甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因克隆及其实时荧光RT-PCR检测

 甘蔗黄叶病毒（Sugarcane yellow leaf virus, SCYLV）引起的甘蔗黄叶病是一种新的全球性病毒病害。本文以YLSCPF1和YLSCPR591为引物,采用RT-PCR方法克隆了甘蔗黄叶病毒福建分离物（CHN-FJ1）外壳蛋白（CP）基因,编码196个氨基酸。分析不同地理来源的SCYLV病毒分离物cp基因核苷酸及其推导编码的氨基酸序列,同源性达95%以上。根据cp基因的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立了SCYLV的TaqMan实时荧光RT-PCR方法。结果表明,检测下限为初始质粒模板DNA 1 000拷贝/μL（约3.61 fg/μL）,比常规PCR方法的灵敏度提高100倍。检测甘蔗花叶病毒、宿根矮化病菌和黑穗病菌,没有典型的扩增曲线和无Ct值。应用实时荧光RT-PCR、常规RT-PCR和组织印迹免疫杂交（TBIA）对田间甘蔗叶片样品进行检测,阳性检出率分别为100%、61.5%和69.2%,表明该方法比常规RT-PCR和TBIA具有更高的灵敏度,适合于对SCYLV的检测。     

四价抗病虫除草剂RNAi植物表达载体构建与转化甘蔗研究

甘蔗是重要的能源作物和糖料作物,面临病虫害日益严重问题。由于甘蔗遗传背景非常复杂,且缺乏必要种质,难以通过杂交培育抗病虫、除草剂聚合品种。基因工程技术提供了新方法。本研究利用BLAST比对获得甘蔗花叶病毒ScMV-CP基因和黄叶病毒ScYLV-CP基因的保守序列作为干扰序列,通过设计内切酶位点、生物合成和连接,获得全长687 bp的两个保守序列融合片段（MYCP）。并将其正向和反向插入中间载体pHANNIBAL上,形成双价病毒干扰结构。再通过在pHANNIBAL上添加SmaⅠ内切酶位点,将双价病毒干扰结构表达框和Cry1AC基因表达框结合;利用NotⅠ酶切,回收双价病毒干扰结构和Cry1AC基因表达框片段,连接到添加Bar基因表达框的表达载体pART27-Z上,构建了抗病虫及除草剂四价植物表达载体（pART27-MYCP-Cry1AC）。采用基因枪法将构建好的四价植物表达载体转入甘蔗品种FN15的胚性愈伤组织中,通过PPT（草丁膦）筛选获得了抗性再生甘蔗植株,经过PCR、定量以及Bt蛋白试纸检测,获得同时整合四种目的基因并表达的四价转基因甘蔗植株,为培育多抗甘蔗新品种提供了材料。     

GNA基因遗传转化甘蔗研究

虫害常常给甘蔗生产造成重大损失。GNA对蚜虫、飞虱、叶蝉等刺吸式害虫和某些咀嚼式害虫如蛴螬等有极高的毒性。对引进的GNA基因进行鉴定，并利用基因枪将GNA基因转化甘蔗愈伤组织，经筛选、分化。获得了一批抗性再生植株，抽样检测，获得了4株PCR阳性植株，为培育优良抗虫甘蔗新品种创造了条件。     

宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法建立

利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法.实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体上,通过测序和序列比对,除两端引物序列完全相似外,其余部分没有同源性,因此可以作为定量检测的非同源模板.通过计算非同源模板的拷贝数,进行竞争定量PCR检测宿根矮化病,建立宿根矮化病菌的标准竞争曲线和直线回归方程.本研究建立的竞争定量PCR检测方法操作简单、特异性和敏感性高,适合于宿根矮化病菌的检测,并可为其它病菌竞争定量PCR检测方法的建立提供参考.     

穗萌抑制剂的抑制作用及其解除途径的探讨

利用赤霉素，硝酸钾溶液处理受穗萌抑制剂负效影响的杂交稻种子，进行发芽跟踪试验 。结果发现：赤霉素溶液能有效地解除穗萌抑制剂对种子发芽的抑制作用，且龙特甫Ａ种子经８５天，威２０Ａ种子经７０天能自然解除抑制。     

高职院校图书馆为产学研服务实践初探

产学研结合是高职教育发展的必由之路,从高职院校图书馆为产学研提供服务的可行性出发,提出基于产学研服务的基本对策。     

智慧气象在农业未来发展中的前景分析

我国的农业发展情况将直接影响我国国民经济的发展,而气候在农作物的生长过程中正发挥着越来越重要的作用。全面预防气象灾害对农业的发展和未来具有非常重要的意义。基于此,主要分析了智慧气象在农业未来发展的前景。     

基于云计算技术的高职院校图书馆云服务平台构建

云计算技术的发展给高职院校图书馆提供了良好的发展机遇。文章从云计算与云服务平台的基本含义出发,探讨云服务平台的基本特征,并提出基于云计算技术的高职院校图书馆云服务平台构建的核心理念、基本原则及平台架构模型。     

甘蔗主成分分析及作为再生能源的可行性

甘蔗是生物量最高的作物之一，主要化学成分是单糖和多糖；同时甘蔗也是光合效率最高的碳四作物。利用甘蔗生产乙醇，具有工艺流程简单、生产效率高、生产耗能自给和废液零排放等优点。     

正交试验设计在优化甘蔗再生体系中的应用

建立高效再生体系是生产甘蔗健康种苗和进行遗传改良的前提。试验采用正交设计方法，研究了6-BA、KT、NAA、活性炭的不同浓度及其组合对两个甘蔗基因型愈伤组织分化的效果，并筛选出了优化处理组合。试验研究结果表明，对于福农95-1702和福农94-0403的愈伤组织分化效果最佳的组合分别是：MS 1.5mg／L6-BA 2．0mg／LKT 0．2mg／LNAA 1．0g／L活性炭和MS 2．5mg／L6-BA 1．5mg／LKT 1，0g／L活性炭。