猪睾丸组织定量PCR分析中内参基因的选择

【目的】采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)对基因表达进行分析时,选择适当的内参基因是获得准确分析结果的关键。在猪睾丸分子生物学研究中,表达稳定的蛋白编码内参基因和micro RNA(miRNA)内参基因均有哪些目前尚不清楚。本研究旨在筛选出合适的内参基因,为准确定量不同时期猪睾丸组织中目的基因的表达提供可靠依据。【方法】选用8个不同发育时期(E 90、D 1、D 30、D 60、D 90、D 120、D 150、DM)的猪睾丸组织为材料,采用Trizol裂解法提取各样品的总RNA,利用Nan Drop ND-2000分光光度计检测总RNA的浓度和纯度。设计并合成已报道的猪其他组织中表达相对稳定的5个编码内参基因(GAPDH、TBP、β-actin、SDHA和B2M)以及5个miRNA内参基因(U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103)的特异性引物序列,逆转录得到cDNA模板后,按1:10梯度稀释为7个浓度梯度进行qRT-PCR反应以构建标准曲线。并对10个候选内参基因在各时期睾丸组织中的表达情况进行实时荧光定量全面检测,采用Ge Norm法对定量结果进行综合分析,最后根据内参基因稳定性值(M值)的大小筛选出最稳定的参考基因;M值越小,表明内参基因的稳定性越好,反之则越差。【结果】对GAPDH、TBP、β-actin、SDHA、B2M、U6、ssc-miR-17-5p、ssc-miR-26a、ssc-miR-27a和ssc-miR-103 10个候选内参基因的熔解曲线进行分析发现,均无非特异扩增及引物二聚体,说明各内参基因特异性良好,qRT-PCR反应的专一性高;以Ct值为纵坐标,相对拷贝数的对数为横坐标进行标准曲线分析可知,各内参基因在系列稀释的浓度梯度内具有良好的线性关系;通过对10个候选内参基因在不同时期猪睾丸组织中的表达稳定性分析发现,蛋白编码基因中,最稳定的为TBP,最不稳定的是GAPDH;miRNA候选内参中,最稳定的为U6,最不稳定的是ssc-miR-26a。【结论】成功筛选出猪睾丸组织基因表达分析中稳定表达的内参基因TBP和U6,可作为猪睾丸组织基因表达研究中最佳内参基因候选者。     

不同繁殖状态下绵羊繁殖相关组织中CHGA基因的表达分析

为探究绵羊繁殖相关组织中CHGA基因在不同繁殖状态下的表达差异,选取不同光照条件下的成年苏尼特母羊（季节性发情品种）及不同繁殖时期的小尾寒羊母羊（常年发情品种）的下丘脑等10种组织,利用qPCR技术分析不同繁殖状态下各组织中CHGA基因的相对表达量。结果表明,CHGA基因在2个绵羊品种的不同组织中广泛表达且脑部组织中该基因的表达量高于其他组织;不同光照条件下苏尼特羊各组织中CHGA表达差异均不显著（P＞0.05）;黄体期小尾寒羊垂体中CHGA表达量显著高于卵泡期（P＜0.05）,子宫体中该基因的表达量极显著高于卵泡期（P＜0.01）。以上结果暗示CHGA基因可能参与小尾寒羊不同繁殖时期垂体和子宫生理变化的调控。     

玉米水解物对糖醋酒液的叶面附着性的影响

制备玉米水解物,将其与适量的糖醋酒液混配,再用清水稀释,获得不同浓度的一系列混合液(A～E)。测定了各种混合液的粘度值和叶片附着率,同时测试了它们对橘小实蝇雌虫的引诱效果。结果表明:玉米水解物+糖醋酒混合液C(玉米水解物的浓度为350 mL/750 mL)的粘度值为1117.3 MPa·s,在苹果叶片上的附着率在75%以上;与糖醋酒液相比,混合液C对橘小实蝇雌虫的引诱效果无显著变化。     

