白背飞虱海藻糖酶Treh-2基因克隆及生物信息学分析

利用同源克隆及RACE方法,从白背飞虱Sogatella furcifera中克隆获得海藻糖酶基因(Treh-2)全长cDNA序列(GenBank登录号:JX204291),该基因全长为2 065 bp,包含73 bp 3,UTR和150 bp5,UTR,开放阅读框(ORF)为1 842 bp,编码613个氨基酸.该基因预测蛋白分子质量为70.45 ku,等电点为5.65,有5个预测糖基化位点,有1个信号肽结构.进化分析结果显示,白背飞虱海藻糖酶Treh-2与其他昆虫海藻糖酶Treh-2同源性较高,与灰飞虱相比,同源性为95％,与褐飞虱相比较,同源性为93％.海藻糖酶Treh-2基因克隆和比较分析为进一步深入研究白背飞虱迁飞能力与能量代谢具有重要意义.     

NtMAP70基因在烟草抗马铃薯Y病毒过程中的作用

为了探明微管结合蛋白70(MAP70)在抗马铃薯Y病毒(PVY)中的作用机制,克隆了烟草Nt MAP70基因的全长,并进行了生物信息学分析.利用实时荧光定量PCR研究了该基因在烟草不同时期和不同部位中的表达水平,结果表明,NtMAP70在烟草的各个生长期均有表达,且在根中的表达量最高.构建了基于双生病毒卫星诱导的烟草Nt MAP70的沉默载体,以中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)为辅助病毒在烟草中沉默了该基因.与对照相比,在Nt MAP70基因沉默的烟草中PVY侵染速率明显减缓,病毒含量显著降低.     

DTOPSIS法在不同产地烟叶质量综合评价中的初步应用

对贵州平塘、惠水两县5个收购站点分别从收购库存烟垛中随机抽取K326品种的C3L和C3F各3组样品,经化学检测和感官评吸,汇总了10个烤烟样品12项烟叶质量数据,采用DTOPSIS法进行综合评价。结果表明:5个站点中,F9号样品综合性状最好,F6号次之,所有样品烟叶质量评价为中等-中偏上,综合评判结果与站点烟叶质量的实际表现基本一致。     

野生大豆胁迫应答LRR类受体蛋白激酶基因的克隆及其表达特性分析

从前期构建的野生大豆在高盐、低温、干旱早期的基因表达谱中,选取了在4℃胁迫早期(1 h)上调表达的LRR-RLK的EST,通过SMART和RACE结合的方法获得了GsLRPK的全长序列:该基因全长2 264 bp,共编码714个氨基酸。生物信息学分析表明其氮端含有1个LRR N-terminal domain及串联排列的LRR-Motif;碳端含有丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域的11个亚基。此外,GsLRPK蛋白氮端22个氨基酸为可能的信号肽序列,并且存在1个跨膜结构域,很可能定位于细胞质膜或细胞器膜。半定量PCR分析显示该基因可受干旱、ABA、4℃低温及高盐胁迫的诱导,可能作为一个"关键节点"在胁迫信号传导通路中发挥重要作用。     

三种堆肥对番茄生长及青枯病防治效果的影响

合理施用堆肥能够有效地改善植物的生长条件和土壤的生态环境,从而提高植物对病害的抗性。通过盆栽试验,研究了药渣、 污泥和猪粪三种堆肥以不同比例与泥炭混合对番茄植株生长和番茄青枯病防治的影响。结果表明: 三种不同堆肥均能促进番茄植株生长,其中猪粪堆肥对番茄生长的促进效果最显著,当泥炭与猪粪的混合比例为3∶1时效果最好,当收获番茄植株时,其鲜重和干重较泥炭基础基质处理分别提高了29.8%和41.2%,污泥堆肥次之,药渣堆肥最差; 三种不同堆肥都能抑制青枯病的发生,药渣堆肥对番茄青枯病的抑制效果最明显,当泥炭与药渣的混合比例为4∶1时效果最好,在番茄植株移栽33d 时,其病情指数较泥炭基础基质降低了66.7%,污泥堆肥次之,猪粪堆肥最差。添加不同堆肥使得盆栽基质的理化性质、 酶活性和可培养微生物的数量发生了不同的变化,推测可能是上述因素的变化使其对番茄的生长和青枯病的防治效果产生了明显的差异。     

大肠杆菌菌体氨基酸组成对高渗透环境的响应

在正常和高渗透压(高盐)环境下培养大肠杆菌,利用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)对大肠杆菌代谢物中的氨基酸进行了定性定量分析。结果表明:在两组中均鉴定出14种氨基酸,且两组的氨基酸种类相同;与对照组中同种氨基酸的相对含量相比,实验组中脯氨酸和甲硫氨酸的相对含量明显降低,丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、鸟氨酸、赖氨酸和组氨酸的相对含量明显增加,而丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸的相对含量与对照组相近。     

二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备

以制备的二斑叶螨c DNA为模板,克隆二斑叶螨几丁质酶Se Chi基因功能结构域催化区片段,大小为786 bp。将该序列片段克隆到表达载体p ET-32a(+)中,获得多克隆原核表达载体p ET-32a-Tu Chi。重组质粒经酶切测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),经0.6 mmol·L-1IPTG诱导4 h后高效表达约45 ku可溶性重组蛋白;经His亲和层析洗脱和浓缩获得高纯度的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备Tu Chi多克隆抗体。制备的多克隆抗体经Western Blot证实能特异性地识别几丁质酶而不与非特异性蛋白结合。ELISA分析表明制备的抗体效价达1??80 000,效价较高,为进一步研究二斑叶螨几丁质酶相关功能奠定基础。     

转双价抗真菌基因大豆主要农艺性状的调查与分析

对已获得的对疫霉根腐病抗性显著提高的双价转基因大豆株系G0431和G0433进行了产量性状、品质性状和形态性状的调查与分析。结果表明,在产量性状上,两个转基因大豆株系与对照相比无明显差异;在形态性状上,株系G0431结荚习性由亚有限结荚习性变成了无限结荚习性,株系G0433株高低于对照、生育期短于对照、结荚习性由亚有限结荚习性变成了无限结荚习性;在品质性状上,与对照相比,两个转基因大豆株系蛋白含量有所下降而油分含量有所上升。     

豆荚特异性启动子Pmsg的克隆及抗大豆食心虫植物表达载体的构建

植物基因工程载体构建时,一般采用组成型启动子,因涉及转基因食品安全性问题,在社会上引起争议。采用组织特异性启动子代替组成型启动子,既可调控下游基因的表达又能解决转基因食品安全性问题。采用同源克隆方法从栽培大豆绥农14中克隆了2 278 bp的豆荚特异性启动子Pmsg,与GenBank上的大豆msg基因启动子序列相似性为99%。构建了由启动子Pmsg调控经人工改造、具有抗大豆食心虫功能的基因(Cry1Iem)的表达载体pBMBt,以及由种子特异性启动子PGy2调控Cry1Iem基因的表达载体pBGBt,为抗大豆食心虫基因工程研究奠定了重要基础。