病毒性出血性败血症病毒RNA标准物质的研制

利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品。初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选物。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20℃~25℃(相对湿度20%~25%)7 d,2℃~8℃保存1个月及-20℃保存6个月的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为(6.625±0.149)×10~8copies/μL,可用作VHSV核酸检测的标准质控品。     

多重PCR-变性高效液相色谱法快速检测结核致病菌群并同步鉴别致病菌种

本研究旨在运用多重PCR联合变性高效液相色谱(DHPLC)技术原理,建立快速检测人兽结核致病菌群并鉴别主要致病菌种的新方法。建立了四重PCR-DHPLC方法,可同时检测结核分枝杆菌复合群(MTC)特异的IS6110和IS1081插入序列、结核分枝杆菌特异结构基因和牛分枝杆菌特异结构基因共4个目标基因。采用13种分枝杆菌标准菌株和分离株以及23种常见微生物样品进行特异性试验,采用纯化标准菌株DNA以及克隆了扩增序列的重组质粒DNA进行检测灵敏度试验,采用从临床疑似发病牛群采集的牛组织样品进行临床检测试验,并与细菌分离培养方法进行比对。结果表明:所建立的多重PCR-DHPLC方法能特异检测MTC并准确鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌,而对其它11种分枝杆菌以及23种常见微生物样品均呈典型阴性检测结果;检测灵敏度达到每个反应102～103基因拷贝或3.6～6.8fg DNA模板浓度。采用该法从39份临床疑似样品中检出33份MTC阳性并检出其中28份为牛分枝杆菌阳性,而培养法检出21份阳性样品。采用该法临床检测全程可缩短至1d之内,其中对纯化DNA样品的检测分析可在2h内完成。本研究为人兽结核致病菌(群)的快速检测鉴别提供了新型分子生物学方法,所建立的四重PCR-DHPLC方法能实现快速检测结核分枝杆菌复合群并鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌     

日光温室黄瓜缺素症的发生与防治

黄瓜是浅根性作物,在生产中往往由于连作,造成土壤中某一元素缺乏而影响黄瓜的产量。为了及时发现和防止缺素症的发生,现将黄瓜缺素的主要症状、发生原因、诊断要点及防治方法介绍如下：     

黄龙病疫区永春芦柑种植新模式

正在国家现代柑橘产业技术体系的支持下,永春县农业局与福建省农业厅水果站、华中农业大学合作,持续5年对永春芦柑在黄龙病疫区的综合防控新模式做了大量的技术研发与防控对策研究,该模式种植第2年开始试果,树体健壮,经测产,定植第3年株产平均达21.5千克,折合亩产2吨左右;果面光洁,大小整齐,优质果率90%以上。该模式针对性强,易于操作,实用性好。1园地的选择与规划新建园或重建园的园地必须有     

昭通苹果产业发展方向之我见

云南省昭通市苹果产业在西南果品产区一枝独秀。由于产业结构调整、生产成本上涨等原因,昭通苹果产业进入新世纪以来遭遇了发展瓶颈。对此,为了昭通苹果产业的可持续、健康发展,笔者提出了自己的建议。     

大石窝果农网上卖“火”菱枣

金秋9月,北京市房山区大石窝镇三岔村果农王宏坤、王玉淑两口子心情格外舒畅,自家承包1.33公顷荒山嫁接的菱枣喜获丰收且购销两旺。截至目前,家里4000多株枣树已产菱枣1500多千克,仅头一茬枣收入就达3万多元。据王宏坤说,预计全年可产菱枣3000多千克,全年仅菱枣收入就能达到6万多元。王宏坤家种的菱枣卖得如此火爆,一方面是他们管理得好,菱枣个大、味美,另一方面是他们在互联网上建立了自家果园的网页,利用网络做宣传,提高知名度。     

浅谈塑料大棚黄瓜霜霉病综合防治技术

<正>黄瓜霜霉病俗称"跑马干"、"黑毛"等,是温室大棚黄瓜上发生最普遍危害最严重的病害之一。黄瓜霜霉病发病快、易流行、危害重,是大棚黄瓜生产的首害。结合近两年沈阳市辽中县某乡镇生产实践,总结     

用杆状病毒载体系统表达禽畜传染病病毒基因研究概况

用杆状病毒载体系统表达禽畜传染病病毒基因研究概况陈茹（广州动植物检疫局，５１００１０）杆状病毒（Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）属杆状病毒科（Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ），因病毒粒子呈杆状而得名，是一环状双链ＤＮＡ病毒，基因纽约为１３０Ｋｂ。本科下分两个亚科...     

转植酸酶基因玉米对肉仔鸡生长性能及钙磷代谢的影响

选择480只AA商品代肉仔鸡,随机分为4组,每组3个重复,对照组添加磷酸氢钙,试验各组磷酸氢钙减半,分别添加500 U/kg的外源植酸酶和500、750 U/kg转植酸酶基因玉米来源的植酸酶。试验结果表明:肉仔鸡试验期间健康状况正常,各组平均日增重、饲料转化率均无显著差异(P>0.05);各组间血清和胫骨中钙、磷、氮水平无显著差异(P>0.05);试验组21和42日龄时粪中磷的存留量分别比对照组降低49.43%、55.17%、54.02%和31.50%、32.28%、14.96%,差异极显著(P<0.01);转植酸酶基因玉米组与微生物植酸酶组相比差异不显著(P>0.05)。转植酸酶基因玉米可以替代外源植酸酶作为一种植酸酶来源在肉仔鸡日粮中使用,不仅不影响生产性能,而且减少磷酸氢钙的使用和氮磷的排放。     

增强外源基因在转基因植物中表达的策略

在转基因研究和生产应用中,人们往往期待目的基因能在转基因生物中高效表达从而实现相关目的--获得具有对杀虫剂、除草剂高抗性的农作物,或以植物作为生物反应器生产具有高附加值的疫苗、抗生素等医药用品以及工业用蛋白、酶类等。综述了各种用于增强外源基因表达效率的策略,从外源基因的整合、转录水平的调节以及外源基因翻译后的蛋白分选三个水平阐述提高外源基因表达的相关策略的利弊,从而为转基因研究提表达供载体构建方面的参考依据。