小麦锈菌AFLP分子标记技术体系的建立

以小麦条锈菌、杆锈菌、叶锈菌的夏孢子为材料,通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了锈菌的AFLP分子标记体系如下:40μl酶切体系中采用了EcoRI、TrulI各5U,37℃3h,65℃3h双酶切4μl100ng/μl的DNA;然后加入10μl连接混合液22℃连接3h,16℃10h;连接产物5μl,10μMEcoRI、10μMTru1I预扩引物各1.5μl,PCR反应液25μl,ddH2O17μl进行预扩;预扩产物稀释20倍后取5μl,50ng/μlEcoRI、Tru1I选扩引物各1μl,PCR反应液10μl,ddH2O3μl体系进行选择性扩增,为小麦锈病和其他真菌性病害的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供了有力工具。     

小麦锈菌AFLP分子标记技术体系的建立*

 以小麦条锈菌、杆锈菌、叶锈菌的夏孢子为材料，通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化，建立了锈菌的AFLP分子标记体系如下: 40μL酶切体系中采用了EcoRI,TrulI各5U,37℃3h,65℃3h双酶切4μL100ng/μL的DNA; 然后加入10μL连接混合液22℃连接3h,16℃10h; 连接产物5μL,10μmol/LEcoRI,10μmol/LTru1I预扩引物各1.5μL,PCR反应液25μL,ddH₂O17μL进行预扩;预扩产物稀释20倍后取 5μL,50ng/μL EcoRI,Tru1I选扩引物各1μL,PCR反应液10μL,ddH₂O3μL体系进行选择性扩增。为研究小麦锈病和其他真菌性病害的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供了有力工具。     

甘薯的实用价值及其育种研究进展

根据当前国内外甘薯研究和运用的状况,综述了甘薯的主要用途以及在日常生活和工业等方面的运用及其相应的育种研究进展,展望了甘薯运用和育种的前景。     

甘薯ADP-葡萄糖焦磷酸化酶两个α亚基基因的克隆分析和植物表达载体的构建

ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)催化ADP-葡萄糖合成反应,是淀粉生物合成的限速酶之一。从高淀粉甘薯品种川薯34总RNA逆转录的cDNA中克隆了AGPa1和AGPa2两个α亚基编码序列,进行生物信息学分析后,插入植物高效表达载体pCamb ia1301构建了pC-AGPa1和pC-AGPa2两个双元表达载体,并导入根癌农杆菌EHA105中。获得的工程菌菌株可用于遗传转化甘薯、马铃薯和木薯等重要的薯类作物,为薯类作物高淀粉育种奠定了基础。     

苏云金芽孢杆菌kurstaki亚种几丁质内切酶基因的生物信息学分析

以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种（Bacillus thuringiensis subsp kurstaki）基因组DNA为模板,利用1对特异性引物通过Touchdown PCR方法扩增了长为2576bp的几丁质酶kchi基因序列（GenBank登录号：AY189740）。生物信息学分析发现：该序列包含1个完整的开放阅读框,编码688个氨基酸,推测是分子量约为75820。等电点pI=5．89的几丁质酶前体。序列和结构比较分析结果表明：Kchi属于几丁质内切酶,包括几丁质酶催化区、粘蛋白Ⅲ型同源区和几丁质结合区3个结构域,在N端还有1个分泌信号肽。除与胁巴基斯坦亚种几丁质酶同源性较低（相似性为61．3％）外,与Bt其他亚种的同源性都较高（≥92．0％）。     

甘薯抗黑斑病材料AFLP标记分子鉴定初步研究

以南薯88等12个抗感黑斑病品种为材料,通过甘薯黑斑病室内抗性鉴定,确定其抗感病程度。通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了甘薯黑斑病的AFLP分子标记体系。并用该体系找到了与甘薯抗黑斑病紧密相关的特异性DNA片段,对该片段克隆、测序后发现该DNA片段由320个碱基组成,为进一步分析该片段的特异性和灵敏性为甘薯抗黑斑病分子标记辅助育种奠定了基础。     

不同抗生素对甘薯遗传转化的影响

探讨了卡那霉素(Kan)、头孢霉素(Cef)、羧苄青霉素(Cn)3种抗生素对甘薯遗传转化植株生长的影响。确立了甘薯用农杆菌介导的遗传转化研究中抑菌剂和筛选剂的计量方案。甘薯腋芽对卡那霉素(Kan)敏感，甘薯叶片次之。当卡那霉素(Kan)为50mg／L时植株的生长基本停止，当卡那霉素(Kan)为70mg／L时，甘薯腋芽一周就变白，3～5d褐变死亡。甘薯叶片20d左右全变白，井慢慢死亡。头孢霉素(Cef)为200mg／L时对甘薯愈伤的分化有一定的促进作用。羧苄青霉素(Cn)对甘薯的愈伤的分化影响不太明显．但浓度超过400mg／L时对甘薯出愈有抑制作用。     

四川省高淀粉甘薯品种资源亲缘关系SRAP分析

甘薯是我国重要的粮食作物和能源作物。本实验用30对SRAP引物研究了39份用于甘薯高淀粉育种的品种资源之间的亲缘关系。各引物组合产生10~40个扩增带,30对引物共产生87个多态性带,平均每对引物组合产生2.9个多态性带。在遗传距离(GD)为0.585处,可将39个甘薯品种分为A、B、两类。A类21个占整个实验材料的59%,其中A类有高淀粉型材料12个(57%),B类18个占整个实验材料的41%。A类中的高淀粉材料明显B类,A、B两大类中的低淀粉材料大致相等,B类中的一般型材料明显,从聚类图来看四川省用于甘薯高淀粉育种的品种资源材料的遗传多样较丰富。     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因crylA的克隆及特征分析

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillus tburingiensis subsp sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力。根据crylA类基因序列设计特异引物，应用PCR技术从该茁株中扩增得到一大小约为3．6kL的DNA片段。将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α。在ABI PRISM377自动测序仪上对其5’及3’端进行部分测字，结果表明其核苷酸序列与crylA基因高度同源。     

转苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因抗虫水稻的GUS和PCR辅助选择

报道了转基因抗虫水稻克螟稻1号（Ts-9)与非转基因恢复系川恢949、H97810－17及保持系212B等杂交F3代的GUS和PCR检测。GUS检测的结果，Ts-9与非转基因川恢949、97810－17杂交F2代有较多的GUS阳性植株。GUS阴性植株与阳性植株的分离比约为2：1。用设计合成的一对引物进行PCR扩增的结果，大部分GUS检测呈阳性的植株及一个保持系212B与Ts-9杂交F3代植株获得了大小约1200bp的PCR产物，即cryIA(b)基因片段。试验结果表明PCR是比GUS叶片染色更为灵敏、准确、方便的检测方法。