猪瘟病毒DNA疫苗的构建及动物免疫试验

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)C株E2囊膜蛋白全长基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,流式细胞仪(FACS)检测293T细胞瞬时表达了E2囊膜蛋白。将构建的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠,用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测证明成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体,为下一步利用DNA疫苗免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。     

中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆

应用RT-PCR、Nested PCR和Half-nested PCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C-株全基因组的7个cDNA重叠片段，分别克隆于pMD18—T或pGEM-T Easy载体后进行测序。运用T-A克隆和多片段一步连接法，将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM-5Zf( )载体后，得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM-5Zf( )／F1-4和pGEM-5Zf( )／F5-7。再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM-5Zf( )载体，构建出了CSFVC-株全长cDNA重组质粒pGEM-5Zf( )／F1-7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。     

猪瘟病毒C株(脾淋毒)全长cDNA分子几个突变位点的重组改造

采用RT-PCR、Nested PCR和Half-nested PCR技术从试验感染兔脾组织的总RNA中得到了猪瘟病毒(CSFV）C株全长cDNA的3个待改造片段，分别克隆于pMD18-T载体后进行测序。用重组技术分别从前期构建的5′半长cDNA或3′半长cDNA中替换F1、F3和F51，构建成2个新的半长cDNA，进一步连接成新的全长cDNA，经测序证实全长cDNA中3个致死性突变位点均得到改正。初步鉴定证明该全长cDNA具有感染性。为猪瘟病毒C株反向遗传操作系统的建立奠定了基础。     

抗菌肽基因工程表达载体的研究进展

<正>近年来,由于传统抗生素的滥用,药物残留及耐药性问题日益严重,时刻威胁着人类的健康,寻找新的抗菌药物迫在眉睫。抗菌肽是一类分子量相对较小并由基因编码核糖体合成的生物活性肽[1]。Boman G.等人发现第1个天然抗菌肽天蚕素以来,便开启了抗菌肽研究的黄金时代。随着抗菌肽研究的不断深入,人们发现抗菌肽具有抗菌、抗病毒、抗癌、调节凋亡以及加快伤口愈合的功能。然而,天然抗菌肽的生产成本高、细胞选择性差,限制了天然多肽在临床上的应用[2],另外,     

新时代动物传染病学混合式教学改革探析

近年来,动物传染病的形势发生了显著变化,新传染病不断出现,老传染病死灰复燃,多病原混合感染多发。此外,随着高等教育改革的不断推进和信息技术的快速发展,信息化教育在高校教育中扮演着越来越重要的角色。本文就新时代背景下动物传染病学教学过程中存在的问题,以现代教学理念和现代人才培养模式为指导,以信息化建设为抓手,结合动物传染病的新形势及当前畜牧业发展趋势的实际情况,从优化教学内容、改革教学方法、加强实践教学水平及完善考核方式等方面进行动物传染病学的本科教学改革,旨在提高教学水平和质量,为我国兽医专业人才培养提供可靠的理论依据。     

着眼于研究生课题研究需要的兽医微生物学实验技术教学改革与实践

兽医微生物学实验技术课在畜牧兽医专业研究生教育中起着关键的作用。河南科技学院兽医微生物学教学实验室经多年建设该课程,建立了以让研究生掌握基本实验技术原理为基础、能熟练将实验技术转化为解决课题手段为目的,以创新能力培养为驱动的多级别、分层次的兽医微生物学实验教学体系;实验内容由传统的单一式教学模式,改变为由基础性实验、综合性实验、创新性实验组合而成的实验课教学体系;在利用教学实验室的同时最大限度地开放本学科科研平台优势,为研究生学习搭建了更贴近课题研究的创新训练基地。通过该课程教学方法的改革与实践提高了研究生参与课题研究的兴趣,培养了其科研素质和创新能力,推动了兽医微生物学教学效果的提高。     

猪源耐药性大肠杆菌的分离与鉴定

为了弄清某猪场猪腹泻的病原,试验采用染色与形态观察、培养特性观察、生化试验、16S rRNA序列比对等方法进行细菌鉴定,构建16S rRNA系统发育树,采用纸片扩散法测定分离细菌的药物敏感性。结果表明:从腹泻猪的十二指肠中分离到1株细菌,分离细菌的染色与形态特征、菌落特征、培养特性和生化特征与大肠杆菌基本符合,16S rRNA基因序列与猪肉源(CP025318株)、犬源(CP023359株、CP010134株)、人源(CP022407株、CP018948株、CP023349株)的同源性均高达99.8%,确定该分离菌株为大肠杆菌。该株大肠杆菌与猪大肠杆菌CP025753株的亲缘关系最近,对所测试的21种抗生素均耐药。说明临床中猪大肠杆菌的耐药性愈发严重。     

猪瘟病毒的分子生物学研究进展

本文概述了猪瘟病毒的基因结构和功能，猪瘟的分子生物学诊断技术和基因疫苗，以及猪瘟病毒全长感染性cDNA的研究进展。为进一步研究猪瘟病毒的复制机理、毒力及其决定因素、致弱机理、致病机理、基因产物的功能、宿主嗜性及标记疫苗的开发提供理论参考。     

集约化猪场仔猪黄白痢的综合防治

仔猪黄白痢是由埃希氏菌属 (Escherichia)中的一些大肠埃希氏菌 (E.coli)条件性致病菌株所引起的细菌性传染病。致病性大肠杆菌通常只有在肠道内环境改变或其他诱激因素的作用下，可以在肠道内大量繁殖，导致下痢。仔猪黄白痢的发生主要由致病性大肠杆菌引起。其中黄痢多发生于 7日龄以内仔猪，病猪主要表现为排黄色或黄白色稀粪，黄痢病猪抗过 7天以后症状逐渐转化为白痢症状。近年来，豫北地区集约化养猪场仔猪黄白痢的发生率很高，且死亡率最高达 50％以上，给养猪业带来极大的损失，下面谈谈针对该病的综合防治措施。 1加强饲养管理，…     

利用CMV启动子构建PRRSV感染性克隆的研究

【目的】建立一种利用CMV启动子获得拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒提供操作平台。【方法】根据PRRSV的基因序列特征和CMV启动子的序列特征,对pBluescprictⅡSK(+)载体进行多克隆序列改造;设计特异性引物,分6段扩增、组装出PRRSV的全长cDNA并扩增CMV真核启动子序列;采用酶切、连接、转化等方法将连接成功病毒的全长cDNA置于CMV真核启动子序列的下游,获得含有CMV启动子和猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1A株全长cDNA克隆的重组质粒pSK-CH-1A;再将重组质粒直接转染MARC-145宿主细胞,得到猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1A株病毒的拯救病毒。【结果】成功获得了19 112bp含CH-1A全长cDNA的pSK-CH-1A载体,将其直接转染MARC-145宿主细胞后,经细胞体内转录合成病毒基因组RNA,获得了拯救病毒(rCH-1A);病毒生长特性试验结果显示,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性,且拯救病毒序列含有不同于亲本病毒的分子标记MluⅠ酶切位点。【结论】建立了一种方法简单,操作方便,节约时间和成本的PRRSV感染性cDNA克隆的体外拯救方法。