不同因素对茄子花药愈伤组织诱导的影响

为了提高花药愈伤组织的诱导率,进一步优化培养条件,以西安绿茄为材料,研究了不同激素、碳源、氨基酸及AgNO3对花药愈伤组织诱导的影响.结果表明:1) 单一激素愈伤组织诱导率几乎均为零,生长素和细胞分裂素组合的总愈伤率(愈伤率1)均大于18.0%,花药中部愈伤率(愈伤率2)均大于4.00%;其中,以0.2mg/L 2,4-D+1.0mg/L NAA+0.25mg/L KT组合表现最好.2) 3种碳源中,2%蔗糖愈伤组织诱导率1为57.14%,表现最好;2%的蔗糖和6.5%的葡萄糖出愈率2均大于12%,无明显差异.3) 加入氨基酸及AgNO3的出愈率1和出愈率2均高于不加任何添加物的处理;100mg/L丝氨酸对于诱导花药中部出愈率效果最好.说明,单一激素愈伤组织诱导效果较差,生长素和细胞分裂素组合诱导效果较好,西安绿茄最适愈伤诱导培养基为MS+0.2mg/L 2,4-D+1.0mg/L NAA+0.25mg/L KT+2%蔗糖+100mg/L丝氨酸.     

黄瓜cpSSR-PCR反应体系优化及应用

叶绿体微卫星(chloroplast microsatellite,cpSSR)是近几年发展起来的新型高效分子标记,在植物系统发育和基因漂移研究中有广泛应用.在前期开发黄瓜cpSSR引物的研究基础上,本文研究了Taq酶量、MgCl2浓度、dNTPs浓度、模板DNA质量和浓度、循环次数等参数对cpSSR-PCR扩增效果的影响,获得优化的反应体系,即15μL体积包括:1×Taq酶缓冲液,0.5UTaq聚合酶,0.2μmol/L引物,0.2mmol/LdNTPs,15 mmol/LMgCl2,约10 ng模板DNA,循环25次.采用该优化体系,以已开发的黄瓜cpSSR引物,对12份黄瓜材料进行了重复性PCR扩增.结果发现国外种质中存在3种单倍型,而在国内种质中只检测到2种单倍型,说明在本研究所用的材料中,国外种质叶绿体遗传差异明显大于国内栽培种.此结果说明优化的cpSSR反应体系具有稳定性和可靠性.     

白魔芋高效再生体系的建立及其抗生素敏感性研究

采用白魔芋不同组织为外植体,进行愈伤组织诱导和植株再生,并对叶柄诱导而来的愈伤组织进行抗生素敏感性试验。结果表明,叶柄外植体诱导的愈伤组织生长势强,继代培养增殖快,植株再生快。抗生素敏感性试验表明,魔芋愈伤组织对卡那霉素极不敏感,而对G418具有较好的敏感性。抗生素G418的适宜使用浓度以30mg.L-1为宜,羧苄青霉素的浓度以250mg.L-1为宜。     

EMS诱导黄瓜离体变异及分子标记检测

采用不同浓度的甲基磺酸乙酯(EMS)对黄瓜幼苗茎段进行处理,以茎段存活率和出芽率为指标,筛选到半致死处理组合,即4%EMS处理2 h。RAPD和SRAP分子标记分析发现,经EMS处理获得的再生苗DNA发生了变异,共检测到8个RAPD变异位点和5个SRAP变异位点。     

