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根据Wood 46株金黄色葡萄球菌a溶血素(a-HL)基因序列设计了引物,用高保真PCR从1800株金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出了0.9kb的a-HL基因,序列测定结果显示,两菌株a-HL基因的核苷酸序列有6个碱基差异,但仅引起1个氨基酸替换。用PCR分段克隆和定点突变技术将大肠埃希氏茵外膜蛋白A信号肽序列与a-HL编码区融合,并将其第130~134位氨基酸替换为5个连续的组氨酸,获得的融合基因命名为H5基因。将其克隆入pET-30a质粒,用获得的重组质粒pET-H5转化感受态大肠埃希氏菌,获得分泌性表达H5的重组茵。经IPTG诱导后,重组菌表达出分子质量为35ku的H5蛋白。经镍柱亲和层析纯化的H5对兔红细胞的半数溶血值为180ng/mL,能使鼠成纤维细胞PA317获得对台盼蓝和海藻糖的通透性,且能被Zn^2 抑制。提示,表达的H5蛋白为可控细胞膜孔形成蛋白,能用作真核细胞内玻璃态保存的渗透剂。 相似文献
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半定量风险评估是采用定量与定性分析相结合方式进行的风险评估。为规范福建省奶牛场和各级动物疫病防控机构开展奶牛场布鲁氏菌病(简称“布病”)风险评估,提供一套科学、规范、操作性强的奶牛场布病风险评估方法,参照世界动物卫生组织(WOAH)风险评估的原则和步骤,通过文献查阅,收集专家经验,拟定各种奶牛场布病传入和场内传播风险因素,生成电子问卷后,邀请国内44位兽医流行病学领域或实践管理经验丰富的专家,采用改良的德尔菲专家咨询法,对风险因素进行风险赋值,并确定传入风险与场内传播风险的权重,同时征求修改意见和建议,经综合分析后建立了一套实用的奶牛场布病半定量风险评估方法,以期为福建省控制和净化布病,建立奶牛布病无疫小区提供规范性的技术依据和实用工具。 相似文献