一株牦牛源牛病毒性腹泻病毒毒株的分离鉴定及其遗传特性分析

通过病毒分离培养技术,从牦牛血清中分离获得一株致细胞病变的牛病毒性腹泻病毒(BVDV),命名为GSTZ毒株。经电镜观察,GSTZ毒株的直径在50～60 nm。按Karber法测算,该病毒滴度为5.0×10^6.5 mL^-1[以组织半数感染量(TCID₅₀)计]。利用反转录PCR(RT-PCR)测定GSTZ毒株的完整开放阅读框(ORF),全长11 691 nt,将其与参考毒株ORF在核酸序列和同义密码子使用模式等方面进行分析,确定GSTZ毒株在遗传学特性上属于基因1型家族成员。在GSTZ毒株的完整ORF中,A+U的出现频率要高于G+C,而且,病毒同义密码子的使用模式体现出对U/A结尾同义密码子使用偏嗜性高的遗传学特征。GSTZ毒株明显降低了使用含有CpG二联核苷酸的同义密码子的频率。这有助于降低病毒对宿主细胞免疫系统的刺激强度,从而促进病毒的复制增殖。研究成果可为进一步研究BVDV的相关分子机制提供试验材料,并为BVDV不同基因型的抗原关系分析与BVDV疫苗的研制奠定基础。     

血清加工废弃蛋白质水解工艺研究与优化

为了提高血液蛋白质的利用率,降低其对环境的污染,得到风味蛋白酶水解血清加工废弃蛋白质的最优工艺,试验以血清加工废弃蛋白质为原料,以水解度为评价指标,选择风味蛋白酶的添加量、温度、时间和pH值为自变量进行单因素试验,筛选部分因素进行三因素三水平的响应面试验,同时测定最优工艺条件下酶解液中多肽含量、肽段种类及游离氨基酸种类和含量。结果表明：最佳酶解工艺为酶添加量7 g/L,温度50.8℃,pH值5.0,时间5 h,在该条件下血清加工废弃蛋白质的水解度为(55.40±0.34)%。酶解液中多肽含量为(7.23±0.23)mg/mL;含有5 757种肽段,且分子质量集中在1 000 ku以下;含有18种游离氨基酸,总含量为37.085 7 g/L,占总蛋白质含量的46.36%。说明优化后的酶解工艺具有一定的合理性,在节约时间成本及投资成本的基础上具有较好的酶解效果。     

ST细胞库的建立及其生物学特性鉴定

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进ST细胞系,扩大培养后液氮冻存建立了种子细胞库和工作细胞库;细胞复苏后对细胞的活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、病毒、支原体检测均为阴性;染色体为19对;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库,可为开展ST细胞及猪瘟疫苗的研究提供基础理论依据和细胞资源。     

天祝白牦牛胚脸成纤维细胞分离培养与鉴定

为了研究牦牛胚胎成纤维细胞分离培养及鉴定方法,试验采取60日龄白牦牛胚胎,用组织块法分离纯化、传代培养,用免疫组织化学方法进行鉴定.结果表明:用组织块培养的成纤维细胞呈梭形,属典型成纤维细胞,免疫组织化学染色有95%以上细胞中间丝波形蛋白呈棕色着染(阳性).说明所培养的细胞为比较纯净的成纤维细胞.     

牛皮蝇蚴对皮革利用价值的影响

目前,甘南州有牛89万头,年产牛皮12万张,是甘肃省主要的牛革产区。但由于牛皮蝇蚴对皮革造成的大量“虻眼”和“虻斑”位于牛皮的优质部位背脊两侧,在加工产品时虻害部分被废弃,或者不能用于皮革产品的主要部位,从而造成巨大的经济损失。为了了解牛皮蝇蚴对皮革利用价值的影响,我们于1985年3、7月在夏河皮革制品厂进行了调查。     

