独联体国家棉花携带真菌性病原的分离及形态鉴定

从来自哈萨克斯坦,吉尔吉斯斯坦,乌兹别克斯坦和土库曼斯坦的２５个棉花及短绒样品中,用棉花纤维涂布平板的方法,得到１５０余个培养物,鉴定出以下病原：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ、Ａ．ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ、Ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｕｍｒｏｓｅｕｍ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ,Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ     

产酶溶杆菌OH11双精氨酸转运系统关键基因tatC的功能分析

本研究采用同源重组的方法对产酶溶杆菌Lysobacterenzymogenes OH11中双精氨酸转运系统关键基因tatC进行缺失突变,通过对突变体表型及表型相关基因表达分析来研究该基因在菌株OH11中的功能,重点分析该基因与产酶溶杆菌中热稳定抗真菌因子HSAF生物合成的关系。研究结果表明,基因tatC的突变显著提高了HSAF生物合成的产量,以及HSAF生物合成的关键基因pks／nrps转录水平;改变了菌株OHll的细胞形态,使细胞从棍棒状变为椭圆状;并降低了菌株OH11生物膜的形成和滑动能力以及在营养缺陷型（10％TSB）培养基中的生长速率,但不改变其在营养丰富培养基（100％TSB）中的生长速率。此外,与野生型OH11相比,基因tatC突变株不改变其蛋白酶、纤维素酶、β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶的产生水平以及其对瓜果腐霉Pythiumapanidermamm、立枯丝核菌Rhizoctoniasolani和禾谷镰刀菌Fusariumgraminearum的拮抗能力。     

梨火疫菌(Erwinia amylovora)环腺苷酸受体蛋白基因(crp)的功能分析

梨火疫菌(Erwinia amylovora)可引起梨、苹果等蔷薇科(Rosaceae)植物的火疫病.在菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)中,由crp基因编码的环腺苷酸受体蛋白(cyclic adenosine monphosphate(cAMP)receptor protein,CRP)对果胶酶基因的表达调控和菌株致病性起着重要的作用.本研究首次鉴定并克隆出梨火疫菌中的crp同源基因,命名为Eacrp,并通过同源重组的方法,构建了梨火疫菌的crp基因突变体Ea△crp以及互补子,进行了致病性、过敏性反应、胞外多糖、鞭毛运动等一系列相关表型的鉴定.结果表明,crp基因影响着梨火疫菌的致病性、胞外多糖、游动性、生长情况等多种生物学特性,然而,Ea△crp仍能引起烟草过敏性反应,并且在过氧化氢敏感度以及沉降性、生物膜和AI-2信号分子的生成方面与野生型菌株相比差异明显.本研究结果说明,梨火疫菌crp基因对病菌的胞外多糖分泌、生长、游动性以及致病性方面具有关键作用.     

水稻白叶枯病菌tatB基因的克隆及功能分析

根据水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)PXO99的tatB基因序列设计引物,采用PCR方法从PXO99中克隆了tatB基因,命名为tatBXoo。通过同源重组的方法,构建了tatBXoo的插入突变株TBM,在含有X-gluc的抗性平板上筛选,并经Southern blot杂交验证确认。表型测定结果表明:与野生型相比,tatB突变株在水稻(寄主)上的致病性减弱,但在烟草(非寄主)上仍具有引起过敏反应的能力;tatB突变导致Xoo致病相关的重要表型如胞外多糖减少,游动性及趋化性减弱。但是,tatB突变不影响Xoo在基本培养基(MMX)中正常生长、胞外纤维素酶产生和生物膜形成。     

具抗水稻白叶枯病新基因的新种质及其利用

运用细胞突变体离体筛选技术,以感白叶枯病的杂交稻恢复系"明恢63"的成熟胚为外植体,诱导筛选育成抗白叶枯病突变品系"HX-3".     

利用PCR和间接免疫荧光染色技术检测风信子黄腐病菌

根据风信子黄腐病菌(Xanthomonas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA ,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌.用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术.用上述两种方法对风信子黄腐病菌和人工接种发病样品进行检测.结果表明,这两种方法可以准确、灵敏地检测风信子黄腐病菌及带菌样品,方法简单、快速、实用,可以在口岸检疫中推广使用,以减少风信子黄腐病菌进入中国的风险.     

温室条件下拮抗细菌Bacillus subtilis B5423-R对水稻纹枯病水平扩展和垂直扩展的抑制

BacillussubtilisB5 42 3对水稻纹枯病的抑制作用主要是通过其产生的拮抗素。在温室条件下 ,于水稻分蘖盛期接种纹枯病菌Rhizoctoniasolani,并采用 2d喷 1次、不同次数对单株喷雾B5 42 3 -R(B5 42 3的标记菌株 ,是利福平抗性的突变体 )的方法进行试验 (对纹枯病水平扩展的抑制 ) ;类似地 ,采用 2d喷 1次、不同次数对小区内所有稻株喷雾B5 42 3 -R的方法进行试验 (对纹枯病垂直扩展的抑制 )。结果表明 1～ 2次喷雾未能显著地降低蚊枯病病丛率和相对病斑高度 ,而连续 3次喷雾使B5 42 3 -R在稻株的群体数量于纹枯病侵染的早期即最初的 6～ 7d内维持在 1× 1 0 6cfu/g以上 ,显著地降低了病丛率和相对病斑高度。     

拮抗细菌Bacillus subtilis B5423-R 抑制水稻纹枯病的阈值群体数量

 在菲律宾国际水稻研究所实验农场田间条件下，通过人工接种Rhizoctonia solani,采用不同的方法(喷雾次数、间隔期)喷雾B5423-R（B5423的标记菌株，为利福平Rifampicin抗性的突变体），在接种1 d后，采用2 d喷1次、连续3～4次喷雾的方法，使B5423 R在稻株上的群体数量在6～7 d内维持在1×10[sup]6[/sup]cfu/g以上，在25 d内显著地降低相对病斑高率；而采用5 d喷1次、连续3～4次喷雾的方法，B5423-R在稻株上的群体数量在15 d内维持在1×10[sup]5[/sup]～106cfu/g，在25 d内相对病斑高率未能显著降低。表明在纹枯病侵染早期的6～7 d内，在稻株上B5423 R维持在1×10[sup]6[/sup]cfu/g以上是抑制纹枯病的阈值群体数量。     

基于环介导等温扩增技术检测瓜类细菌性果斑病菌

本文利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)基因组中Aave_4063和Aave_4064序列设计了2对特异引物Ac-F3/Ac-B3和Ac-FIP/Ac-BIP,建立了西瓜嗜酸菌的LAMP检测体系。利用该体系在65℃保温1h,通过荧光显色即可完成检测。设计的引物特异性强,其检测灵敏度为2.0×101 cfu/mL。该方法为西瓜嗜酸菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。     

基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的葡萄卷叶伴随病毒3号检测方法

[目的]建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leaf-roll-associated virus3,GLRaV-3)方法.[方法]根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP7O基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检测的特异性引物,建立GLRaV-3的RPA检测方法,并对其特异性和灵敏度进行验证.[结果]建立RPA检测方法能够从GLRaV-3带毒株中检测到约380 bp的特异性条带,仅需在37℃下恒温反应40 min,无需特殊的仪器设备,经特异性评价特异性好,且该方法与普通PCR检测灵敏度基本一致.[结论]建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合GLRaV-3的快速检测方法.