PGE2可以恢复缺少内源性PGs的牛体外早期胚胎的正常发育

旨在研究外源添加PGE2(前列腺素E2)对缺少内源性前列腺素(PGs,Prostaglandins)的牛IVF早期胚胎外发育的影响。在牛IVF胚胎中抑制内源前列腺素合成再外源添加PGE2,以观察PGE2对牛IVF胚胎发育的作用以及起作用的胚胎阶段。并检测PGE2受体的mRNA水平。抑制胚胎内源性前列腺素合成限速酶COX-1和COX-2会使牛IVF胚胎卵裂率、8-16细胞率、囊胚率以及孵化率显著低于常规培养组;而外源添加PGE2能够补偿IVF胚胎因缺少内源性PGs导致的损伤,基本抵消COX-1和COX-2的特异性抑制剂对牛早期胚胎体外发育产生的不利影响;PGE2的添加浓度以1×10-8mol/L为宜,并且其补偿作用发生在8细胞阶段之前。利用半定量RT-PCR未能检测到以上6个阶段IVF胚胎上EP1、EP2、EP3和EP4四种受体的mRNA。PGE2可以恢复缺少内源性PG的牛体外IVF早期胚胎的正常发育。     

GlyCAM-1在自然发情绵羊子宫中的表达研究

旨在研究GlyCAM-1 在绵羊自然发情子宫组织中的表达变化,以期为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1 的表达受孕酮诱导调控的推测提供支持。运用实时荧光定量PCR和免疫印迹法对绵羊自然 发情后子宫第10、12、14、16 和18 天GlyCAM-1 mRNA和蛋白表达变化进行检测。实时荧光定量PCR结果显示：在绵羊发情后的第10~18 天之间,子宫组织中GlyCAM-1 的表达呈现先下降再上升的趋势,发情后的第10 天GlyCAM-1 在转录水平表达出现峰值,并且显著的高于另外4 个时段(P<0.05),第12 天GlyCAM-1 mRNA水平显著下降(P<0.05),第14~16 天的表达量保持相对恒定,第18 天GlyCAM-1 mRNA水平再次显著升高(P<0.05),但仍低于第10 天水平(P<0.05)。Western Blotting 检测结果显示：绵羊在自然发情后的第10~18 天,子宫内膜上的GlyCAM-1 蛋白表达量的变化亦呈现出先下降后上升的趋势,与其他4 个时间点相比第10 天的蛋白表达量达到峰值(P<0.05),第12~16 天GlyCAM-1 的蛋白表达量没有显著变化(P>0.05),GlyCAM-1 的蛋白表达量在第18 天显著升高(P<0.05)。GlyCAM-1 在转录与翻译水平的表达变化一致,呈现先下降后上升的趋势。该结果为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1 的表达可能受 孕酮诱导调控的推测提供支持。     

高低精子活力的鸡睾丸和附睾转录组系统分析

为探究精子活力与睾丸和附睾组织对种公鸡基因表达的影响,本研究选取精子活力存在显著差异的海兰褐种公鸡8只(高活力4只,低活力4只),屠宰后采集其睾丸和附睾组织进行转录组测序。利用DESeq2的双因素模块筛选不同精子活力组间和不同组织间的差异表达基因,并进行功能富集分析。结果表明：1)2个组织高精子活力和低精子活力组间的差异表达基因有112个;在高精子活力组高表达的基因有32个,低精子活力组高表达的基因有80个。高低精子活力间差异表达基因显著富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、产生IgA的肠道免疫网络和甘油磷脂代谢3条通路,其中CTRP3、TDRD5、KATNAL2、SOCS3和CSF3等差异表达基因可能是调控鸡精子活力的重要基因。2)睾丸和附睾组织间鉴定出9 212个差异表达基因,在睾丸组织高表达的基因有5 206个,在附睾组织中高表达的基因有4 006个。睾丸特异性高表达基因显著富集在细胞周期、细胞核质转运、减数分裂和甘油磷脂代谢等8条通路,其中YTHDC2、MEIG1、GTSF1、JAM3和SFMBT1等差异表达基因在精子发生过程中发挥着重要作用。在附睾组织高表达的基因参与了MAP...     

