牛红细胞源抗菌肽的分离纯化与活性鉴定

【目的】分离纯化牛红细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs),并对其体外抗菌活性进行初步检测。【方法】以中国荷斯坦奶牛血液为材料,通过离子交换层析法和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)纯化抗菌肽,用琼脂糖平板扩散法测定其抗菌活性,并用质谱法测定其分子质量。【结果】牛血液红细胞粗提物经离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性;阳离子峰经RP-HPLC纯化后,共得到4个峰(F1、F2、F3和F4),其对大肠杆菌均具有抗菌活性,F1峰和F3峰对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅F1峰对白色念珠菌具有抗菌活性;经质谱分析,F1峰纯化肽的分子质量为2 562.40 u。【结论】成功地从牛红细胞中分离纯化到了AMPs;F1峰中AMPs的抗菌谱较广,抗菌活性较强。     

H5N1禽流感病毒HA基因的重组腺病毒表达载体的构建

采用PCR方法扩增出禽流感病毒HA基因,将其定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中构建pAdtrack-H5,之后将pAdtrack-H5与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-H5,将pAdeasyd-H5经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有HA基因的腺病毒pAd-H5。结果表明:含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-H5和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-H5经PCR、双酶切及核苷酸测序鉴定无误。包装成功的腺病毒pAd-H5经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达。     

着眼于研究生课题研究需要的兽医微生物学实验技术教学改革与实践

兽医微生物学实验技术课在畜牧兽医专业研究生教育中起着关键的作用。河南科技学院兽医微生物学教学实验室经多年建设该课程,建立了以让研究生掌握基本实验技术原理为基础、能熟练将实验技术转化为解决课题手段为目的,以创新能力培养为驱动的多级别、分层次的兽医微生物学实验教学体系;实验内容由传统的单一式教学模式,改变为由基础性实验、综合性实验、创新性实验组合而成的实验课教学体系;在利用教学实验室的同时最大限度地开放本学科科研平台优势,为研究生学习搭建了更贴近课题研究的创新训练基地。通过该课程教学方法的改革与实践提高了研究生参与课题研究的兴趣,培养了其科研素质和创新能力,推动了兽医微生物学教学效果的提高。     

表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定

研究表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒pAd-H5的遗传稳定性及重组病毒的滴度。将重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次,取第5、10、15和20代的重组病毒采用PCR方法扩增禽流感病毒HA基因,并进行基因序列分析;用标记为GFP的快速测定法计算出20代次时重组病毒的滴度。从各代重组病毒DNA中均扩增出了约1700bp的目的条带,与HA基因片段长度一致。基因序列分析表明:第5、10、15代重组病毒中的HA基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有1处发生了点突变(即HA基因417位A→G),但其编码的氨基酸未发生变化(即同义突变),表明表达的目的蛋白抗原表位未发生变化;计算出的重组病毒滴度为108.875pfu/0.1mL。重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次,具有良好的遗传稳定性,重组腺病毒的病毒滴度相对较高。     

猪A型流感病毒RT-PCR的建立及应用

根据GenBank上A型流感病毒M基因的保守序列,设计1对引物,建立了检测猪群中A型流感病毒的RT-PCR方法。试验结果表明,该RT-PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为猪群中A型流感病毒的临床诊断和流行病学调查奠定了基础。     

抗菌肽P3的序列分析及其抑菌活性的测定

为研究抗菌肽P3的生物学功能,试验通过在线软件分析了抗菌肽P3的理化特性、与其他抗菌肽的相似性、二级结构、剪切位点、疏水性、表面极性和抗原性,用琼脂糖扩散法测定了抗菌肽P3的抑菌活性,用倍比稀释法测定了抗菌肽P3的最小抑菌浓度和溶血性。结果表明,抗菌肽P3为疏水性的α螺旋型阳离子多肽,与APD3数据库中抗菌肽Alyteserin-2Ma有最高的相似度,可被9种酶剪切,不具有抗原性,对大肠杆菌、沙门菌、枯草芽孢杆菌、屎肠球菌和白色念珠菌有抑菌活性,对鸡红细胞有较低的溶血性。研究结果说明,抗菌肽P3有抑菌活性,可作用于细胞膜,从而导致菌体死亡。     

鸡抗菌肽NK-lysin的B细胞表位、剪切位点、疏水性及进化分析

为了解鸡抗菌肽NK-lysin的B细胞表位、剪切位点、疏水性、同源性及进化等内容,试验选择鸡抗菌肽NK-lysin的氨基酸序列通过网络在线软件IEDB Analysis Resource、PeptideCutter、ProtScale、BLAST、DNAStar进行分析。结果表明:鸡抗菌肽NK-lysin存在5个B细胞表位,可被20种酶和化学物质剪切,亲水性大于疏水性,与鸡颗粒溶素的同源性为100%,在进化上与珍珠鸡类皂化蛋白C最为接近。说明鸡抗菌肽NK-lysin为亲水性蛋白,具有抗原性,有很多剪切位点,与珍珠鸡类皂化蛋白C有较高的亲缘关系。     

1株天然抗菌肽的纯化及活性检测

从牛血液中制备血红蛋白粗提物,运用离子交换层析和反相高压液相色谱法纯化抗菌肽,用琼脂糖弥散法测定其抗菌活性.结果表明:通过离子交换层析获得的阳离子峰具有抗菌活性,通过反相高效液相色谱对阳离子峰进行分离,获得6个峰,其中F1、F2、F4和F6峰对大肠杆菌具有活性,F1、F2和F6对金黄色葡萄球菌具有活性,仅F2对白色念珠菌具有活性,表明F2抗菌肽具有较为广谱的抗菌活性.     

《动物免疫学实验技术》课程教学改革

结合河南科技学院硕士研究生动物免疫学实验技术课教学现状,从教学内容、教学手段、教学考核等方面探讨动物免疫学实验技术课程教学改革,通过开展以课题研究为模式,综合运用免疫学实验技术的实验课教学方法,培养研究生独立思考问题以及系统性科研设计的意识,进而将学到的免疫学实验技术知识用以解决实际问题,最终提高硕士研究生动物免疫学实验技术课程的教学质量。     

关于禽白血病防控的几点建议

禽白血病是一种重要的禽类肿瘤性传染病,也是防控难度相对较大的家禽疫病之一,对养禽业的危害甚大.目前,防控措施主要是通过检测后淘汰的方法进行禽白血病的净化.本文从控制传染源、生物安全措施、无禽白血病禽的饲养、药物、疫苗和检测方法等方面提出了一些建议,为临床上防控禽白血病提供参考.