伪狂犬病病毒通用转移载体的构建及应用

将来自质粒pFSV40的300bpBamHI/PstI片段[其中含有SV40poly(A)和部分多克隆位点]插入到质粒pUSK相应的酶切位点中，获得重组质粒USKSV40。该重组质粒中gG基因5’端编码区缺失了428bp。将来自质粒pcDNA3.1( )的946bpBglⅡEcoRI片段（其中含CMV启动子及部分多克隆位点）插入到质粒pUSKSV40的BamHIEcoRI位点，构建了通用载体pPRVCMV-uni，其中含有CMV启动子，SV40poly(A)以及NheI,Pme1,BamHI,BstXI,EcoRI,StuI,XbaI等7个单一克隆位点，将eGFP基因插入到该通用载体的BamHI和EcoRI之间，用所获得的转移载体与TK/gG-/LacZ^ PRV基因组共转染PK-15细胞，经检测eGFP基因在重组伪狂犬病病毒中获得表达，从而证实该通用载体的构建是可行的。本研究研制以伪狂犬病病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。     

通用伪狂犬病病毒转移载体的构建

克隆伪狂犬病病毒（ＰＲＶ） Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１株基因组的ＫｐｎⅠ　Ｊ片段,然后亚克隆其中的ＫｐｎⅠ－ ＰｓｔⅠ片段,缺失重组质粒中的ＥｃｏＲⅠ位点和ＮｏｔⅠ－Ｈｉｎｄ Ⅲ片段;再用ＡｃｃⅠ切去３７８ｂｐ,在此缺失位置插入来源于ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子、多克隆位点和ＢＧＨ ｐｏｌｙＡ信号,构建了通用 ＰＲＶ转移载体 ｐＢｄＴＫ－Ｕｎｉ。此转移载体为改造 Ｂａｒｔｈａ－Ｋ６１株及开发二价或多价基因工程疫苗提供了有力工具。     

LODE本体开发系统客户端的主要功能与特点

本文从知识领域管理、本体编辑维护、词汇管理及文档标注等方面介绍了LODE(Large Ontology Development Environment)知识本体开发环境客户端的主要功能和特点.     

农业生产技术本体构建与语义检索实现

本体的构建将为农业生产技术语义检索提供知识组织基础,并进一步为农业语义网的建设提供前提.通过对农业生产技术本体建设过程中的应用背景分析.提出本体构建的思路并对其构建进行了详细阐述,最后介绍了基于本体的语义检索的简单实现.     

射频识别技术及其在农业上应用

本文介绍了射频识别 (RFID)技术及其在国内外农业领域中的应用 ,并提出我国开展以“电子标签”为主的RFID技术在农业领域应用的展望     

猪瘟疫苗1次免疫对生长猪群免疫保护的研究和应用

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病。初生仔猪对猪瘟的防制关键是排除母源抗体干扰,确定合适的首免日龄。母源抗体的存在,可使仔猪在一定时间内被动地得到保护,但接种猪瘟疫苗的疫苗抗原会被母源抗体所中和,使仔猪免疫效果打折,免疫保护期缩短。文章摸索出在母源抗体水平降低到合适临界点的时候,使用合适免疫剂量使得猪瘟疫苗1次免疫对生长猪群产生较长时间的免疫保护,商品肥猪可以保护至出栏。     

江苏省蚕桑产业化经营模式分析

介绍了江苏省蚕桑产业化经营的现状,并在分析当前蚕桑产业化经营模式存在的主要问题基础上,提出了创新完善产业化经营模式、促进各方利益的良性互动,依托现有资源优势、做大做强龙头企业,引导龙头企业履行社会责任、促进完善利益分配机制,加强宏观调控、规范收购秩序等促进江苏省蚕桑产业稳定发展的政策建议。     

家蚕vasa基因的结构及表达型研究

vasa是决定生殖系发育的重要调控蛋白因子之一,具有广泛的保守性。利用家蚕基因组和EST库的数据资源,分析了家蚕vasa基因的结构,并与已有报道的18个物种的VASA蛋白质的结构域序列进行了比对分析,同时对家蚕vasa基因在家蚕胚胎发育11个时期的表达型及幼虫期8个不同组织的表达特异性进行了验证。结果表明,家蚕vasa基因包含有13个外显子,比果蝇vasa基因的外显子数量(7个)增加了6个,在第3内含子有1个转座子插入;家蚕vasa基因在未受精卵和胚胎发育的各个时期均有表达,但只在幼虫生殖腺中有表达。将家蚕vasa基因的一条cDNA片段用地高辛标记作为探针,对家蚕幼虫的生殖腺及胚胎进行全胚原位杂交,结果进一步表明家蚕vasa基因在幼虫期只在精原细胞、精囊、卵巢管等生殖系相关的细胞和组织中表达,在发育5d胚胎的生殖腺部位也有明显表达。     

猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定

利用基因工程技术,将编码梅山猪α-干扰素成熟蛋白基因(mPoIFNα,501 bp)亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNα。用化学方法(LiCl)将线性化的mPoIFNα与ssDNA共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以高浓度的G418筛选多拷贝重组子。该高拷贝菌株经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明在毕赤酵母中猪α-干扰素获得分泌型表达,表达产物约为20 000,在GS115中的表达量约为40mg/L,占GS115表达的可分泌型总蛋白的40.1%。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性抗猪α-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素生物活性,试验结果表明rPolIFNα具有较高的抗病毒生物活性,在MDBK中的抗VSV比活性为8.0×106U/mg。