沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究

试验通过候选基因法,选定卵泡抑素(follistatin,FS)作为影响水牛繁殖性能的主要候选基因,通过基因工程的方法,用XhoⅠ、SacⅡ双酶切广西大学动物遗传育种与繁殖实验室克隆的添加有ACC的Kozaka 序列的pMD-bFS质粒和pEGFP-N₁,构建pEGFP-bFS真核表达质粒,将其与阳离子脂质体混匀后,分别转染体外培养的水牛胎儿成纤维(BFF)细胞和仓鼠肾(BHK)细胞系,经过48 h培养后,在相差荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达水平,用RT-PCR和Western blotting方法对转入质粒表达进行定性鉴定。结果显示,本研究成功构建了添加有ACC的Kozaka 序列的pEGFP-bFS真核表达质粒,该重组质粒在BFF和HBK两种细胞均表达,但在HBK细胞系的表达量稍高。本研究结果将为下一步制备具有生物活性的bFS工程疫苗,研究bFS对水牛繁殖性能的影响提供参考。     

广西沼泽型水牛血清蛋白多态性的研究

本研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对193头广西西林水牛和196头广西富钟水牛的血清运铁蛋白、白蛋白和淀粉酶的基因型、基因型频率及遗传变异系数进行分析,探讨这两个品种的遗传背景。结果表明,西林水牛和富钟水牛运铁蛋白(Tf)受Tf^A和Tf^D两个等位基因控制,基因频率Tf^D＞Tf^A,以Tf^D为优势基因,DD为优势基因型;西林水牛和富钟水牛的白蛋白(Alb)受Alb^A和Alb^X两个等位基因控制,基因频率为Alb^X＞Alb^A,以Alb^X为优势基因,西林水牛以XX为优势基因型,而富钟水牛以AX为优势基因型;富钟水牛血清淀粉酶(Amy)存在AA、AB、BB、BC、AC、CC 6种基因型,受Amy^A、Amy^B、Amy^C 3个等位基因控制,在AmyⅠ、AmyⅡ中都是以Amy^A为优势基因,分别以AB和BC为优势基因型。本研究结果发现,3种血清蛋白在西林水牛和富钟水牛中不存在性别差异(P＞0.05),提示广西这两个优良地方水牛品种的遗传稳定性较好。     

广西眼镜蛇Dmrt基因DM结构域克隆及序列分析

[目的]了解广西眼镜蛇Dmrt基因DM结构域特性,为探讨眼镜蛇性别决定和分化发育的分子机制及证实Dmrt基因家族在爬行动物进化中的保守性提供理论依据.[方法]以广西眼镜蛇为材料,采用简并PCR扩增克隆眼镜蛇Dmrt基因DM结构域,并分析其与人、猕猴、牛、小鼠、大绿蛙、中华蟾蜍、扬子鳄等相应Dmrt基因DM结构域的同源性及系统进化关系.[结果]克隆获得广西眼镜蛇Dmrt基因家族的两个成员,分别命名为Nn1 Dmrt和Nn2 Dmrt.经系统进化分析,发现两个Dmrt基因DM保守区核酸序列与人、猕猴、牛、小鼠、大绿蛙、中华蟾蜍、扬子鳄相应Dmrt基因保守区核酸序列的相似性均在74%以上,其推导氨基酸序列的相似性均在80%以上.[结论]Dmr基因DM结构域编码序列在不同物种中同源性较高,Dmrt基因家族在动物系统进化上具有高度的保守性.     

水牛κ-酪蛋白外显子4基因的克隆及序列分析

本研究根据普通牛的κ-酪蛋白基因设计一对引物,首次成功扩增出了水牛的κ-酪蛋白外显子4基因,并经序列分析,结果表明κ-酪蛋白外显子4基因片段长780 bp。利用GenBank上的Blast进行比较,中国水牛κ-酪蛋白外显子4序列与地中海水牛、牛、牦牛的κ-酪蛋白外显子4序列同源性分别为99.5%、96.4%、95.9%;氨基酸同源性比较,中国水牛、地中海水牛、牛、牦牛均编码260个氨基酸,中国水牛与地中海水牛、牛、牦牛同源性分别为98.9%、92.0%和91.2%。核苷酸和氨基酸序列同源性结果显示,中国水牛和地中海水牛κ-酪蛋白基因变异不大。但由于在碱基230 bp处发生了一个碱基(A→C)的变化,从而导致其氨基酸也发生了变化,即K(Lys赖氨酸)→R(Arg精氨酸)。本研究为进一步对该基因的功能奠定基础。     

