自动化工作站批量提取烤后烟叶 DNA 方法的建立与应用

为建立高效、快速、准确的烤后烟叶 DNA 提取方法,采用 BioMek NXP自动化工作站与国产DNA 磁珠法提取试剂盒相结合,建立了自动化批量提取烤后烟叶基因组 DNA（作为 PCR 模板）的方法,以获取高质量的烤后烟叶 DNA 满足 PCR 检测需求。结果表明：水浴时间30 min、样本量70～80 mg、80％乙醇洗涤4次能获得 OD260／OD280为1．7～1．9,浓度大于100 ng／μL 的烤后烟叶基因组 DNA,合格率达95．8％。经 PCR 定性扩增烟草硝酸还原酶基因（NR）,该方法所提的 DNA 溶液中无 PCR 反应抑制物残留,可直接用于 PCR 定性分析。烟叶粉末经预处理,取上清液上机后约110 min 可完成96份样品的 DNA 提取工作。     

NtphyB 基因对烤烟生物学特性及次生代谢物的影响

为揭示烟草光受体基因 NtphyB 在烤烟中的作用,研究 NtphyB 超表达植株及 RNAi 的K326多个株系生物学特性及次生代谢物。结果表明：NtphyB 的超表达降低了株高,比对照平均矮9．3 cm,茎围比对照平均增加了0．27 cm,同时改善了净光合速率和气孔导度。次生代谢产物中,生物碱、总多酚、绿原酸和芸香苷的含量与 NtphyB 基因表达水平的趋势一致。表明,改变 NtphyB 表达水平有助于改善烟草品质。     

烟叶腺毛密度与主要品质及抗病性状的灰色关联分析

调查342个烤烟自育品系和6个对照品种的烟叶下表皮腺毛密度。结果表明,蕾期腺毛密度波动较大,腰叶腺毛密度比对照均值显著提高的自育品系有34、88、120、130、142、174、203,极显著提高的有141、156。经灰色关联分析,烟叶腺毛密度与油分及抗病性指标的关联度较低,其次是化学成分,与评吸质量的关联度较高,其中与杂气关联度最高。相比而言,腰叶腺毛密度与香气质关联度较高,上部叶与香气量关联度较高。腺毛密度可作为间接反映烟叶品质的指标之一,并且首次发现了烟叶腺毛的蓝色荧光现象。     

红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响

为研究红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响,丰富洛伐他汀代谢调控机制。用ATMT和REMI法将gus-orf5融合基因转化红曲霉,并对ATMT法的共培养条件和REMI法的内切酶进行优化筛选,对获得的潮霉素抗性菌株进行GUS染色和PCR鉴定,并检测阳性菌株的洛伐他汀含量变化。结果筛选出20μg/mL潮霉素的培养基作为转基因红曲霉的抗性筛选浓度,补充1/10 LB的Co-IM共培养基有利于ATMT法转化,在REMI法中Xba I介导的转化效果较好。用ATMT和REMI法均获得抗性菌落,经PCR检测表明orf5和hyg基因均已导入红曲霉,GUS染色呈蓝色。过表达菌株的洛伐他汀含量比对照明显提高,高达36.89%。红曲霉过表达orf5有利于增加洛伐他汀的积累,为深入研究红曲霉orf5基因的功能提供参考。     

紫红曲霉的复合诱变及培养条件优化

为筛选较高色价和较低橘霉素的优良红曲霉菌株,利用紫外线和氯化锂对Monascus purpureus GX菌株进行复合诱变,结果:在紫外线照射时间为80 s和氯化锂浓度为1.0‰的条件下,获得了1株橘霉素(Citrinin)产量低、色价中等的突变菌株M.S 9.突变株M.S 9发酵的红曲米色价为873 U/g,Citrinin含量为18 mg/kg.将该菌株连续培养5代后,其红曲米色价为892 U/g,Citrinin含量为26 mg/kg.以色价为目标函数(y),初始pH值(x1)、初始温度(x2)、接种量(x3)、乙醇浓度(x4)、豆油浓度(x5)为试验因子,选用二次饱和D-最优设计法(R521D)设计试验方案.经软件统计分析得到红曲米色价与各试验因子的最优回归方程和色价达到理论最高值1 411 U/g时,各因素的最佳组合为:初始pH 3.8,初始温度26.8℃,接种量13.5%,乙醇浓度0.5%,豆油浓度1%.经验证,各因子为最佳组合时,红曲米色价为1 423 U/g.     

蝉拟青霉生物多样性Ⅰ.蝉花和蝉拟青霉的形态多样性

采集蝉花标本50余例,研究观察了蝉拟青霉的多个分离体。结果表明,广泛分布于不同地域不同生态环境的蝉拟青霉形成了形态特征和产孢结构的多样性。研究其存在和变化规律有助对生物资源的保护和利用,有助充实真菌学内容和丰富其基础理论。