辽宁境内迁徙候鸟（2009-2010）高致病性禽流感病毒流行病学调查分析

野生候鸟是禽流感病毒的自然宿主,对流感病毒的生态和繁殖起重要作用。本研究对辽宁境内边境地区的迁徙候乌进行了禽流感流行病学分析,在2009-2010年间,分别从辽宁境内丹东、葫芦岛、东港、盘锦、锦州、营口等6个边境地区中野生候乌迁徙路线上采集了15种野生水乌,共80份血清样本和840份拭子样品,通过血凝抑制试验,运用H5、H7、H9亚型的禽流感标准抗原检测待检血清的禽流感病毒抗体,结果在白鹭、夜鹭、斑头雁、白嘴鸥、燕鸥等几个品种野生候鸟和鸭、鹅所采血清中未检测到有抗H5、H7、H9亚型流感病毒的抗体（〈310g2）;病原检测方面,从白鹭、夜鹭、斑头雁、白嘴鸥、燕鸥等迁徙候鸟中检测未能到禽流感病毒。     

犬瘟热病毒核衣壳蛋白N基因的真核表达及鉴定

根据GenBank发表的犬瘟热病毒N基因全序列,设计合成了1对特异扩增CDV N基因的引物。以山东泰安分离的CDV-FOX-TA株细胞毒中提取病毒RNA来制模板,利用RT-PCR扩增出了1.6kb的N基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRES-N真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO-K1细胞,通过潮霉素筛选得到阳性克隆,间接免疫荧光实验（IFA）鉴定N基因在CHO细胞中的表达,并用RT-PCR方法从转录水平证实N基因在CHO-K1细胞中的表达,最终建立了CHO/ CDV-N细胞株,为犬瘟热病毒的血清学检测和基因疫苗的研制奠定了基础。     

传染性腔上囊病病毒HN01超强毒株VP2基因的克隆和序列分析

根据GenBank中登录的传染性腔上囊病病毒(IBDV)标准强毒株52-70株基因组序列，设计并合成了1对扩增IBDV VP2基因的特异性引物。以IBDV超强毒分离株HN01感染发病鸡腔上囊组织中提取的病毒RNA为模板，用RT-PCR扩增出了1．45kb的cDNA产物，将扩增的IBDV HN01株VP2基因克隆于pMD 18-T载体上，获得了pMD18-T-VP2重组质粒。将IBDV HN01株VP2基因序列测定结果与已发表的其他IBDV毒株VP2基因序列进行分析比较，绘出系统进化树。结果表明，HN01株与欧洲超强毒株UK661、日本超强毒株OKYM、香港超强毒株HK46等非常相似，而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。     

猪传染性胃肠炎分子生物学诊断方法研究进展

检测TGEV的方法主要有病毒的分离鉴定、免疫荧光抗体试验、病毒中和试验、电镜观察、免疫电镜观察、ELISA方法、核酸探针杂交技术、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析,RT-PCR和荧光定量PCR等,伴随着对TGEV基因组分子生物学的深入研究,一系列分子生物学诊断技术不断出现,现对猪传染性胃肠炎病毒的分子生物学诊断方法的研究进展作以综述。     

辽宁境内迁徙候鸟（2009—2010）高致病性禽流感病毒流行病学调查分析

野生候鸟是禽流感病毒的自然宿主,对流感病毒的生态和繁殖起重要作用。本研究对辽宁境内边境地区的迁徙候鸟进行了禽流感流行病学分析,在2009—2010年间,分别从辽宁境内丹东、葫芦岛、东港、盘锦、锦州、营口等6个边境地区中野生候鸟迁徙路线上采集了15种野生水鸟,共80份血清样本和840份拭子样品,通过血凝抑制试验,运用H5、H7、H9亚型的禽流感标准抗原检测待检血清的禽流感病毒抗体,结果在白鹭、夜鹭、斑头雁、白嘴鸥、燕鸥等几个品种野生候鸟和鸭、鹅所采血清中未检测到有抗H5、H7、H9亚型流感病毒的抗体(<31og2);病原检测方面,从白鹭、夜鹭、斑头雁、白嘴鸥、燕鸥等迁徙候鸟中检测未能到禽流感病毒。     

水貂阿留申病毒地方强毒株ADV-LN的分离鉴定

本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3 d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。     

“互联网+”时代下的新建高校任课教师的挑战

以互联网+新时代为研究背景,首先从时代的变化、不变的本质和时代的期待的三个角度分析新时代对新建高校任课教师的要求;然后从角色转型、理念转型和过程转型三个角度,并结合新建高校的自身特点对任课教师的教学工作进行阐述;接着从效率问题、融合问题和评价问题三个角度对现有的互联网+教育在研究和应用中出现的问题进行探讨;最后进行总结和建议。     

水泡性口炎病毒N蛋白原核表达及免疫原性分析

本研究旨在克隆和表达水泡性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）特异性抗原N蛋白,进而纯化并分析其免疫原性。根据GenBank中已发表的VSV基因组N基因序列,分别合成VSV两种不同血清型的N基因,经序列对比分析后,设计合成1对特异性引物,PCR扩增获得约1 300 bp的N基因片段,将目的片段亚克隆至pCold Ⅰ原核表达载体中,经IPTG诱导表达后,采用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化重组N蛋白。SDS-PAGE分析表明,N基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为50 ku;Western blotting检测结果表明,该重组蛋白与VSV多克隆抗体发生特异性反应。本试验成功构建了VSV-IND和VSV-NJ的原核表达载体,实现了N蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,纯化后的重组蛋白具有良好的免疫原性。     

猪伪狂犬病病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用

本研究针对猪伪狂犬病病毒的gE基因序列进行分析比较,设计了一条TaqMan-MGB探针,建立了区别野毒株及基因缺失疫苗株的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法检测猪伪狂犬病病毒特异性强,能很好的区分猪伪狂犬病病毒与其它病毒。用该方法对83份疑似样本进行检测,与常规PCR检测法符合率达到100%,表明该方法用于检测猪伪狂犬病病毒具有良好的实用性。     

Ⅱ型猪圆环病毒SYBR GreenⅠ模式实时定量PCR检测方法的建立

登录GenBank下载猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV-2)的全基因组序列,根据其保守区域,设计1对特异性引物,采用SYBR Green Ⅰ随机结合渗入法,建立该模式的实时定量PCR检测方法,构建了检测PCV-2型的标准DNA模版,循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0×102～1.0×107拷贝·μL-1浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999。该方法用于猪圆环病毒2型的检测具有很高的特异性,其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍,可以用于猪圆环病毒2型的快速检测。