磺胺类药物在动物性食品中的残留与检测

磺胺类药物是一类广谱抗茵药,临床上主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,还常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用.然而,磺胺药会引起人过敏性反应,且可能有致癌性.因此,磺胺类药物的不合理使用,使其在动物性食品中残留引起生态环境污染和人类健康危害的潜在威胁已倍受关注.因此,研究出一种操作简便、快速、灵敏的磺胺类药物残留检测方法,对于畜产品的安全具有实际意义.酶联免疫吸附法(ELISA)作为一种免疫学检测技术不仅具有上述优点,而且准确性好、特异性强、检测成本低,还可用于大批量样品的检测.而单抗在试剂的标准化及抗体的大量供应上明显优于多抗,所以单克隆抗体技术的应用在药残检测上是主要的发展方向.     

禽腺病毒4型ZZ株的致病性研究

禽腺病毒血清4型(FAdV-4)感染引起的心包积液综合征(HPS)病例在国内鸡群中持续增加,前期从患有HPS的病鸡样品中分离了 1株FAdV-4病毒(FAdlV-4ZZ)并获得了全基因组序列.本研究以FAdV-4 ZZ病毒株感染SPF鸡,从临床症状、存活率、组织病理学变化、病毒的组织分布情况对该毒株的致病性进行了评价....     

苯乙醇胺A人工抗原的制备与鉴定

为合成苯乙醇胺A人工抗原,并制备出鼠源苯乙醇胺A多抗血清,采用琥珀酸酐法改造苯乙醇胺A,应用活化脂法(DCC)和碳二亚胺法(EDC)与载体蛋白相连,合成人工免疫原苯乙醇胺A-BSA和检测原苯乙醇胺A-OVA,并用紫外扫描光谱法、凝胶电泳法(SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定偶联结果.结果显示,在紫外扫描光谱下,合成的免疫原在276 nm处出现最大吸收峰;SDS-PAGE电泳发现,免疫原出现明显的拖尾现象;按10 μg/只的剂量免疫小鼠,共免疫4次,每次间隔3周,最后1次免疫10 d后,断尾采血,经测定,得到的多抗血清的效价均达到1 ∶ 10 000,且1号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为536.8 ng/mL,与其他药物的交叉反应率均小于0.5％,具有很好的特异性.成功合成了苯乙醇胺A人工抗原,并得到了敏感性高、特异性好的多抗血清.     

日粮维生素A对雏鸡免疫应答的影响

本研究测定了日粮中添加0－12.8μg/g维生素A（VA）时，雏鸡20－35d对β－酷蛋白抗原刺激时特异抗体生成水平及T淋巴细胞增殖活性。结果显示，日粮中未添加VA时，T细胞增殖活性和对抗原刺激的特异抗体生成水平都显著低于添加VA组（P＜0.01）。添加VA各组的T细胞增殖活性与抗体水平与日粮中VA含量呈曲线相关（P＜0.01）。且随着VA含量的升高T细胞增殖活性与抗体生成也逐渐升高，当含量为6.4μg/g时，其水平达到最高，而VA高于此水平时，其反应呈下降趋势。日粮中添加6－7μg/g VA，可使雏鸡的体液免疫和细胞免疫活性达到最高，对提高鸡体发育和抗感染能力具有重要意义。     

仔猪大肠杆菌病流行菌株的分离与鉴定

仔猪大肠杆菌病在我省不同类型的养猪场中普遍存在,流行广泛,常导致仔猪成活率下降,生长发育不良,给养猪场造成了很大的经济损失.为了弄清我省仔猪大肠杆菌病流行菌株致病性菌毛类型、抗药性、致病性等特点,以便采取合理的防治措施,我们对全省不同地区流行的致病菌株进行了分离与鉴定,现将结果报告如下.     

猪伪狂犬病毒gB和gC蛋白B细胞表位编码序列的融合表达及活性测定

依据猪伪狂犬病毒g B和g C蛋白的B细胞表位编码序列,分别设计g B和g C蛋白B细胞表位编码序列的融合扩增引物,利用融合PCR技术,将g B和g C蛋白B细胞表位编码序列有机地融合为g B-C表位编码序列。将融合基因片段插入到原核表达载体p ET28a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),1.0 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白g B-C能够高效表达,重组蛋白的分子质量约为38 ku;经Western blot鉴定分析,小鼠抗His标签单克隆抗体和PRV阳性血清均能识别表达的重组蛋白。表明成功表达了融合蛋白g B-C,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。     

磺胺二甲基嘧啶人工抗原的合成及鉴定

用重氮化方法将SM2偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成了免疫抗原BSA-SM2和包被抗原OVA-SM2。紫外扫描及SDS-PAGE电泳结果表明,BSA-SM2,OVA-SM2的紫外吸收光谱与BSA,OVA,SM2相比均发生了改变;用BSA-SM2免疫BALB/C小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体,表明半抗原SM2和载体蛋白偶联成功。     

猪瘟抗体检测试纸研发及制备工艺的优化

为研制灵敏、准确、稳定的猪瘟抗体检测试纸,对胶体金标记猪瘟病毒(CSFV)Erns-E2蛋白的pH、封闭液、保存液及样品垫等试纸生产各环节的保护剂、稳定剂及缓冲系统进行优化,确定猪瘟抗体检测试纸生产的工艺参数,使试纸的准确性、灵敏度及稳定性满足批量生产要求。该试纸在室温干燥条件下可稳定保存1a以上,为实现猪瘟抗体检测试纸的商业化及广泛应用奠定基础。     

喹乙醇人工抗原的合成与鉴定

采用琥珀酸酐法合成喹乙醇半琥珀酸酯(OLA-HS),以质谱法对其进行鉴定;活化酯法合成全抗原OLA-BSA、OLA-OVA,以紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定之;用OLA-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性、特异性。紫外扫描测得OLA-BSA、OLA-OVA中OLA-HS和BSA、OVA的分子结合比分别为17.1∶1和12.4∶1;3号小鼠抗血清的效价最高,对OLA的IC50为58.923 ng/mL,与卡巴氧的交叉反应率为1.841%,与其他药物无交叉反应。通过系列ELISA鉴定,获得高价、敏感、特异的多克隆抗体(pAb),为OLA残留免疫学检测方法的建立奠定基础。     

鸡传染性法氏囊病病毒与DT40 sIgM λ轻链的相互作用分析

为探讨sIgM λ轻链在IBDV感染法氏囊B淋巴靶细胞过程中的作用,对DT40细胞sIgM λ轻链与IBDV的相互作用进行了研究。利用蛋白表达、VOPBA试验、病毒结合与结合抑制试验检测了sIgM λ轻链及DT40细胞结合IBDV的能力。结果表明:sIgM λ轻链在体外能够特异性地结合多种不同毒株的IBDV,这种结合与病毒毒力无关;病毒结合与结合抑制试验结果表明,超过半数的DT40细胞可以结合IBDV,这种结合能够被sIgM λ轻链特异性单抗有效阻断。研究结果表明,sIgM λ轻链是DT40细胞膜表面上IBDV的重要结合位点之一,这为进一步利用DT40细胞研究IBDV感染B淋巴靶细胞的分子机制提供了重要线索。