牛Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质的诱导表达及鉴定

为表达纯化出免疫原性良好的牛Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质,本试验通过对菌液IPTG诱导时间、温度以及诱导浓度的摸索确定了蛋白诱导最佳表达条件,利用重组蛋白小量表达确定目的蛋白以可溶性或包涵体蛋白存在,重组蛋白大量表达纯化出大量目的蛋白,通过Western blot鉴定目的蛋白免疫原性。结果表明：使用1MIPTG,18℃诱导表达18h可诱导表达出重组抑制素蛋白,经重组蛋白小量表达确定目的蛋白以可溶性形式存在,Western blog试验表明重组蛋白有较高的免疫原性。本试验诱导表达出可溶性、免疫原性较高的Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质,为后续制备抗抑制素α亚基抗体奠定了基础。     

硒对公鸡抗氧化和生殖激素及精子活力的影响

【目的】为寻找有机硒在家禽良种产业中应用提供理论基础。【方法】将144只30周龄健康蛋用种公鸡随机分为4个处理,每处理6个重复,每重复6只鸡,分别饲喂含不同浓度硒元素日粮(0、0.3、0.6、0.9mg/kg),试验期56d,于试验期末,采精测精子活力,取血液测抗氧化和生殖激素指标。【结果】日粮添加0.9mg/kg硒可显著提高种公鸡血浆抗氧化酶活性(P0.05),降低丙二醛(MDA)含量(P0.05);0.6mg/kg硒组可显著提高血浆黄体生成素和睾酮水平(P0.05),0.9mg/kg硒组卵泡刺激素水平显著高于其他各处理组(P0.05)。0.6mg/kg和0.9mg/kg硒组精子活力显著高于对照组(P0.05)。【结论】日粮添加酵母硒可增强种公鸡抗氧化能力,提高生殖激素水平和精子活力。硒浓度为0.6～0.9mg/kg时效果最佳。     

睾丸间质细胞线粒体调控睾酮合成的研究进展

睾丸间质细胞(Leydig cells, LCs)的主要功能是合成和分泌睾酮。在睾丸间质细胞内,以胆固醇为原料,位于线粒体外膜上的类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)促进胆固醇向线粒体内膜转运,在线粒体内膜胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side-chain cleavage cytochrome, P450scc)的催化下生成孕烯醇酮,而后通过光面内质网的羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase, 3β-HSD)和转运蛋白(translocator protein, TSPO)的共同作用合成睾酮。因此,睾丸间质细胞合成和分泌睾酮与线粒体密切相关,线粒体结构和功能的完整性直接影响睾酮的生物合成,而位于线粒体上的StAR和P450scc是睾酮合成的关键调控因子。睾酮能够促进雄性生殖器官发育成熟并维持其功能,对促进蛋白质合成(如肌肉、骨骼及生殖器官的蛋白质合成)具有重要意义。近年来,通过维持线粒体结构完整性和改善线粒体氧化损伤、线粒体生物发生等功能进而促进睾酮的合...     

猪lncRNA TCONS-00035174基因全长克隆及组织表达

[目的]为探明lncRNA TCONS-00035174对猪肉品质影响作用.[方法]PCR、RACE-PCR扩增和序列拼接获得TCONS-00035174基因全长编码序列,用NCBI-BLAST、DNAMAN、CPC、CNCI等生物信息学软件进行序列和分子特征分析;qPCR分析在松辽黑猪和长白猪各组织的表达情况.[结果]lncRNA TCONS-00035174全长为3889 bp,位于chr2:5855637～5859868区间;与雪貂同源性最高;在松辽黑猪的脾脏组织中表达最高,在长白猪中肺脏组织中表达最高,相同组织中,除肾脏外,松辽黑猪的表达均显著高于长白猪.[结论]lncRNA TCONS-00035174可作为猪肉肉质性状机制研究的候选基因,该基因的发掘可以为后续遗传育种提供参考.     

