兰州百合组培快繁体系的构建

以兰州百合新鲜鳞茎为外植体,选择MS和1/2 MS培养基为基本培养基,采用正交设计研究不同消毒剂组合对外植体存活率、不同植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导率和发芽率的影响;并用响应面法优化不同激素组合对生根率的影响。结果表明:(1)最佳消毒剂组合为75%乙醇消毒20 s+2%次氯酸钠溶液浸泡10 min,外植体成活率可达96.30%。(2)愈伤组织诱导最佳培养基配方为MS+0.3 mg·L^-1 NAA+3 mg·L^-1 6-BA,诱导率可达96.33%。(3)促进发芽的最佳培养基配方为MS+0.3 mg·L^-1 NAA+3 mg·L^-1 6-BA,发芽率可达98.00%。(4)促进生根的最佳培养基配方为1/2 MS+0.5 mg·L^-1 NAA+3 mg·L^-1 6-BA+2 mg·L^-1活性炭,生根率可达94.00%。本研究建立的组培快繁体系可用于兰州百合的快速大量繁殖,可为兰州百合组培苗的工厂化生产提供参考。     

PK15细胞的生物学特性和质量评价研究

为评价PK15细胞能否用于兽用疫苗的研究和生产,对其进行了生物学特性研究和微生物污染及病毒外源因子检测。结果表明:PK15细胞复苏活力为91.77%,呈贴壁性生长,形态为上皮型;生长曲线呈"S"型,最大增殖浓度为24.67×104个·mL-1,群体倍增时间为21.08h;同工酶为5条,染色体2n=38,证实为猪源性且没有发生细胞间的交叉污染;细菌、真菌和支原体检查均为阴性;细胞体外培养观察、血吸附试验、接种鸡胚和动物以及特异性荧光抗体结合物检查病毒均为阴性;能较好地表达外源基因,达到了兽用疫苗生产用细胞的质量要求,可为以该细胞为基质的疫苗研究和生产提供细胞资源。     

欧拉羊胚肾细胞的分离培养和鉴定

[目的]分离培养并鉴定欧拉羊胚肾细胞,为该品种基因组文库构建和遗传多样性研究提供生物学材料。[方法]用胰蛋白酶热消化法分离并培养欧拉羊胚肾原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。[结果]欧拉羊胚肾细胞呈成纤维型,复苏活力90%以上,生长良好,生长曲线呈"S",最大增殖浓度为4.61×105/ml,倍增时间26 h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。[结论]欧拉羊胚肾细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。     

单纯疱疹病毒感染过程中的免疫应答

单纯疱疹病毒(HSV)感染导致的非溶细胞免疫效应是其产生潜伏感染的基础。虽然处于潜伏期的HSV的复制是被抑制的,但HSV基因仍然存在于正常的神经细胞中。研究表明,宿主免疫应答在调节HSV潜伏感染或复制平衡中发挥着重要作用。论文概述了单纯疱疹病毒感染过程中天然免疫应答和适应性免疫应答的作用,以及干扰素和HSV毒力相关蛋白的作用,以期为深入了解HSV感染的分子机制提供参考。     

基于小鼠粪便气味信息的牛乳清蛋白功能效果的鉴别区分

以电子鼻气敏传感器阵列跟踪牛乳清蛋白干预小鼠粪便气味,以期建立基于气味信息无损评价牛乳清蛋白功能的新方法。动物实验结果表明,与NS组比较,给药牛乳清蛋白试验组血清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性上升,丙二醛(MDA)含量显著下降,牛乳清蛋白在小鼠血清中具有抗氧化的能力。电子鼻实验单因素方差分析发现,样品量、顶空生成时间、顶空生成体积和载气流速对传感器S5影响均不显著,对其他传感器响应信号的影响显著。结合典则判别分析获得电子鼻检测较佳条件为:样品量1粒,顶空生成时间10 min,顶空生成体积150 mL,载气流速200 mL·min^-1。结合主成分分析和典则判别分析,电子鼻基本可将牛乳清蛋白不同灌胃剂量与对照组小鼠粪便样品区分,并区分不同灌胃剂量的不同周期组小鼠粪便样品。采用多元线性回归分析建立了小鼠体重的预测(R²=0.122 7),效果尚可。典型相关分析结果表明,粪便电子鼻气味信息与其生理指标两者有着极好的相关性,关联性较强。基于干预小鼠粪便气味信息,可以实现牛乳清蛋白干预与对照药物处理的区分,为食品体内功能性无创评价提供了方法思路。     

昆虫细胞无血清培养基的研究

为开发昆虫细胞无血清悬浮培养基,以基础培养基Grace's Insect medium为基础,添加葡萄糖、水解乳蛋白、酵母粉和PF-68等组份后,分别接种Sf-21、Hi-five两种昆虫细胞进行无血清悬浮培养。结果显示:两株昆虫细胞生长均较好,均能够很好的全悬浮生长,Sf-21细胞最高密度可达(39.8±2.6)×105/ml,Hifive细胞最高密度可达(44.4±1.0)×105/ml。本研究为昆虫细胞培养提供一种无血清悬浮培养基配方,为我国利用昆虫细胞杆状病毒表达系统生产生物制品提供基础保障。     

病毒受体研究进展

病毒受体是由宿主细胞自主编码、调控和表达的一类特殊的蛋白质,是宿主细胞膜的重要组成部分之一,它能够介导病毒与靶细胞特异性结合,并促进病毒侵入或感染宿主细胞。病毒受体不仅有着其正常的生理功能,还是病毒致病性的关键因素之一,与病毒的入侵途径、扩散方式及发病特点等有着密切的关系。由于病毒受体研究起步较晚,许多病毒感染宿主细胞的机制至今仍不明确,所以,病毒受体的研究已成为相当活跃的研究领域。近年来,随着人们对各种病毒研究的不断深入,其受体的发现越来越多,但其种类繁多,分类复杂,为相关的研究工作带来了许多不便,在此,通过对近年来发现的受体进行系统的阐述,以方便更多的人更好地了解病毒受体。     

甘肃省猪日本脑炎血清学调查

为了解甘肃省猪日本脑炎病毒(JEV)的感染情况,采用间接ELISA法对甘肃省部分地区的1258份猪血清样本进行了猪日本脑炎抗体检测。结果显示,抗体总阳性率为73.3%,其中3月龄以下抗体阳性率为63.7%,3月龄以上为78.1%,且抗体滴度高于3月龄以下猪群,通过t检验,二者阳性率存在显著性差异。不同地区中,陇南、天水为最高,甘南最低。甘肃省猪群存在JEV感染,且感染率较高。     

HA基因真核表达载体构建及在293T细胞中的表达

目的:为后续进一步研究H1N1病毒DNA疫苗对小鼠免疫系统的影响提供技术支撑.方法:应用PCR方法体外扩增血凝素(HA)基因全序列,并利用pcDNA3.1(+)载体构建甲型流感病毒(H1N1)血凝素(HA)的真核表达质粒(pcDNA3.1(+)-HA),经双酶切鉴定后,转染293T细胞,通过RT-PCR和Western...