华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定

构建华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础,也为进一步研究华支睾吸虫后囊蚴感染宿主的信号传导机制、探究其致病机理提供新的起点。从中国东北疫区（镇赉县）麦穗鱼肉里分离收集华支睾吸虫囊蚴,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,加EcoRⅠ接头,经XhoⅠ酶切,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与载体λZAP Express连接,Gigapack III Gold包装蛋白体外包装,构建华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库。结果表明,构建的华支睾囊蚴cDNA表达文库的库容量为9.15×10⁵ PFU,重组率为99.5%,扩增后文库滴度为1.6×10¹⁰PFU/mL。成功构建了一高质量的华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库。     

一株苦马豆素降解菌的分离与鉴定

旨在从小花棘豆(Oxytropis glabra DC)生长环境中分离可降解其主要毒性成分苦马豆素(Swainsonine,SW)的微生物。通过富集驯化培养,以SW为唯一碳源,从埋置小花棘豆的土壤中分离得到1株SW降解菌。形态学观察表明该降解菌为革兰氏阴性短小杆菌,无荚膜,无鞭毛;生理生化检测发现该降解菌氧化酶阳性,不产吲哚,不水解淀粉;16SrDNA序列比对分析表明该降解菌属于假单胞菌科假单胞菌属微生物,序列比对发现与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)同源性最高。在SW无机盐液体培养基中培养24h,菌株对100mg/L SW的降解率为30.12%,延长培养时间不能提高其降解SW的能力,但可在高质量浓度SW(1 000mg/L)的处理下生长;该降解菌在无SW刺激的条件下转接50代,对100mg/L SW的降解率无明显影响。     

小花棘豆补饲奶牛的安全性试验

9头荷斯坦奶牛随机分为对照组和试验组,试验牛按照2 kg/d的剂量饲喂小花棘豆,检测临床指标和血液生物指标评价其安全性.结果显示试验牛临床观察无中毒症状,血液生物指标正常,所产牛乳中未检测到毒性物质.说明通过间歇饲喂,奶牛可安全饲用小花棘豆.     

叶尔羌高原鳅耗氧率和窒息点的初步研究

试验采用流水呼吸室法和静水呼吸室法测定了叶尔羌高原鳅的耗氧率和窒息点。结果表明，叶尔羌高原鳅耗氧率具有昼夜节律性，白天（7：00-21：00）平均耗氧率为0．1389mg／（g·h），夜间（22：00-6：00）平均耗氧率为0．1799mg／（g·h）。其耗氧率和窒息点随体重的增加而降低，均体重为7．66g，耗氧率为0．1560mg／（g·h），窒息点为1．2105mg／L；均体重为20．30g，耗氧率为0．1201mg／（g·h），窒息点为1．1314mg／L；均体重为47．60g，耗氧率为0．0925mg／（g·h），窒息点为1．0937mg／L。其耗氧率和窒息点随水温的升高而增大，水温20℃，耗氧率为0．1260mg／（g·h），窒息点为1．1805mg／L；水温25℃，耗氧率为0．1603mg／（g·h），窒息点为1．3109mg／L；水温29℃，耗氧率为0．2231mg／（g·h），窒息点为1．5816mg／L。研究结果为养殖生产中合理放养、水质管理、饵料投喂和活鱼运输提供了依据。     

小花棘豆中毒对和田羊瘤胃纤毛虫数量的影响

小花棘豆(Oxytropis glabra)在新疆分布广泛,可引起放牧牲畜中毒。本文研究小花棘豆中毒和田羊瘤胃纤毛虫数量的变化,分析小花棘豆中毒对绵羊瘤胃内环境的影响,为小花棘豆中毒的防治及安全利用提供基础。     

家兔小花棘豆中毒与血液生化指标的相关性研究

[目的]探讨家兔血清生化指标与小花棘豆中毒(Oxytropis glabra DC Poisoning,OgP)的关系,为小花棘豆中毒的诊治提供依据.[方法]以12只小花棘豆中毒家兔与10只正常家兔为研究对象,检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-甘露糖苷酶(AMA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和极低密度脂蛋白(VLDL-C)含量.采用t检验对两组资料进行差异显著性比较后,再采用简单相关分析方法对各指标与小花棘豆中毒的关系进行分析.[结果]与正常对照相比,小花棘豆中毒家兔血清的AST、ALT、AKP、LDH、MDA、BUN、CRE、GLU、TC、GLO、LDL-C值均极显著升高(P＜0.01),AMA、SOD、GSH-Px、CAT、TG和ALB极显著下降(P＜0.01),HDL-C值显著下降(P＜0.05),TP和VLDL-C含量差异不显著(P＞0.05).与小花棘豆中毒相关的主要因素有AMA、CAT、GLU、LDH、GSH-Px、AKP、TG和CRE,并建立回归方程:OgP=0.714-0.078AMA-0.069CAT+0.038GLU+0.047LDH+0.045AKP.[结论]血清AMA、CAT、GLU、LDH、GSH-Px、AKP、TG和CRE对家兔小花棘豆中毒的早期诊断、治疗、疗效观察和转归判断具有一定参考价值.     

