牛病毒性腹泻病毒链特异性SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及应用

为了对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)复制过程中正、负链RNA进行定量检测,通过生物学软件DNAStar和Primer express 3.0设计BVDV正、负链RNA特异性反转录引物并在其5′端添加非病毒核苷酸标签序列以区分BVDV正、负链RNA。同时设计荧光定量PCR引物与非病毒核苷酸标签序列组成引物对,建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR(ssRT-qPCR)方法,对其敏感性、重复性、特异性进行评估并利用所建立BVDV ssRT-qPCR对不同接毒剂量下BVDV在细胞内复制过程中正、负链RNA进行定量检测。结果表明,以构建的pMD18T-BV+和pMD18T-BV-质粒为标准品建立的BVDV正链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(+)RT-qPCR]和负链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(-)RT-qPCR]在10~2～10~7拷贝范围内具有良好的线性关系,线性相关系数分别为0.998 1和0.995 3;敏感性试验结果显示,ssRT-qPCR敏感性较好,ss(+)RT-qPCR最低检测下限为10拷贝,ss(-)RT-qPCR最低检测下限为100拷贝。重复性试验结果显示,所建立的ssRT-qPCR批内和批间的变异系数为均小于1%,方法重复性良好。特异性试验显示,所建立的ssRT-qPCR方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒等不存在交叉反应,特异性较好。利用建立的ssRT-qPCR对不同感染剂量下细胞内BVDV正、负链RNA进行定量分析,结果显示以10、0.1 MOI剂量接种BVDV于MDBK细胞后,BVDV正、负链RNA变化呈现先升后降再逐渐上升的趋势。以1 MOI剂量感染MDBK细胞,BVDV正、负链RNA的动态变化趋势略有差异,整体呈上升趋势。10、1 MOI接毒剂量接种细胞后,BVDV正、负链RNA在感染后36 h基本维持稳定水平,以0.1 MOI接种细胞后BVDV正、负链RNA在感染后24 h即达到稳定水平。BVDV链特异性检测进一步验证了所建立方法的适用性。该研究建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR方法并利用该方法对BVDV在细胞内复制过程中正、负链RNA的动态变化过程进行描述,为研究宿主蛋白抗病毒机制、BVDV基因组RNA复制及调控机制等研究提供了研究手段。     

高通量转录组测序技术在猪肉品质研究中的应用进展

猪肉中基因的表达决定了蛋白质的种类、结构和功能,从而决定了肉品质,而肌内脂肪(IMF)和肌纤维(MF)是影响肉品质的关键物质。本文主要综述了高通量转录组测序技术在研究猪肉品质相关的IMF和MF转录组的应用,重点阐述了其研究进展。     

福建“造福工程”惠及7万多人

据福建省农办提供的数据称，2009年福建省实施的“造福工程”已超额完成6万人的搬迁任务，实际落实搬迁人数达76223人，财政专款带动多元化资金投入累计达21．18亿元，“造福工程”已成为福建省新农村建设的一大亮点。     

小鼠卵母细胞体外成熟过程中wee 1和cdc 25基因的表达

已知 wee 1基因产物是成熟促进因子 ( maturation promoting factor,MPF)活性的负调节者〔7〕,而 cdc2 5基因产物是 MPF活性的正调节者〔2〕。后来在小鼠和人类的体细胞发现了cdc2 5的等效基因和 wee1基因〔3～ 6〕。但哺乳动物卵母细胞长期被阻滞在第一次成熟分裂的前期 ,是否因 MPF的活性受到 wee1基因产物的抑制 ,而促性腺激素等解除这种抑制是否由 cdc2 5基因表达所引起 ,目前尚未见报道。本试验目的在于研究小白鼠卵母细胞成熟过程中 wee1、cdc2 5基因的表达规律 ,为揭示哺乳动物卵母细胞成熟过程中分子生物学调控机理提供科学资料…     

牦牛巴氏杆菌病的诊断报告

2002年，陕西省凤县某地购进的牦牛出现不明原因的死亡，在流行病学调查和毒物学分析的基础上，对采集的病料进行病原的分离与鉴定。结果表明，引起牦牛死亡的病原为巴氏杆菌。报告如下。     

增益素对鸡新城疫免疫效果的试验

在畜禽传染病的免疫预防实践中，经常会遇到免疫效果不好、保护率不高的情况，给养殖业带来了较大的经济损失。西安亨通光华制药有限公司试制的增益素，为新一代免疫增强剂。为验证增益素的免疫增强效果，我们进行了增益素对鸡新城疫免疫效果的试验，现将结果报告如下。 1材料 1.1药物 　　增益素，即α－甘露聚糖肽， 10g/瓶，由西安亨通光华制药有限公司提供。 1.2疫苗 　　新城疫Ⅱ系苗和油乳剂灭活苗，农业部兰州生物药厂生产。 1.3新城疫强毒株 　　由西北农业大学动物科学与动物医学院分离并低温保存。 1.4试验动物 　　60只 10日龄新…     

浙江六十田常绿阔叶林主要乔木种生态位研究

应用Shannon-Wiener生态位宽度指数、生态位相似性比例系数及生态位重叠指数,对浙江省六十田省级自然保护小区常绿阔叶林群落中主要乔木树种的生态位特征进行了研究.结果表明:红楠Machilus thunbergii、华东楠Machilus leptophylla、青冈Cyclobalanopsis glauca、紫楠Phoebe sheareri、木荷Schima superba、东南石栎Lithocarpus harlandii具有较大的生态位宽度,分别为0.969、0.951、0.898、0.867、0.819和0.773,而香槐Cladrastis wilsonii、树参Dendropanax dentiger、枫香Liquidambar formosana的生态位较小,仅为0.345、0.245和0.245;生态位宽度大的树种间一般有较高的生态位相似性比例;香槐、树参和枫香的生态位宽度较小,但与其它树种的相似性却很高,表明这些树种对资源有较明显的共享趋势;从生态位重叠值来看,整体上表现为生态位宽度较大的树种间都有较高的生态位重叠,生态位宽度较小的树种与其它树种的生态位重叠较小.     

山西省阳高县猪瘟血清学调查研究

采用正向间接血凝试验(IHA),对山西省阳高县12个乡镇65个养猪场和散养户饲养猪的1 269份血清进行猪瘟抗体检测,并对近年来调查数据加以比较,以了解猪瘟病毒(CFSV)在阳高县区的感染情况.结果表明,阳高县各地均有猪瘟抗体阳性检出,猪场抗体阳性检出率达100%,其中母猪的抗体阳性率为12.65%,仔猪的抗体阳性率为12.76%.说明阳高县CSFV感染比较严重,应采取有效防疫措施进行防控.     

猪小肠黏膜上皮细胞原代培养

分别采用酶消化法和组织块培养法,建立了猪小肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。酶消化法于37℃分为4个处理组进行。处理1以2.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min;处理2以2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min;处理3以50 mg/L嗜热菌蛋白酶消化50 min;处理4以50 mg/L嗜热菌蛋白酶+2.0 g/L胶原酶Ⅰ消化70 min。采用柠檬酸胰酶法分离纯化细胞。结果表明,组织块法原代培养获得的细胞活性较强。