甜瓜侧枝相关性状的QTL定位

以甜瓜长侧枝自交系‘TopMark’和短侧枝自交系‘PI353814’为亲本,构建了F_2群体和F_2:3家系。利用92个F_2单株构建了一张包含12个连锁群,353个SSR标记的遗传连锁图谱,覆盖基因组长度为1 565.88 cM,连锁群长度在86.98～186.68 cM,标记间的平均距离为4.44 cM。利用该连锁图谱结合F_2:3家系表型鉴定数据,对甜瓜侧枝相关性状进行定位,共检测到6个QTL,分布在连锁群LGⅠ、LGⅢ和LGⅦ上,LOD值介于2.5067～12.5524之间,可解释9.9242%～48.2348%的表型变异率。其中侧枝总长主效QTLlbtl7.1和侧枝均长主效QTLlbal7.1均位于连锁群LGVⅡ的SSR标记CmSSR17145和CmSSR17293之间,贡献率分别为38.5923%和48.2348%。进一步利用186个F_2:3家系和新开发标记对主效QTL进行了验证,发现侧枝总长主效QTL lbtl7.1定位在SSR标记CmSSR17251和CmSSR17253之间,与两标记的遗传距离分别为2.5和0.5 cM,可解释41.2742%的表型变异,侧枝均长主效QTL lbal7.1被定位在SSR标记CmSSR17238和CmSSR17251之间,距离两标记分别为1.5和0.5cM,可解释55.1739%的表型变异。     

盾叶薯蓣ISSR-PCR扩增条件研究

以盾叶薯蓣的叶片制备ISSR-PCR DNA 模板.通过单因子试验分别研究了模板DNA质量和浓度、Mg2 浓度、Taq酶用量、dNTPs浓度以及退火温度对盾叶薯蓣ISSR-PCR扩增的影响,建立了适宜于盾叶薯蓣的ISSR反应体系和扩增参数,即15μL反应体系中包括:20 ng/L模板DNA,1×Taq酶缓冲液,1.0 U Taq聚合酶,2.5 mmol/L MgCl2,0.2 μmol/L引物和0.3 mmol/L dNTPs.并从46个ISSR引物中筛选出10个带纹清晰、多态性丰富的引物,并确定了这些引物的适宜退火温度.     

12个黄瓜杂交组合比较试验

以津春4号为对照,比较分析了12个黄瓜杂交组合的早熟性、丰产性、商品性和抗病性,结果表明,HA×8113组合第1雌花节位低(3.7节),早熟,定植至采收需43d,前期产量高(1 613.9 kg/667m2),总产量达6221.8kg/667 m2,果实横径小(2.89 cm),果形指数大(12.2),硬度高(1 11...     

碱裂解法快速提取番茄DNA的研究

以转基因番茄MM-R3a的嫩叶、子叶、下胚轴和根为试验材料,用碱裂解法快速提取番茄总DNA并用于PCR扩增.结果表明,以番茄子叶和幼嫩叶片为材料,使用该方法提取的DNA纯度和质量浓度相对较高,以稀释10倍～30倍的DNA为模板的PCR结果相对稳定.     

甜瓜EST-SSR位点信息及标记开发

 对GenBank中35 547条甜瓜EST进行净化处理, 得到总长度为2.5 ×10⁷ bp 的无冗余EST34 408条。从这些序列中发现2 877 个SSR, 分布于2 119 条EST中, 出现频率为8.36% , 分布密度为1/8.72 kb。单碱基、二碱基和三碱基重复是主导重复类型, 分别占EST2SSR总数的16.61%、22.49%和46.09%。A /T、AG/CT和AAG/CTT分别是单碱基、二碱基和三碱基的优势重复基元, 分别占15.88%、16.02%和28.61%。在所有的EST-SSR中, 69.10%的重复次数为4～10次, 51.34%的长度为12～20 bp。设计了30对EST-SSR引物, 分别对33份甜瓜自交系进行了PCR扩增, 24对引物能够扩增出期望长度的条带, 22对引物产物表现多态性, 平均每对引物能检测到2.73个等位基因。这些引物能比较准确地将甜瓜材料聚为不同类别。24对引物中, 有19对、16对和15对分别在黄瓜、西瓜和葫芦中通用。以上结果说明, 从甜瓜EST中开发SSR标记是一条简便、可行的途径。     

植物单倍体材料创制方法及其应用

单倍体在作物育种、遗传分析、基因克隆等领域已得到广泛应用,并发现和创造了获得单倍体材料的多种途径。从雄核发育、雌核发育等途径介绍了植物单倍体创制的各种方法,并对单倍体在作物育种、种质资源创新、遗传分析、基因工程等方面的应用及其价值进行了概述。