小花棘豆中毒和田羊丘脑-垂体-睾丸轴的病理学观察

以小花棘豆中毒和田羊为研究对象,屠宰后采集试验羊的丘脑、垂体和睾丸组织,测定其脏器指数后检测其显微及超微结构的变化。探讨小花棘豆中毒对雄性和田羊丘脑-垂体-睾丸轴(hypothalamus-pituitary-testis axis,HPTA)形态学的影响,进一步探讨小花棘豆的中毒机理。结果显示,小花棘豆中毒可导致和田羊丘脑、垂体和睾丸指数极显著升高(P0.01),HE染色表明丘脑神经元细胞固缩、浓染;垂体中细胞核变形、浓染,胞浆减少;睾丸曲精细管细胞排列紊乱,管壁变薄,管腔内精子数量减少,睾丸支持细胞和间质细胞均出现明显空泡。透射电镜结果显示,小花棘豆中毒和田羊丘脑中神经元细胞核染色质聚集,线粒体嵴断裂,神经髓鞘端板层离散;垂体中促性腺激素细胞核染色质聚集,线粒体肿胀呈空泡状,内质网扩张;睾丸中精原细胞和精母细胞胞质内线粒体肿胀形成空泡,精子细胞核膜破裂,胞质内线粒体肿胀形成空泡,嵴断裂,部分精子细胞缺少顶体颗粒。小花棘豆中毒可造成雄性和田羊丘脑、垂体及睾丸组织显微和超微结构的改变,表明小花棘豆可通过HPTA影响雄性生殖系统。     

苦马豆素对小鼠肝脏抗氧化功能的影响

[目的]探讨苦马豆素对小鼠肝脏抗氧化功能的影响,进一步揭示苦马豆素的毒性作用机理.[方法]将64只昆明种小鼠随机分为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15;(含苦马豆素30 mg/kg)、Ⅱ组添加30;(含苦马豆素60 mg/kg)、Ⅲ组添加45;(含苦马豆素90 mg/kg)的比例制作颗粒饲料,饲喂至典型中毒症状出现.攻毒第14、28、42、63 d每次每组随机采集4只小鼠的肝脏,检测SOD、GSH-Px、CAT、NOS活性及MDA、NEFA、·OH、NO和Glu含量的变化.[结果]与正常对照相比,试验组小鼠肝脏SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化物酶的活性极显著下降(P＜0.01),MDA、NEFA、·OH、NO含量极显著上升(P＜0.01),Glu含量极显著下降(P＜0.01).[结论]苦马豆素对小鼠肝脏抗氧化功能有显著影响,而且具有一定的时间和剂量效应关系,长期低剂量摄入苦马豆素可引起小鼠不同程度的肝损伤.     

小鼠日粮中添加小花棘豆黄酮的安全性试验

试验旨在研究小鼠日粮中添加不同剂量的小花棘豆黄酮在其饲喂过程中的安全性。选用48只6~8周龄、体重为(20±2)g的小鼠,随机分为4组,每组12只,雌、雄各半。对照组饲喂全混合日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在全混合日粮中分别添加10、30、50 mg/kg小花棘豆黄酮,试验期为30 d。结果表明,小鼠采食小花棘豆黄酮后未见异常临床症状;小鼠血液学指标、血清生化指标和脏器系数均在正常范围内。提示,小鼠日粮中添加小花棘豆黄酮未发现亚慢性毒性,可以被安全利用。     

和田黑鸡与普通商品鸡淋巴细胞转化形态差异分析

根据普通商品鸡与未注射疫苗的和田黑鸡淋巴细胞转化率的对比,分析和田黑鸡机体与普通商品鸡免疫力的强弱。用密度梯度离心法分离出鸡外周血淋巴细胞,于37℃、5%的CO2培养箱中体外培养,如果其受到某种诱导剂,如有丝分裂原植物凝集素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)的诱导后,就会表现为细胞体积增大、代谢旺盛、蛋白质和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化和增殖,淋巴细胞转化率的高低则可以反映机体的免疫水平。试验发现,随着时间的递增,当用植物凝集素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)诱导和田黑鸡和普通商品鸡时转化率也呈现上升趋势,普通商品鸡淋巴细胞的转化率要大于和田黑鸡,且在72h后普通商品鸡与和田黑鸡的淋巴细胞LPS诱导后转化率都呈现递减趋势。该试验为动物疫苗免疫效果检测和细胞因子制剂的研究奠定了基础。