牦牛血清转铁蛋白的制备及应用研究

应用离子交换层析法，从牦牛血清中分离纯化出了转铁蛋白，并对其进行了理化性质的分析，结果表明：牦牛血清转铁蛋白的分子量为70KD，每毫升血清中可纯化出2.25mg转铁蛋白。     

盖他病毒研究进展

盖他病毒是披盖病毒科甲病毒属成员的一种单链线形RNA病毒,广泛分布于亚洲及澳大利亚北部的太平洋沿岸地区,其原型株为MM2021。病毒对去氧胆酸盐和氯仿等一些有机溶剂及酸敏感,主要侵害马和猪,易感的细胞系有Vero、BHK-21、C6/36、MA-104、Hmlu和RK-13等。目前,关于盖他病毒的研究还较少,很多机理尚未清楚,其危害程度亦不可预知。因此,论文就盖他病毒的特性做了一些简要总结概括,为建立和完善人畜共患病公共卫生体系和早期预警机制提供一些知识贮备。     

绵羊前体脂肪细胞的原代培养及分化

本试验旨在建立绵羊前体脂肪细胞的原代培养方法,探讨反刍动物脂肪沉积机理.以1日龄羔羊的肾周脂肪组织为试验材料,采用组织块法和酶消化法分离培养前体脂肪细胞,观察形态学变化,测定生长曲线,油红O染色检测细胞内脂肪含量,并用实时定量PCR法检测脂蛋白脂酶、过氧化物体增殖剂活化受体γ、脂肪酸合酶的表达量.结果表明:原代培养的细胞成分均一、增殖旺盛、分化率高,具有前体脂肪细胞的形态特征和基因表达特性,为绵羊前体脂肪细胞.本试验成功建立了绵羊前体脂肪细胞原代培养方法,并在体外重现了增殖和分化的过程.     

羔羊皱胃酶和微生物凝乳酶部分特性的探讨

探讨了温度、pH值及金属离子(Ca2+、Al3+、Cu2+、Zn2+)等因素对羔羊凝乳酶和微生物凝乳酶凝乳活性的影响.结果表明:羔羊凝乳酶和微生物凝乳酶的最适作用温度分别为70℃和45℃;两种酶在温度分别低于60℃和50℃时,热稳定性较好;二者的最适凝乳pH值均为5,其活性随底物pH增加而下降;Ca2+、Al3+是两种酶的激活剂,Cu2+、Zn2+都是它们的抑制剂.     

牦牛转铁蛋白对LPS诱生小鼠巨噬细胞脂质过氧化的影响

用LPS诱生小鼠腹腔巨噬细胞发生脂质过氧化,观察牦牛血清中分离纯化的转铁蛋白对其脂质过氧化的影响。结果表明:LPS终浓度为20μg/ml、培养时间12h时,LPS诱生小鼠腹腔巨噬细胞产生丙二醛的量显著增加,且满足实验需要。当添加不同浓度牦牛血清转铁蛋白后,丙二醛受到显著抑制,谷胱甘肽过氧化物酶活性显著升高且呈现剂量依赖性,但超氧化物歧化酶活性均无明显影响。提示,牦牛血清转铁蛋白具有更好的抑制脂质过氧化和提高谷胱甘肽过氧化物酶的作用。抑制脂质过氧化生成和提高谷胱甘肽过氧化物酶的作用,可能是转铁蛋白抑制细菌、抗病毒、保护与促进细胞生长等功能的作用机制之一。     

一株白牦牛源牛病毒性腹泻病毒E0基因的原核表达与序列分析

【目的】本研究旨在对来源于白牦牛的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) GSTZ株的E0基因进行分析,并利用E0基因对GSTZ进行基因分型。【方法】通过提取牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RNA,使用RT-PCR技术扩增BVDV E0基因,将其插入到pET-28a中,构建pET-28a-E0原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆,鉴定及测序。IPTG诱导后使用BVDV阳性血清作一抗,经western blot鉴定。根据E0基因的序列进行同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树。利用DNAstar预测E0蛋白的抗原表位。【结果】本研究表达的E0蛋白大小与预期结果相符且该蛋白具有良好的抗原性。通过对E0基因序列的同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树,说明牛病毒性腹泻病毒GSTZ株基因型可能属于牛病毒性腹泻病毒-1a亚型,也可能是其他基因亚型发生较大突变产生变异。通过预测E0蛋白B细胞的抗原表位主要位于:7-12、22-26、62-63、94-97、101-105、115-119、127-128、138-140、185-187、215-219位氨基酸残基; T细胞潜在优势抗原区域主要位于:10-14、19-31、36-43、52-58、77-86、96-98、137-140、148-150、167-191、209-211位氨基酸残基。【结论】E0蛋白具有良好的抗原性,通过对抗原表位预测以及对GSTZ进行基因分型,为后续基因工程疫苗和BVDV检测试剂盒的开发提供了理论依据。     

卤味枸杞鸡蛋配方研究

以枸杞鸡蛋为原料,生产卤味枸杞鸡蛋。以感官评分为指标,通过单因素试验和正交试验,确定卤味枸杞鸡蛋的最终配方为食盐添加量3.0%,酱油添加量4.5%,白砂糖添加量1.5%,花椒添加量0.1%,八角添加量0.08%,干姜添加量0.02%,茴香添加量0.04%,桂皮添加量0.03%,陈皮添加量0.02%,料酒添加量1.0%。用该配方生产出来的卤味"枸杞"鸡蛋呈棕黄色,卤香浓郁,咸淡适宜。     

牦牛乳对实验室常用大肠杆菌菌株生长的影响

为了解添加牦牛乳对大肠杆菌生长的影响,将采集的牦牛乳经冻干稀释后加入实验室常用基因工程菌BL21和DH5α的培养基中,通过体外菌液培养试验测定不同浓度牦牛乳对大肠杆菌生长的影响。结果表明：在氨苄青霉素抗性和无抗性的大肠杆菌BL21和DH5α培养过程中,外源加入5 mg/ml的牦牛乳对四种大肠杆菌的生长有促进作用。     

宁夏引黄灌区2个苜蓿品种不同行比混播模式研究

试验采用单因素随机区组设计,探讨了宁夏引黄灌区滴灌条件下苜蓿(Medicago sativa)品种'三得利'与'巨能7'单播及以1:1,1:2,1:3行比混播对草地生产性能、品质的影响,并利用主成分分析方法(Principal compo-nent analysis,PCA)进行综合评价,以期得到该区域2个苜蓿品种混播...     

长春新碱对天祝白牦牛胚胎成纤维细胞的作用

目的：探讨长春新碱对天祝白牦牛胚胎成纤维细胞生长的抑制作用,并用碱性磷酸酶指标判断天祝白牦牛胚胎成纤维细胞在长春新碱作用下去分化的可能性。方法：选取白牦牛胚胎成纤维细胞生长良好的24孔培养板,分别滴加浓度依次为0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/mL长春新碱,每天在倒置相差显微镜下观察不同浓度的长春新碱对细胞形态的作用,并进行碱性磷酸酶染色检测。结果：适量浓度的长春新碱可以使细胞的形态发生变化（细胞变圆）,而且在去除长春新碱后,细胞能正常生长。高浓度的长春新碱会使细胞死亡崩解。长春新碱并不能使白牦牛胚胎成纤维细胞中的碱性磷酸酶浓度增高。结论：长春新碱浓度为0.5μg/mL时,对白牦牛胚胎成纤维细胞的抑制作用最佳,但是它并不能使细胞中碱性磷酸酶的含量增高。