】子宫腔液中小RNA变化可以作为奶牛子宫内膜炎症诊断的新型标志。     

猪深部输精技术对母猪繁殖性能的影响

为探讨深部输精对母猪繁殖性能的影响,本试验以339 头经产大白母猪为研究对象,采用深部输精和常规输精为主要配种方式。比较分析季节、输精量、公猪精子种类、冻精及母猪同期发情等条件对猪群深部输精效率的影响,探寻在配种方面最佳的精液使用量、输精条件和精液种类。结果表明：夏季和冬季子宫深部输精组的产仔数、产活仔数和产健仔数均高出常规输精组。深部输精量为40 mL时各指标最好。输入同等量的精子,常规输精组的产仔数及活仔数均显著低于深部输精组。不同种猪精液各方面差异不显著。鲜精同期发情组在受胎率、产仔数、产活仔数均高于鲜精和冻精未同期发情组;后两者在产仔数量、产活仔数量和弱仔数量方面差异不显著。综上,深部输精技术在一定程度上能够提高母猪繁殖性能,增加猪场经济效益。     

TEKT4和TEKT5在蛋用海兰褐种公鸡精液冷冻前后差异表达的研究

摘 要：本试验通过研究TEKT4和TEKT5基因在鸡精子抗冻特性中发挥的生物学功能,为今后在家禽产业中改进鸡精液冷冻效果、提高其冷冻保护率奠定理论基础。随机抽取30只海兰褐种公鸡,收集鸡精液样本并检测质量。采用RT-PCR方法检测冷冻前、后TEKT4和TEKT5基因的表达水平。结果表明,在鸡精子冷冻后TEKT4和TEKT5的差异倍数分别是0.3481、0.5741,表达量均显著下调。因此,我们推测TEKT4和TEKT5基因与鸡精液的抗冻性相关,可作为今后鸡精液抗冻性研究的候选基因。     

RNA-seq数据差异表达分析流程比较

为选择出合适的基因差异表达分析流程,本研究基于松辽黑猪和长白猪脂肪转录组数据,对TopHat2、HISAT2、STAR3种比对工具以及DESeq2、edgeR、limma 3种差异表达基因筛选工具的性能进行分析,并结合KEGG通路富集结果进行综合评价。结果表明：1)HISAT2拥有最快的运行速度,STAR拥有最高的唯一比对率。经综合考虑,本研究选取HISAT2数据进行后续差异表达基因筛选分析。2)DESeq2筛选出616个差异基因,edgeR筛选出890个差异基因,limma筛选出829个差异基因,三者有246个差异基因重合。3)DESeq2、edgeR、limma的上调差异表达基因分别富集到110、108和142条通路,其中有72条通路重合,而下调差异表达基因分别富集到190、247和177条通路,其中有158条通路重合。本研究推荐使用HISAT2进行基因组比对。当研究不存在生物学重复时,推荐使用edgeR进行差异表达基因筛选。而为了减少分析过程中的假阳性,可以选择DESeq2或者两个及以上工具的差异表达基因的交集。本研究将有助于研究人员从转录组数据中获得更好、更全面的生物学见解。     

ssc-miR-17-3p调控脂肪沉积的靶基因生物信息学分析

[目的]找到与猪脂肪沉积相关的候选靶基因,为ssc-miR-17-3p参与脂肪沉积调控机制研究提供相关理论依据. [方法]利用miRDB,miRWalk和TargetScan数据库获得了miRNA-17-3p候选靶基因;利用DAVID和KOBAS数据库对候选靶基因进行了KEGG/GO功能富集分析,并通过Cytoscape可视化工具构建了其可能参与的调控网络.[结果]结果表明,ssc-miR-17-3p候选靶基因TSTD2、CSDE1、SCGB1 D1、TEAD1、GPD2、NFATC3、MBNL1、PPP1R12B、CAMK2D、HBEGF、LRRC28、UBE2D4、MAP4与脂肪沉积有关.GPD2、CAMK2D、HBEGF等可能在催产素信号通路、MAPK信号通路、GnRH信号通路,以及脂质代谢、甘油磷脂代谢、糖醇代谢、大分子代谢,细胞代谢等过程发挥了作用.[结论]ssc-miR-17-3p可能通过调控多个靶基因,信号通路和生物过程影响脂肪的沉积与代谢,其功能有待进一步实验室试验验证.     

circRNA的生物学功能及其在家畜动物上的研究进展

环状RNA（circRNA）是一类内源性的环状非编码RNA。目前circRNA的研究主要集中在癌症、肿瘤等方面,在家畜动物中的研究较少且主要集中在circRNA的信息挖掘。本文对circRNA的生成方式、分类、研究方法及生物学功能等方面进行了总结,对其在家畜动物肌肉发育、脂肪沉积等方面的研究进展进行了归纳,对目前家畜动物circRNA研究中存在的问题进行了分析总结,并对其未来的研究方向进行了展望。     

miR-22-3p/5p抑制小鼠成肌细胞增殖的功能研究

[目的]丰富家畜骨骼肌生长发育的分子调控机制.[方法]选择能够在低血清诱导条件下分化为多核肌管的小鼠成肌细胞(C2C12)作为细胞模型,在C2C12细胞中转染携带荧光标记的mmu-miR-22-3p、mmu-miR-22-5p模拟物;利用实时荧光定量PCR法检测mmu-miR-22-3p/5p在C2C12细胞中的表达;采用CCK-8法、流式细胞术检测mmu-miR-22-3p/5p对C2C12细胞增殖的影响.[结果]实时荧光定量PCR的结果显示,在C2C12细胞增殖的过程中,mmu-miR-22-3p的表达量在增殖第4天显著升高(P＜0.05),mmu-miR-22-5p的表达量逐渐升高(P＜0.01).CCK-8细胞增殖的检测结果显示,分别转染mmu-miR-22-3p模拟物组的OD值均低于NC对照组;流式细胞术的结果发现,转染mmu-miR-22-3p后,S期的C2C12细胞数量极显著低于NC对照组(P＜0.01).转染mmu-miR-22-5p后,S期C2C12细胞数低于对照组,但差异不显著.[结论]mmu-miR-22-3p和mmu-miR-22-5p对小鼠成肌细胞的增殖过程具有不同程度的抑制作用.