猪口腔液中伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸稳定性研究

猪口腔液作为一种生物检材,在猪群疫病监测和诊断中受到越来越广泛的应用.目前尚不清楚病毒核酸在口腔液中的稳定性.利用猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒,采用荧光定量PCR技术,评估核酸保护剂和保存温度对病毒核酸在口腔液中稳定性的影响.结果显示,在4 ℃或室温条件保存1d后,核酸保护剂组病毒核酸含量比对照组分别高10倍...     

西马特罗杂交瘤细胞株的建立及其单克隆抗体制备和鉴定

用重氮化法将牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）分别与西马特罗（CIM）偶联作为免疫原或包被原,用BSA-CIM免疫BALB/c小鼠,经过3次免疫后,OVA-CIM包被后用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、高敏感性和高特异性的小鼠进行抗原超强免疫;取脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌CIM单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb）的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备CIM mAb,对CIM mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果显示免疫的6只小鼠血清抗体效价均达到10-3;融合后筛选出3B11-H4、2A11-G11和4F5-F11共3株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1∶800、1∶1600和1∶1600,腹水效价分别为1∶2.56×106、1∶1.02×107和1∶2.56×107,3B11-H4株对CIM的IC50为040ng/ml,与瘦肉精、莱克多巴胺等其他β2激动剂交叉反应性小于02%。本试验获得了高效价、敏感、特异的抗CIM mAb,为CIM残留ELISA检测试剂盒和试纸条的建立奠定了坚实的基础。     

沙拉沙星完全抗原的合成及多克隆抗血清制备

为了制备沙拉沙星(SARA)多克隆抗血清,采用碳二亚胺(EDC)法将SARA分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备了免疫原SARA-BSA、包被原SARA-OVA。经SDS-PAGE电泳与紫外扫描初步判定偶联成功,然后用免疫原SARA-BSA分别按20、50μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,于最后1次免疫10d后断尾采血,制备多克隆抗血清。采用间接ELISA方法测定多克隆抗血清效价,间接竞争ELISA方法测定其敏感性和特异性。结果显示,制备多克隆抗血清效价均达1∶10 000以上,IC50为623.5ng/mL,且与其他药物交叉反应率低,具有较好的特异性。     

受体母牛同期发情和鲜胚移植的研究

<正> 在胚胎移植中,受体与供体发情同期化问题,是胚胎移植能否成功的关键因素之一。我们在胚胎移植综合技术研究中,用15—甲基PGF2α诱导受体母牛同期发情,并进行鲜胚移植,现将研究结果报告于后。材料与方法一、受体牛:受体奶牛在郑州、开封、孟县进行选择,黄牛在中牟县进行选择。选择标准为:1.年龄为1.5—8岁,以2.5—5岁的经产母牛为好。2.黄牛体型要大,体高110厘米以上,后躯发育较好。3.体况健康,营养水平在中等以上。4.生殖器官正常,子宫无炎症,没有屡     

IBD试纸条对中强毒力苗毒及分离野毒的检测研究

以琼扩为对照，应用IBD试纸条分别检测了人工感染鸡、疫苗接种鸡、自然发病鸡3种不同类型的法氏囊样品以及不同的疫苗。毒株测定结果显示，IBD苗毒228E、MB、V877、NF8、QC试纸条均为阳性，琼扩对照均为阴性，分离强毒H4、He3、Y2试纸条及琼扩对照均为阳性。法氏囊样品测定结果显示，自然感染病例，H4、He3、Y2感染鸡，228E、MB、V877、NF8接种鸡两种方法测定均为阳性，QC则为阴性。对法氏囊样品的检测结果证明，IBD试纸条具有特异、敏感、快速的特点，其敏感性高于琼扩的敏感性，为IBD诊断提供了新方法。     

百菌清人工抗原的合成及多克隆抗血清的制备

将百菌清(CTN)进行化学修饰后引入羟基活性基团,合成具有半抗原结构特征的百菌清衍生物(CTN-OH);采用N,N-羰基二咪唑法(CDI)将CTN-OH与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫抗原CTN-BSA和包被抗原CTN-OVA,用紫外分光光度法(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;通过动物免疫试验获得鼠源多抗血清,并使用间接ELISA和阻断ELISA的方法对多抗血清进行鉴定。结果表明,半抗原CTN-OH与载体蛋白偶联成功;受免3只小鼠的效价均达1∶12 800,且2号小鼠对CTN的IC50为93.593μg/L,成功获得高效价、高敏感性、特异性强的鼠源多克隆抗血清,为CTN单克隆抗体制备及快速检测方法的建立奠定基础。     

温度敏感型可注射水凝胶的性质及应用研究进展

温度敏感型可注射水凝胶是一种对温度敏感的新型材料,可以随着温度的变化发生物理状态的变化。由于这种特性,该水凝胶材料近年来被广泛的应用于疫苗和药物控释以及组织支架工程等领域。温度敏感型可注射水凝胶材料根据其结构的不同大致可分为5个种类,论文对这5种材料的温变机制、生物相容性、毒性、可降解性等性质进行了综述,阐述了每种材料的特点,并对各个材料在药物疫苗传递系统和组织支架工程两方面的应用研究进展分别进行了归纳和总结,为温度敏感型可注射水凝胶在人类和动物医学领域的应用提供科学依据,并对其未来发展前景进行展望。     

IBD试纸对中等毒力疫苗毒及标准强毒的检测试验

应用IBD快速检测试纸和琼脂凝胶免疫扩散试验(AGIDT),对不同疫苗免疫鸡检测结果均为阴性,对人工感染强毒鸡最早检出IBDV的时间,试纸检测法为感染后36h,琼脂扩散检测法为感染后96h。试纸检出的最低含毒量为800ELD50,ELISA检出的最低含毒量为400ELD50,琼扩检出的最低含毒量为2 5×104ELD50,试纸检出的敏感性比琼扩提高32～64倍。IBD试纸检测简便、快速、敏感、特异,是诊断鸡法氏囊病的有效方法。     

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

用EDC法将BSA和OVA分别和环丙沙星（Ciprofloxacin, CIP）偶联作为免疫原和包被原,并经紫外扫描 (UV Scan)、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定。用合成的BSA-CIP免疫BALB/c小鼠,经过3次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌CIP单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备CIP mAb,对CIP mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表明BSA-CIP人工抗原偶联成功;免疫的3只小鼠血清抗体效价均达到10-4;其中2号小鼠血清CIP抑制效价较高且IC50最低,达48.59μg/L,融合后筛选出Z3G12B3和Z2H8C10两株敏感特异的杂交瘤细胞,其两株细胞培养上清液效价为1:512,腹水效价为1:2.56×105,Z3G12B3株对CIP的IC50为2.47μg/L,与二氟沙星、沙拉沙星有小于0.03％的交叉反应性,与其他抑制物无交叉反应性。本试验获得了高效价、敏感、特异的抗CIP mAb,为CIP残留ELISA检测试剂盒和试纸条的建立奠定了坚实的基础。     

链霉素金标单克隆抗体快速检测试纸的研制及其特性鉴定

建立了分泌抗链霉素单克隆抗体(STR mAb)杂交瘤细胞株并生产了STR mAb,采用胶体金免疫层析试验(GICA)技术成功研制出STR残留快速检测试纸(STR-Strip),并对其性能进行了鉴定.结果显示,目测检测限为12.5 μg/kg;与氯霉素等药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%.研制的快速检测试纸可以在10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合STR残留的现场快速检测.