广西百色马生长激素基因的克隆与序列分析

为了丰富优良地方品种百色马的分子遗传学基础数据,试验设计1对特异性引物,利用PCR技术成功克隆百色马的生长激素基因全序列.结果表明:百色马GH基因碱基序列全长1 922 bp(GenBank登录号为FJ604598),包含完整的5个外显子和4个内含子;与蒙古马比较,百色马GH基因DNA序列出现12个碱基的变异,有3个变异位点处于编码区,均为有义突变,突变方式都为G→A的转换,其中第981位碱基G→A致使第89位氨基酸由Arg突变为Lys,第1739位碱基G→A使第185位氨基酸由Gly→Arg,第1 764位碱基G→A使第193位氨基酸由Gly→Asp.基于GH基因构建的不同,动物亲缘进化树的拓扑结构与物种树一致,哺乳动物的GH基因在进化中比较保守.     

罗氏沼虾轮放轮捕生态养殖增收增效

正桐乡市从1992年开始养殖罗氏沼虾,至2016年养殖总面积发展至10000余亩,在原有一年两茬养殖模式基础上,不断探索和总结,形成了完整的罗氏沼虾三批放苗、分批捕捞轮放轮捕高效生态养殖模式,为我市的渔民增收、渔业增效做出了突出贡献。其中张建清养殖户,养殖经验丰富、养殖技术成熟、带头作用明显,为该模式的示范养殖场。该     

河流型水牛尼里-拉菲和摩拉水牛群体遗传结构分析

为了对摩拉水牛、尼里-拉菲水牛进行合理有效的保护,研究其遗传多样性,掌握其遗传背景,试验利用15个微卫星位点对96个个体(尼里-拉菲、摩拉水牛各48头)进行遗传多样性检测。结果表明:在尼里-拉菲水牛15个微卫星位点上共检测到92个等位基因,平均等位基因为6. 133 3,平均有效等位基因为2. 942 3,平均多态信息含量(PIC)为0. 565 5,平均期望杂合度值为0. 618 4;在摩拉水牛15个微卫星位点上共检测到76个等位基因,平均等位基因为5. 133 3,平均有效等位基因为2. 545 4,平均PIC为0. 493 7,平均期望杂合度值为0. 541 3。说明摩拉水牛、尼里-拉菲水牛群体的遗传多样性比较丰富,尼里-拉菲水牛群体的遗传多样性高于摩拉水牛群体。     

长×巴F2代杂交猪黑素皮质激素受体Ⅰ基因克隆与多态性分析

【目的】探讨猪黑素皮质激素受体Ⅰ基因（MC1R）碱基突变与其毛色分离的相关性,为研究猪的毛色遗传分子机制及遗传育种奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的猪MC1R基因同源序列（AF326520）设计引物,以70头不同毛色的长白猪×巴马小型猪杂交F2代（长×巴F2代）猪血液总DNA为模板,PCR扩增MC1R基因序列,并利用PCR-SSCP对长×巴F2代杂交猪的MC1R基因进行单核苷酸多态性（SNP）分析。【结果】长×巴F2代杂交猪MC1R基因编码区序列约963 bp,与参考序列（AF326520）的同源性为99.37%,共有6处碱基发生突变,其中两处（284G→A和306T→C）为错义突变,284G→A导致95Val→Met,306T→C导致102Leu→Pro;其余4处均为同义突变,分别为6C→T、51G→A、364T→C和730G→A。 PCR-SSCP检测结果显示,长×巴F2代杂交猪的MC1R基因均未表现出多态性。【结论】长×巴F2杂交猪的MC1R基因存在碱基突变,其基因型为ED1,但在不同毛色的长×巴F2代杂交猪群体中并未发现MC1R基因呈多态性,即猪毛色多样性不能简单以MC1R基因的多态性进行分析。     

番茄温敏型核雄性不育系地D4杂交组合的4个品质性状同亲回归分析

以母本地D4为共同亲本与其他9个自交系的杂交一代组合及相应亲本作为试验材料,采用Griffing的同亲回归（c.p.r）分析方法,分析比较F1的4个性状的遗传表现和亲子间的相关性。结果表明：单果质量、果实硬度的一般配合力方差较大,分别为80.00 %、93.74 %;可滴定酸和可溶性固形物含量的一般配合力方差和特殊配合力方差分别为53.85 %、54.76 %和46.15 %、44.26 %。可溶性固形物含量、单果质量、果实硬度和可滴定酸的广义遗传力分别为0.765 0、0.750 0、0.649 3和0.928 5,狭义遗传力分别是0.737 1、0.532 9、0.631 5和0.527 3;仅单果质量亲子相关系数达到显著水平。