奶牛临床型子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

奶牛子宫内膜炎引起的母牛不孕,已成为制约我国养牛业发展的瓶颈。子宫内膜炎主要是由子宫内病原微生物感染所引起。为了了解北京地区患临床型子宫内膜炎母牛子宫内容物中的病原菌种类及其比例,此研究选取北京周边地区子宫内膜炎患病奶牛,对其子宫内容物中含有的细菌进行分离鉴定和药物敏感性试验。从77头临床型子宫内膜炎患病牛的子宫内容物中,共分离出13种共145株细菌,以蜡样芽孢杆菌、奥斯陆莫拉菌、大肠埃希菌、链球菌、苏云金芽孢杆菌、产吲哚金黄杆菌以及产碱假单胞菌为主,且均有一定程度的致病性和不同程度的耐药性,提示这些细菌可能会转变为致病菌,引起母牛发生子宫内膜炎。药敏试验结果表明,此次试验中分离得到的13种细菌均对环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考较为敏感,可以考虑作为牛场治疗奶牛子宫内膜炎的首选药物。     

RNA-seq数据差异表达分析流程比较

为选择出合适的基因差异表达分析流程,本研究基于松辽黑猪和长白猪脂肪转录组数据,对TopHat2、HISAT2、STAR3种比对工具以及DESeq2、edgeR、limma 3种差异表达基因筛选工具的性能进行分析,并结合KEGG通路富集结果进行综合评价。结果表明：1)HISAT2拥有最快的运行速度,STAR拥有最高的唯一比对率。经综合考虑,本研究选取HISAT2数据进行后续差异表达基因筛选分析。2)DESeq2筛选出616个差异基因,edgeR筛选出890个差异基因,limma筛选出829个差异基因,三者有246个差异基因重合。3)DESeq2、edgeR、limma的上调差异表达基因分别富集到110、108和142条通路,其中有72条通路重合,而下调差异表达基因分别富集到190、247和177条通路,其中有158条通路重合。本研究推荐使用HISAT2进行基因组比对。当研究不存在生物学重复时,推荐使用edgeR进行差异表达基因筛选。而为了减少分析过程中的假阳性,可以选择DESeq2或者两个及以上工具的差异表达基因的交集。本研究将有助于研究人员从转录组数据中获得更好、更全面的生物学见解。     

不孕奶牛血液生理生化指标分析

为了探究奶牛不孕症的发病特点,有效防治不孕症的发生。本试验对患有久配不孕、子宫增生、子宫内膜炎、卵巢囊肿的奶牛进行血液生理生化指标测定。采用全自动血细胞分析仪和Vet Test生化分析仪对患病奶牛与健康奶牛的全血进行血液常规指标和生化指标检测。发现子宫内膜炎引起白细胞数量显著增多（P<0.05）;而红细胞数、血红蛋白含量、淋巴细胞百分数、单核细胞百分数和中性粒细胞百分数在四种病例中均无显著变化;卵巢囊肿可导致血液总蛋白量（TP）显著增加(P<0.05);丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALKP）和血糖（GLU）在各种病例中均无显著变化（P>0.05）;久配不孕、子宫内膜炎和卵巢囊肿均能显著降低血液中钙离子（Ca）浓度（P<0.05）;并且,久配不孕、子宫内膜炎和卵巢囊肿均能显著增高血液中磷离子（PHOS）浓度（P<0.05）,打破钙磷平衡;同时,在所有分组中发现,血糖浓度均低于正常标准值。由此可见,血液中钙磷平衡可以作为辅助指标预测奶牛不孕症的发生。在早期疾病诊断过程中,保持血液中钙磷比例平衡是防治奶牛不孕症发生的重要手段之一。