雏鸡克雷伯氏菌病的诊断及其氢氧化铝灭活疫苗的安全性检测

本文对临床采集的蛋鸡病料进行镜检、细菌分离培养、生化特性和致病性分析后, 确定为克雷伯氏菌感染; 同时制备了自家氢氧化铝灭活苗, 并对疫苗的安全性、保护性及免疫原性进行了检测, 结果表明: 利用当地发病鸡群分离的克雷伯氏杆菌制成的灭活苗性能良好, 使用安全可靠。     

mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因重组腺病毒对B16动物模型的抑瘤作用

为探讨双启动子调控HN基因重组腺病毒Ad-mTERTp-mTyrp-HN对小鼠黑色素瘤动物模型的抑瘤作用,试验构建B16裸鼠皮下移植瘤模型,采用HEK293细胞扩增重组腺病毒,进行纯化和滴度检测。将重组腺病毒Ad-HN、Ad-mTERTp-HN、Ad-mTyrp-HN、Ad-mTERTp-mTyrp-HN、Ad-GFP和PBS通过尾静脉注射裸鼠,冰冻切片观察裸鼠肿瘤内GFP绿色荧光表达情况,通过肿瘤生长和裸鼠存活情况计算抑瘤率,探究其在体内的抗肿瘤作用。结果显示:重组腺病毒在HEK293细胞中扩增,滴度分别为10^11.250,10^12.250,10^10.625,10^12.125,10^12.250 TCID50/mL;肿瘤组织中能观察到黑色素细胞,证明皮下黑色素移植瘤模型构建成功;重组腺病毒对脏器无损伤,且在双启动子组脏器中没有观察到黑色素细胞的肝肺转移;通过尾静脉注射重组腺病毒后能够在肿瘤中观察到荧光表达;与其他组相比双启动子组重组腺病毒不但能抑制黑色素瘤的生长,而且能延长裸鼠的生存期,抑瘤率为55.5%。因此,该重组腺病毒Ad-mTERTp-mTyrp-HN具有靶向性,并且可以抑制肿瘤生长,可为黑色素瘤的治疗提供参考。     

禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗的研制

利用禽巴氏杆菌C48-1、C48-2强毒株、禽大肠杆菌O78和O1血清型强毒株及克雷伯菌临床分离株制苗,通过疫苗对鸡的免疫效力试验、疫苗最小免疫剂量试验、疫苗产生坚强免疫力时间的测定、疫苗免疫期的测定和疫苗保存期的测定等,研制出禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗.结果该三联灭活疫苗安全可靠,免疫原性良好,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫7 d后产生坚强保护力,疫苗对上述疾病的保护率为100%,免疫期为6个月,4 ℃条件下保存期为9个月.     

表达鸡TRAIL基因的重组5型腺病毒构建

本研究采用RT-PCR从鸡脾细胞扩增到TRAII,基因,测序验证后,将扩增的TRAIL基因开放阅读框克隆到pShuttle-CMV上,与pAdeasy-1载体在BJ 5183细菌内同源重组,获得含有TRAIL基因的5型腺病毒重组质粒,进而将Pac Ⅰ线性化重组质粒转染AD-293细胞,收获重组腺病毒.并对后者进行RT-PCR扩增,获得TRAIL基因片段,经western blot鉴定显示构建的重组腺病毒可表达TRAIL蛋白,表明TRAIL基因在构建的重组腺病毒rAd5-TRAIL中得到表达.本研究为下一步的动物试验和研究TRAIL基因的抑瘤作用奠定了基础.     

