花菜类SSR分子标记筛选及其在品种鉴定上的应用

青花菜(B.oleracea var.italica)和花椰菜(B.oleracea var.botrytis)均为以花球为产品的甘蓝变种,亲缘关系较近,生产上常以花菜类来统称。为筛选出一套花菜类品种简单重复序列的鉴定引物,分三批从已公布的SSR引物中挑选出70对引物,以8份品种为材料,根据扩增多态性好、稳定性高、染色体上分布均匀等原则筛选出36对引物,用于花菜类品种鉴定。经173份品种验证,该引物组合可以很好地区分花椰菜与青花菜,能鉴定出绝大部分品种,只有3个品种相似系数达1,无条带差异,无法区分开。形态性状观测发现这3个品种差异极小,验证了本研究建立的SSR标记鉴定品种方法的准确性。36对引物中只需要10对核心引物就可以达到最大区分能力,不同组合理论分辨力不同,最大可达2.92×10¹²,推荐染色体上分布均匀的组合作为花菜类品种鉴定的最优组合,其理论分辨率为1.09×10¹²。本研究表明SSR分子标记可以用于花菜类品种鉴定,可为今后花菜类产业化中种苗纯度和真实性鉴定及种质资源管理提供技术支撑。     

彩色马蹄莲ISSR体系的建立及初步分析

选取白花马蹄莲和10个颜色有代表性的彩色马蹄莲栽培品种为材料,采用改进的SDS法提取叶片基因组DNA,通过正交设计研究Mg2+、Taq DNA聚合酶和模板DNA、引物的影响,确定彩色马蹄莲最佳ISSR反应体系为:每20μL中含1×PCR Buffer、1.5 mmol/L MgCl2、0.6μmol/L引物、20 ng模板DNA、1 UTaqDNA聚合酶.从100个引物中筛选出的15条进行分析,共获得了109条带,其中多态性为99条,占总数的90.8%.选用NTSYS软件进行聚类分析,绘出了供试材料的亲缘关系图,为系统进行马蹄莲属植物的遗传多样性分析和品种选育提供了参考.     

定性PCR技术及卡那霉素对8个番茄品种的转基因检测

本研究利用定性PCR技术对8个不同番茄品种中外源基因35S启动子、NPTⅡ基因和NOS终止子进行检测。实验结果表明,阳性对照可以稳定扩增到预期的大小片段,而待检测品种和阴性对照则没有扩增到预期产物。利用100mg／L的卡那霉素对8个不同番茄品种的种子进行萌发试验,再用50mg／L的卡那霉素对番茄外植体（子叶和下胚轴）进行抗性验证,结果显示卡那霉素抗性筛选实验结果与定性PCR结果一致。本文通过对这两种检测方法的优缺点进行研究分析及比较,初步建立了一个对不同品种番茄进行转基因检测的体系。     

萱草属DUS测试中数量性状的测量方法研究

为了减小特异性、一致性和稳定性(Distinctness,uniformity and stability,DUS)测试中的数量性状观测误差,提高测量精度,本研究以种植于上海的30个萱草品种为试材,比对了定植时间、测量时期和观测部位对DUS测试数量性状的影响,分析了数量性状间的相关性,探讨了通过其它性状推测花直径的可行性。结果表明:定植时间主要影响叶丛、叶片和花葶3个部位的数量性状;移栽会影响其性状表达,第2个生长季叶丛高度和直径、叶片长度和宽度、花葶长度和粗度及花数量均明显大于第1个生长季观测值,大部分性状第3个生长季观测值均等于或小于第2个生长季的观测值;随着花序向上开放,花葶长度、花葶粗度和花数量基本无显著差异,其余5个性状不断变小;叶相关数量性状在营养生长期与盛花期测量无显著差异;所有数量性状与2～11个其他性状间存在显著相关,3个数量性状就能区分所收集的30个品种;通过外花被片长度和花型可以推测花直径。综上,萱草DUS测试需在休眠根状茎定植后的第2个生长季进行观测,前3朵正常开放的花均可为观测对象,叶相关性状可以改在盛花期测量,该结果可为萓草属数量性状的准确采集提供参考。     

