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稻瘟病新抗性基因Pi39候选基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
Pi39是位于水稻第12染色体上的稻瘟病新抗性基因,为了明确其功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建候选基因的敲除载体。通过对候选基因序列分析,将合成的靶位点序列插入入门载体pENTR-sgRNA,再与表达载体Cas9发生重组。本研究首先在候选基因的第一个外显子区域找到了2个带有PAM序列的靶位点,将2个目的小片段依次克隆到pENTR-sgRNA载体上。通过菌落PCR检测及测序,结果表明目的小片段插入位置正确。将入门载体与表达载体进行重组反应后,阳性克隆经菌落PCR和质粒DNA酶切鉴定并测序,结果表明重组载体构建成功。本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除载体操作简单,耗时短,为进一步开展Pi39候选基因的功能研究奠定了基础。 相似文献
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水稻Os SSI2基因负调控水稻的抗病反应,为了研究该基因的抗性机理,构建p GEX-6P1-Os SSI2原核表达载体,转化大肠杆菌BL21细胞后利用IPTG诱导外源蛋白表达并优化表达条件,使用SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物。结果表明:成功构建了p GEX-6P1-Os SSI2原核表达载体后进行原核表达,在IPTG浓度为0.3 mmol/L,温度为25℃,诱导表达7 h,通过SDS-PAGE和Western Blot检测发现Os SSI2蛋白的可溶性表达量最多,为进一步研究水稻Os SSI2蛋白的抗性机理奠定了基础。 相似文献
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广谱增产菌在油菜上的使用效果陈亚红丁存（宝丰县农牧局，宝丰４６７４００）增产菌是一种新型植物生长调节剂，它具有促进植物生长发育，增加植物生物产量，改善植物品质和增强植物抗逆性等综合作用。一般在双子叶植物上使用效果较好，尤其在油菜上应用效果更佳。油菜使... 相似文献
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农业技术推广是实现农业科研成果和实用技术向农业生产转化的基本途径。从农业技术推广部门和人员情况、农业技术推广部门的职能发挥情况、农民农业服务技术的获取情况、农业服务技术的推广情况等方面总结了农业技术推广的现况,分析了阻碍农业技术推广的因素,即农业技术推广机制不合理、农业技术推广经费管理不规范、农业技术推广人员培训与激励机制缺失和基层政府对农业技术推广的重视不够,并提出了农业技术推广的对策建议,主要有改革政府农业服务机构体制,回归公益性服务职能;拓宽农业技术推广资金筹集渠道,规范经费管理;完善农业技术推广人事制度,提高推广人员的综合素质;提高各级地方政府的全面认识,切实加强领导。 相似文献
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