宿主湿度环境对球孢白僵菌致病力的影响

【目的】研究宿主湿度环境对球孢白僵菌致病力的影响,为采取适当防治措施以减少白僵病对蚕茧生产的危害提供参考依据。【方法】以广西象州蚕区球孢白僵菌感染家蚕获得的白僵病蚕尸体,观察不同湿度环境中白僵病蚕尸体形态的变化情况,并每隔15d进行一次分生孢子致病力测试。【结果】在25℃下的3种湿度环境（60%RH、75%RH和90%RH）中,白僵病蚕尸体在同一宿存时间内,球孢白僵菌活力与宿存湿度关系密切,在60%RH中宿存的蚕体保存较完好,60d后仍然可见淡黄白色的分生孢子,尸体质硬;随湿度增加,宿存病原活力逐渐降低。3种湿度条件下球孢白僵菌在2龄病蚕尸体中宿存30d内,对家蚕仍有很强的致病性,其半致死时间（LT50）分别为2.915、3.071和5.222d;在60%~75%RH条件下,宿存45~60d的球孢白僵菌对家蚕仍具有一定的致病力;而在90%RH条件下,宿存45d后球孢白僵菌分生孢子数量急剧下降,无法测定其致病力。【结论】球孢白僵菌在病蚕体中宿存60d内对家蚕的致死率仍然很高,因此及时清除病蚕尸体并使尸体病原性灭活,可降低白僵菌的二次感染。     

南充市区夏季鸟类群落结构调查

近年来．不少学者对南充鸟类多样性进行了研究,但关于夏季鸟类群落方面的报道很少。2013年3—5月对该地区的鸟类采用路线统计法进行了调查,共观察到鸟类34种,隶属4个目16科,其中非雀形目6种,雀形目28种。     

广西蚕区主推家蚕品种在不同区域及不同批次饲养的适应性调查

将广西壮族自治区主推的3对家蚕品种分别在桂西北、桂中和桂南几个具有地域代表性蚕区的不同养蚕批次进行适应性饲养试验,调查不同品种的蚕茧产量和品质,以期通过家蚕品种最好的生产应用布局来提高广大蚕农的经济收益.根据试验结果建议:那坡、环江蚕区每年第1、2、3、10、11批次对饲养家蚕品种的选择顺序为桂蚕2号、两广二号或桂蚕N...     

浅析小鹅瘟病的综合防制

小鹅瘟病是由小鹅瘟病毒引起雏鹅的急性或亚急性败血症性传染病,临床上以渗出性肠炎为主要病理变化,有时表现神经症状。本病易发于４～２０日龄的雏鹅,发病后传染快,病死率高。现将近几年来小鹅瘟病综合防制情况浅析如下。１流行特点１．１在自然感染情况下,只有雏鹅...     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及相关特性的初步研究

为了获得适应当地环境的益生菌株,从当地土壤中分离得到一株芽孢杆菌,经鉴定为蜡样芽孢杆菌.经安全性试验及抗逆性试验,研究了其在不同pH值、不同温度下的生长情况,并进行了药敏试验.结果表明,该菌无毒性,具有抗逆性,最适pH值为6～8,最适宜温度为37℃,可作为益生菌进行微生态制剂方面的进一步研究.     

牛粪生物利用研究进展

随着养殖业的快速发展,规模化养殖奶牛和肉牛的数量增多,牛粪的排放总量也快速增加,牛粪中含有大量的矿质元素和丰富的营养成分,是一种良好的生物质资源.基于此,就牛粪在养殖、有机肥、能源及其他方面的利用进行综述,旨在为牛粪的处理及综合利用提供参考.     

若羌县红枣提质增效标准化示范园建设概述

通过对若羌县密植枣园进行枣树疏密间移,调整模式,降低密度,培养合理树体结构,改善通风透光条件,减少病虫害发生,便于机械化操作,减少农民田间劳动强度成本,解决了枣树郁闭造成的产量、质量、效益三下降的问题。