猪支原体肺炎自然病例的临床和病理学观察

猪支原体肺炎(MPS)是由猪肺炎支原体(Mhp)引起的猪的一种高发病率,低死亡率的慢性呼吸道传染病,国外常称为猪地方性流行性肺炎(SEP),而在我国常称为猪喘气病(或气喘病)。由于猪肺炎支原体对培养要求苛刻,易受其他支原体的污染,而且只在疾病的早期阶段高灵敏度,病原数量在整个疾病的发展过程中都在逐步下降,所以目前临床实践中对该病的诊断主要依靠其临床症状和病理学变化的观察。我们观察了自然发病的MPS病例,观察其临床表现和病理剖检变化,可为猪支原体肺炎的诊断提供可靠的证据。1材料与方法1.1病例及病料选择陕西省宝鸡、杨凌地区部…     

动物RNA病毒全长感染性cDNA的研究进展

动物致病性RNA病毒，如登革热病毒(DEN)、猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)和风疹病毒(RUBV)等，可诱发人或动物产生严重的传染病。这些传染病在世界各地的间歇性暴发，给人类健康造成了严重影响，给畜牧业发展造成了巨大的损失。逆向遗传学的发展有力地推动了动物RNA病毒的研究，它的基本内容包括通过RT-PCR获得RNA病毒的全长cDNA分子，对该cDNA进行一定的基因工程操作后，利用     

玉米主要病虫害的发生与防治

介绍玉米主要病虫害的发生特点及防治方法,包括红蜘蛛、灰飞虱、玉米螟、细菌性茎腐病、矮花叶病毒病、鞘腐病,以供参考。     

玉米免耕种植苗期存在的问题及防治措施

免耕是一种保护性耕作技术,抗旱性强,培肥地力,但也存在一些技术性的问题导致缺苗毁种、缺素症等,结合生产实践,提出免耕种植苗期容易出现的问题,提出解决的办法,以指导玉米免耕种植。     

猪血管内皮细胞中与猪瘟病毒相关microRNA的初步筛选

本试验旨在筛选猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)内作用于猪瘟病毒(CSFV)的microRNA。通过构建CSFV3′和5′非翻译区(Untranslated region,UTR)的双荧光素酶报告基因载体,经生物信息学预测可能与CSFV相互作用的microRNA,然后瞬时共转染重组载体与microRNA的抑制物,最后通过发光检测仪测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了CSFV5′非翻译区(373 bp)和3′非翻译区(252 bp)的报告基因载体,并合成了4条预测出的microRNA(ssc-mi R-let7c、ssc-mi R-106a、ssc-mi R-18、ssc-mi R-139)的抑制物,共转染后发光检测仪检测到荧光素酶的活性被不同程度抑制。本研究发现microRNA作用位点主要在CSFV的3′-UTR,而且以上4种microRNA都对CSFV3′-UTR有不同程度的抑制作用,其中ssc-mi R-18的抑制作用比较明显。     

猪脐静脉血管内皮细胞永生化的初步研究

为了建立稳定的血管内皮细胞系,进而为研究猪瘟病毒致病机理提供理想的细胞模型,将脂质体转染的pCIneo-hTERT质粒导入原代猪脐静脉血管内皮细胞中,经G418抗性筛选,挑取阳性克隆并扩大培养。对转染后的细胞进行形态观察,研究其增殖及生长特征,并对其端粒酶活性进行了鉴定。结果表明,转染细胞单层贴壁生长,有接触抑制性,呈铺路石状;F-ⅧAg和CD34免疫荧光鉴定阳性,具有转染前细胞特征;转染后细胞培养代数增加,传至第10代和15代转染后细胞端粒酶活性检测为阳性。说明hTERT转染可以延长猪血管内皮细胞的寿命。     

逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及动物免疫试验

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒表达载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠,用流式细胞仪检测证明,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。为下一步利用细胞免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。     

对网络广告规范化管理的认识与探讨

分析了我国网络广告及其管理的现状,探讨了网络广告规范化的必要性与可能性,提出了网络广告规范化管理的应对措施。     

靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体的构建与鉴定

利用RNA干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列(其结构特征为正链(19nt)-环(9nt)-负链(19nt))。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中,构建重组载体pGene-NS3-1,pGene-NS3-2和pGene-NS3-3,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对转化产物进行kan+筛选,碱裂解法提取重组质粒,将酶切鉴定为阳性的质粒测序。结果显示,双链干扰片段克隆方向正确,序列中未出现核苷酸的插入,缺失等突变现象。表明靶向猪瘟病毒NS3基因shRNA干扰载体构建成功。     

含NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的真核表达

为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg／mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105／孔和1×101／孔的转染效果最好。