非洲猪瘟病毒研究进展

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染引起的猪的一种高度接触性、致死性传染病,病死率可达100%,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的疫病,在我国被列为一类动物疫病。因ASFV具有庞大的基因组和复杂的免疫逃逸机制,给疫苗的研发带来了困难,目前尚无商品化的疫苗用于本病的防制。为了更深入地了解ASFV,加快ASF疫苗的研发进程,做到对ASF的有效防制,重点对ASFV基础病毒学的最新研究发现与成果进行综述,主要集中在ASFV的蛋白质功能与作用机制、诊断方法以及疫苗的开发进展方面,以期为ASF的有效防制奠定基础。     

芪板青颗粒体外抗PRRSV效果研究

为了检验芪板青颗粒体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒效果,降低养猪场因感染猪繁殖与呼吸综合征病毒带来的损失,本试验通过调整芪板青颗粒溶液与猪繁殖与呼吸综合征病毒液加到Marc-145细胞中的不同顺序,分别检验芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制、杀灭和阻断作用。结果显示：芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒有一定的抑制、杀灭和阻断作用,在芪板青溶液浓度为24.4～3 125.0 mg/L时,有显著的抑制和杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,在浓度195.3～3 125.0 mg/L时,有显著的阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒作用。结果表明：芪板青颗粒可用于体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒,本试验为芪板青颗粒的应用提供了依据,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了帮助。     

一种防控奶牛产后酮病的中草药饲料添加剂的研究应用

为探讨发酵中草药饲料添加剂在防控奶牛产后酮病方面的应用效果及适宜添加剂量,采用完全随机区组设计,依据胎次、体况评分、上一泌乳周期单产相近的原则,选20头新产牛随机分为4组,每组5头牛。I组为对照组,II组、Ⅲ组、IV组为试验组。对照组饲喂常规日粮,试验组于产后4～30天在常规日粮中每天每头牛按低、中、高三个水平（80、100、120 g）添加发酵中草药饲料添加剂。每头牛早上饲喂的时候人工饲喂添加剂,保证每头牛每天按规定添加量完全饲喂。每头牛试验期27 d,每9 d为一个采样周期。其他饲养管理按牛场原有程序常规进行。试验结果显示：由于奶牛个体差异较大,虽然添加不同水平对产奶量影响不显著,但Ⅲ组产奶量提高水平最大,比I组提高51.34%。乳指标中Ⅲ组到第30天体细胞数显著低于其他组（P <0.05）,比I组降低56.60%,其他乳指标差异均不显著。血清葡萄糖、β-羟丁酸、游离脂肪酸水平随着时间的推移基本上各组均呈逐渐增加的趋势,β-羟丁酸到第30天Ⅱ组和Ⅲ组显著低于Ⅰ组（P <0.05）,均降低20.65%,与Ⅳ组差异不显著（P> 0.05）,其他指标差异不显著。Ⅲ组比I...     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及其Ⅰ类整合子的检测

为鉴定从临床病料中分离的两株细菌(XL株、XT株)的种属、致病性及耐药性等生物学特征,本研究对分离菌进行了纯化、革兰氏染色、迁徙生长试验、16S rDNA的序列比对、小鼠致病试验、药敏试验以及耐药基因Ⅰ类整合子的扩增。结果表明:两株细菌均为奇异变形杆菌;与NCBI登录的猪源奇异变形杆菌的16S rDNA的同源性高达99.9%~100%;两株细菌致病性均很强;两株细菌均存在多重耐药,仅有丁胺卡那对它们高敏;两株细菌均能扩增出Ⅰ类整合子。该研究结果为进一步研究变形杆菌的耐药性提供了科学依据。     

猪丁型冠状病毒与猪流行性腹泻病毒双重实时荧光定量RT-PCR方法的建立和初步应用

猪丁型冠状病毒(PDCoV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV)均为致病性冠状病毒,可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡。为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列,设计了两对特异性引物,分别扩增其N、M基因保守区,并将其克隆至pMD19-T载体;将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板,建立了一种检测PDCoV和PEDV的双重的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,并对其反应的敏感度、特异性和重复性进行了检测。结果表明,本试验所建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法对PDCoV和PEDV的最低检测量分别为51和32拷贝·μL-1,且与PBoV、TGEV、PRV、PCV2无交叉反应,特异性较好;对2016年至2017年在河北省收集的130份仔猪腹泻样本检测,结果显示,PDCoV的检出率为16.9%,PEDV的检出率为66.2%,二者同时感染的检出率为2.3%,与普通RT-PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为PDCoV和PEDV的诊断及分子流行病学调查提供了一种快速、定量检测方法。     

规模化猪场猪蓝耳病防控思路

近年来,中国养猪业的规模越来越大,单体养殖场的存栏量越来越多,同时,集约化、规模化、智能化以及行业内高素质人才占比越来越高,尤其是2018年非洲猪瘟进入中国以来,养猪企业在生物安全意识、生物安全硬件以及生物安全的执行标准上都达到了世界一流水平。在养殖生产过程中,虽然猪场生物安全水平有所提高,但猪蓝耳病依然是严重威胁养猪业的主要疾病之一,据报道,在美国,猪蓝耳病病毒每年造成猪场损失大概在6.63亿美元;而在中国,猪蓝耳病暴发后带来的经济损失平摊到每头母猪身上为1 424.37元/头,可见猪蓝耳病对世界养猪业造成了巨大的经济损失。基于此,本文阐述了规模化猪场猪蓝耳病的防控思路,以期给各养殖企业在防控猪蓝耳病方面提供参考。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因的亚克隆及原核表达

本研究从河北省保定地区6份疑似感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病猪的肺脏中,通过RT-PCR获得PRRSV GP5蛋白完整的基因片段,克隆至pMD18-T载体.经测序鉴定正确后,再设计一对引物从重组载体pMD18-T-GP5中扩增出缺失了N端30个氨基酸残基的dGP5的编码序列dORF5,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建原核重组质粒(pGEX-6p-dGP5),转化至E.coli BL21感受态细胞.经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳可检测到分子质量为40 ku的目的蛋白.经Western blot分析表明,该蛋白与PRRS阳性血清具有良好的免疫反应性,为进一步研究PRRS新型基因工程疫苗和诊断试剂奠定了基础.     

携带BCoV抗原表位的乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒的制备及免疫效果评价

为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351～aa403 (159 bp)和aa771～aa784 (42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)主要免疫显性区域(MIR),合成该重组基因后克隆至pET-32a(+),经酶切鉴定显示正确构建了重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2。将该重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3)和伴侣感受态细胞BL21(DE3)(含pG-KJE8分子伴侣质粒),经诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化两种不同表达形式的重组蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及纯化效果,结果显示两种表达系统均正确表达了重组蛋白,分别命名为VLP-A、VLP-B,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达。纯化后浓度分别为0.9 mg/mL、1.4 mg/m L。利用透射电镜观察纯化后的两种重组蛋白是否形成VLP,结果显示二者均形成VLP,且可溶性表达的重组蛋白形成的VLP产量略高。将两种VLP乳化后...     

猪流行性腹泻病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用

<正>猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由PEDV引起的仔猪腹泻,呕吐的一种高致死性的肠道传染病。本病在英国首先爆发,后逐渐扩展到欧洲,亚洲乃至全球,在2010年,我国多省份大面积发病,对我国的养猪业造成了严重的经济损失。PEDV属于冠状病毒科冠状病毒属,与猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gas-