番茄抗黄化曲叶病毒育种研究进展

本文分别对近年番茄抗黄化曲叶病毒的传统育种、分子辅助育种、基因工程育种进展进行了综述。栽培番茄均不抗番茄黄化曲叶病毒,所以传统育种采用从野生近缘种中筛选抗性材料,以其为亲本与栽培番茄进行杂交来获得抗性;野生近缘种中的抗性位点Ty-1、Ty-2和Ty-3及一些QTLs先后被定位,也筛选出了可鉴定巩一,基因的SSR-47标记及鉴定Ty-3的SCAR标记;通过转基因技术获得抗性是研究热点之一,目前转入番茄后表现出抗性的序列有TYLCV病毒的CP基因、REP基因的部分序列或反义序列、不编码的保守序列以及源于白粉虱的GroEL基因。同时讨论了今后的主要发展方向。     

蜡梅ISSR反应体系的优化

通过不同浓度Mg2 、dNTP、模板DNA、引物的组合试验、及不同浓度引物、Taq DNA聚合酶的单因素试验,筛选蜡梅最佳ISSR反应体系为:每20μL中含1×PCR buffer、2.5 mmol·L-1 MgCl2、0.2 mmol·L-1 dNTP、0.3μmol·L-1引物、30ng模板DNA、1U TaqDNA聚合酶;同时通过梯度PCR试验确定了不同引物的适宜退火温度.     

不同保存方法对蜡梅总DNA提取效果的影响及ISSR-PCR验证

本文以蜡梅新鲜成熟叶片为对照,比较了真空冷冻干燥、硅胶干燥、压标本干燥、45℃烘干、75℃烘干5种叶片干燥方法和4℃保鲜、-20℃冻存、-70℃冻存法对蜡梅总DNA提取效果的影响.结果表明硅胶干燥的样品提取的DNA完整无降解,纯度高,DNA得率为鲜叶的1/3多,压标本干燥的样品可以提到完整的DNA,DNA得率与硅胶干燥的样品相近,提取的DNA含多酚,纯度低.真空冷冻干燥样品的DNA在冷冻干燥过程中小部分受到损伤,DNA得率较鲜叶稍有下降.45℃烘干的样品可以提取到完整的DNA,纯度高,DNA得率约为鲜叶的1/2,75℃烘干的样品的DNA全部降解.ISSR扩增结果表明75℃烘干的样品提取的DNA没有获得扩增产物,其他4种干燥方法提取的DNA的扩增结果与鲜叶相同.鲜叶可在4℃冰箱保鲜存放6 d,在-20℃冰箱中冷藏半月,可在-70℃超低温冰箱中长期放置而不影响总DNA的提取质量和ISSR扩增结果.     

芹菜EST-SSR分析

以NCBI公布的EST数据为基础,通过一系列软件处理,连接成长175.294 kb的无冗余EST序列324条,从23条序列中发现25个SSR,每7.011 kb出现1个SSR位点.运用Primer 3设计出引物15对,结合文献公布的11对引物,以46份中国芹菜品种及7份西芹品种的总DNA为材料,对EST-SSR在芹菜上的应用可行性进行验证,53份芹菜品种的12个微卫星位点共检测到32个等位基因,等位基因2(引物4)～4个(引物11),平均等位基因数为2.7个;并对53份材料的亲缘关系进行了鉴定.     

我国番茄新品种保护与DUS测试现状

番茄是我国重要的茄果类蔬菜之一,国内原始材料保存超过了10 000份。截至2018年底,番茄品种保护申请量(333个)和授权量(90个)均处于国内蔬菜品种的第二位,分别占蔬菜总申请量和授权量的14.33%和13.27%。本文对番茄品种的保护及DUS测试现状进行重点介绍,旨在为后期番茄新品种保护及种业发展提供参考。     

矮牵牛DFR-A基因的克隆与表达分析

通过分离矮牵牛DFR-A基因,研究其在不同部位的表达规律和酶活性变化,为花色素苷合成的结构基因分离及其他研究奠定基础。基于已公布的矮牵牛DFR序列,直接从矮牵牛花瓣中分离了DFRA基因序列,利用实时荧光定量PCR技术研究其在不同器官中的表达特性,同时测定了不同器官中的DFR酶活性。（1）矮牵牛DFR-A基因cDNA序列为1473 bp,该基因最大开放阅读框为1143 bp,编码380个氨基酸。（2）DFR-A基因在矮牵牛各种器官中均有表达,但不同组织中表达量存在差异,在花药中的表达量最高,其次是初开和盛开花瓣中,各期花蕾中的表达量都较低,而在叶中表达量最低。（3）DFR酶在叶片及花药中几乎无活性。在初开花瓣中达到最高峰。（4）除花药以外的部位,DFR酶活性与DFR mRNA浓度存在线性相关性。矮牵牛DFR酶活性主要受转录调控,活性在初开花瓣中最高。