流产衣原体CPAF基因的克隆序列分析及原核表达

为了研究流产衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的免疫原性,建立快速有效的流产衣原体抗体检测方法,根据Gen Bank中公布的流产衣原体基因组序列,设计并合成了流产衣原体CPAF蛋白编码基因的特异性引物,以流产衣原体标准菌株基因组为模板,经PCR扩增获得长度为1 809 bp目的基因片段;对获得的目的基因进行测序,并用生物信息学软件进行预测分析;再将该片段插入原核表达载体p ET-30a中,经双酶切、测序鉴定;构建成功的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG对目的蛋白进行诱导表达,通过对诱导条件的优化,确定诱导表达的最佳条件,表达产物用SDS-PAGE和Western Blot检测。结果显示,成功克隆流产衣原体CPAF蛋白的编码基因,该编码产物可能是定位于宿主细胞质中的一种衣原体分泌性蛋白酶,分子内具有多个可能的抗原表位;重组表达质粒经IPTG诱导后,表达分子质量为67.6 ku的CPAF蛋白,该重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体以及流产衣原体阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。结果表明,以大肠杆菌表达系统重组表达的流产衣原体CPAF蛋白具有良好的免疫原性,可作为动物流产衣原体病的血清学诊断及亚单位疫苗研究的候选抗原。     

猪瘟疫苗的研究进展及ST 细胞苗的研究现状

本文综述了国内外猪瘟（Classical Swine Fever,CSF）疫苗的研究进展,对传统疫苗和新型疫苗进行了概述,重点阐述了ST细胞苗的研究现状,为进一步研究开发猪瘟疫苗,有效控制猪瘟提供参考。     

微生物除臭剂应用于畜禽养殖场的研究现状

畜禽养殖过程中排放的NH₃、H₂S和挥发性有机物(VOCs)等恶臭气体对环境、人和动物的健康造成严重的危害。本文概述了畜禽养殖场恶臭气体主要成分及来源、微生物除臭剂的作用机理和研究进展,重点讨论了微生物法降解恶臭气体机理。畜禽养殖场恶臭气体主要来源于动物肠道菌群和畜禽粪尿中土著微生物的厌氧发酵,成分复杂,恶臭气体减排调控成为当前畜禽养殖场的重要任务。生物法除臭因对环境适应能力强、作用时间长、去除效果好而成为当前应用于畜禽养殖场去除恶臭气体的主要手段。微生物除臭剂是将除臭微生物进行组合,利用其生理代谢活动将恶臭气体作为营养物质分解并氧化成CO₂、H₂O、S {\mathrm{O}}_4^{2-}和N {\mathrm{O}}_3^{-}等无臭、无害的终产物。     

西安市宝鸡市新生荷斯坦小牛BVD/MD血清学调查

牛病毒性腹泻/黏膜病（bovine viral diarrhea/mucosal disease,BVD/MD）是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的牛的一种以黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻为特征的疾病.自1946年Olafson等首次报道以来,本病在世界各国都有比较普遍的发生和存在,呈世界性分布,给养牛业造成巨大的经济损失.本病在国内某些地区感染也比较普遍,根据近年我国的疫病普查资料,已有15个省（市、自治区） 查出本病抗体或分离出病毒,感染动物包括牛、羊、猪、骆驼、鹿等,动物感染BVDV后可表现胃肠道黏膜损伤,因免疫抑制而引发继发性感染、白细胞与血小板减少、流产及牛的持续性感染等.封闭式牛群中呈暴发式,犊牛急性病例达25%,病死率为90%～100%.已成为牛最重要的传染病之一。     

牛病毒性腹泻病毒蛋白的免疫学特性以及相关疫苗研究进展

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)众多基因亚型毒株的流行及其宿主谱的扩大干扰着BVDV防控工作。欧洲国家采用全面检测和扑杀BVDV阳性牛的方法达到一定防控效果，但结合我国实际生产情况，使用疫苗防控BVDV仍是最优策略。深入了解病毒感染过程中BVDV蛋白与宿主免疫系统之间的“博弈”,将有助于研究人员在疫苗研发过程中有效规避抗原候选蛋白可能对免疫效果造成的干扰。此外，大力开发低成本、高效力的新型疫苗(如表位肽疫苗和病毒样颗粒疫苗)可以在整合病毒免疫优势抗原表位的基础上加强BVDV相关疫苗的生物安全性，满足用疫苗防控BVDV的要求。鉴于此，本文对BVDV蛋白免疫学功能与特性的研究以及BVDV疫苗开发的现状进行综述，以期为BVDV疫苗研发以及BVDV防控提供一些理论指导。