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河南省某养殖场83例仔猪出现厌食、呼吸困难等症状,并伴随不同程度的腹泻,死亡率约为4.5%。为确定该养殖场猪只感染的病原菌,本试验于无菌条件下对感染猪只肺脏进行病原菌分离、药敏试验和16S rRNA序列分析。结果显示,本试验分离的病原菌为革兰阴性短杆菌,在麦康凯鉴别培养基上菌落呈粉红色圆形,生化反应显示其可发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖和麦芽糖;16S rRNA序列分析显示,病原菌与致病性大肠杆菌同源性为99%;药敏试验显示,该菌对苯唑西林、头孢噻吩、头孢吡肟、链霉素等23种抗菌药均有较强耐药性。本试验结果为肺源多重耐药大肠杆菌的鉴定和临床用药提供了有价值的数据支持。 相似文献
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将丙型肝炎病毒(HCV)H77株全长囊膜蛋白基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,用流式细胞仪检测细胞瞬时表达的目的蛋白。将构建的重组质粒肌注BALB/c小鼠,用表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞作为抗原,用流式细胞仪检测小鼠血清HCV囊膜蛋白抗体。再用原核系统表达的E2蛋白作为抗原,Western Blot检测免疫小鼠血清抗体。试验结果显示,囊膜蛋白E1E2在293T细胞膜上进行了瞬时表达,基因疫苗免疫小鼠后产生了抗HCV囊膜蛋白的抗体,该抗体能与表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞特异性结合,Western Blot表明该抗体也能与原核系统表达的E2蛋白结合。 相似文献
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中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆 总被引:9,自引:1,他引:8
应用RT-PCR、Nested PCR和Half-nested PCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C-株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18—T或pGEM-T Easy载体后进行测序。运用T-A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM-5Zf( )载体后,得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM-5Zf( )/F1-4和pGEM-5Zf( )/F5-7。再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM-5Zf( )载体,构建出了CSFVC-株全长cDNA重组质粒pGEM-5Zf( )/F1-7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。 相似文献