血凝性脑脊髓炎病毒血凝抑制试验方法的研究

为检测某猪场的猪感染血凝性脑脊髓炎病毒的情况,用250 mL/L 的鸡红细胞和200 g/L的高岭土去除非特异性物质,使用4单位抗原及5 mL/L鸡红细胞做HI 试验,发现这些条件较适宜。用此法对其他5 种猪传染病抗血清进行检查,发现均不产生非特异性血清学反应。另外,本试验用滤纸吸附血清与分离血清做HI比较试验,其HI价差异不显著,从而为以后进行血清学调查提供了一种便利的方法。用分离的HEV与日本HEV 67N毒株抗原进行比较,两者的HI价一致。     

巴氏杆菌耐药性检测芯片的研制

根据磺胺耐药基因sulI、sulII,链霉素耐药基因strA、strBy,氯霉素耐药基因CatB2和四环素耐药基因TetG多态性位点和突变位点的基因序列,设计特异性探针,构建耐药基因检测芯片。利用该芯片对巴氏杆菌耐药菌株进行检测,得到的结果与药敏检测结果完全一致。该研究为巴氏杆菌耐药基因的高通量、并行化、自动化和快速检测奠定了基础。     

东北虎巴氏杆菌病的诊断及病理形态学观察

应用常规的病理剖检技术解剖死亡东北虎，观察其病理变化；将病料无菌操作接种血清肉汤培养基培养获得1株细菌，经形态学观察和动物回归试验证实为高致病性巴氏杆菌；进而对死亡虎的各脏器进行病理组织学观察和分析，为东北虎的巴氏杆菌病提供了相关诊断资料。     

仔猪克雷伯氏菌病的病原分离鉴定及其疫苗制备

克雷伯氏杆菌既是一种人兽共患病病原又是一种可引起多种动物患病的条件性致病菌。常可引起仔猪败血性克雷伯氏杆菌病,引起仔猪大量死亡,本文对临床采集的病料进行镜检、细菌分离培养、生化特性和致病性分析后分离出克雷伯氏菌;同时制备了自家氢氧化铝灭活苗,并对疫苗的安全性、保护性及免疫性进行了检测。结果表明:利用当地发病猪群分离的克雷伯氏杆菌制备的灭活苗性能良好使用安全可靠。     

天津地区某大型宠物医院犬类皮肤病流行病学调查

为了解天津地区宠物犬感染皮肤病的发病情况,对天津地区某大型宠物医院2018年3～6月接诊的166例犬皮肤病进行流行病学调查,分别从发病犬的品种、年龄、性别、病原、绝育情况等5个方面进行了统计学分析。结果显示:接诊犬共18个品种,其中,发病率分别为贵宾犬19.28%、中华田园犬15.06%、斗牛犬13.25%;发病年龄以2岁以内的未成年犬居多,占56.02%,2～9岁成年犬及中老年犬发病较少,分别为22.89%和10.24%,10岁以上的老年犬发病率相对较高,为10.84%;雄性占62.65%,较雌性犬易感;病例多为传染性皮肤病,以真菌感染为主,且多为混合感染,其他非传染性皮肤病较少;绝育犬仅为调查总数的7.22%。结果说明天津地区3～6月间犬类的皮肤病以真菌为主,且混合感染居多,幼犬感染占比较大,本研究为宠物临床皮肤病的科学防治提供依据。     

东北虎巴氏杆菌毒力基因toxA的克隆及同源性分析

通过对吉林市江南公园送检东北虎病例的病原分离鉴定,分离出多杀性巴氏杆菌,为进一步加强对该病的流行病学调查,并为准确诊断和治疗该病提供依据,实验对该株巴氏杆菌毒力基因toxA进行了研究。根据巴氏杆菌毒力基因toxA序列设计合成1对引物,以临床分离的虎源巴氏杆菌为模板,通过PCR技术,扩增出toxA基因片段。将长约526bp的toxA目的基因克隆到pGEM-T载体上,通过核苷酸序列测定,结果表明toxA基因序列与发表序列（X51512）的同源性为100%。流行病学调查显示,东北虎巴氏杆菌病的病原可能来自其食物（牛、羊肉等）。因此,在饲养过程中应加强检疫,切断巴氏杆菌病食源性传播途径。