逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及动物免疫试验

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒表达载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠,用流式细胞仪检测证明,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。为下一步利用细胞免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。     

猪瘟病毒C-株(脾淋毒)3′-UTR的克隆和二级结构分析

根据已发表的CSFVC—株序列，设计合成了3′—UTR特异性PCR引物对F—R及半套式上游引物F′。从兔脾组织中提取总RNA，应用RT—PCR及Half—nested PCR，成功地扩增出了C-株3′—UTR，克隆到pMD-18T载体后进行了序列测定。与AID株、Alfort/187株、Brescia株、F114株、Eystrup株、Riems株和Shimen株的相应区段进行了序列比较分析，同源性分别为98．7％、98．2％、98．2％、98．7％、97．8％、97．8％和98．7％。C—株3′—UTR中存在一富含T的插入序列，可能是C—株在兔化致弱时产生的变异标记，对其二级结构具有较大影响。在其它疫苗株的3′—UTR不同位置，亦存在相似的插入序列，该序列可能与病毒的毒力有直接关系。     

集约化养殖场消毒药选择原则

集约化饲养以极高的生产效率加速了养殖业的发展.与此同时也增加了传染病的发生率和控制难度.近年来,传染病的暴发给集约化养殖造成了重大的经济损失."预防为主,防重于治"的原则已为集约化养殖场所共识.加强消毒工作是扑灭传染源和切断传播途径,控制疫病发生的有效措施之一.     

丙型肝炎病毒囊膜蛋白基因E1E2在真核细胞中的表达及动物免疫试验

利用DNA重组技术将丙型肝炎病毒（HCV）H77株E1E2囊膜蛋白基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中，构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E1E2，用重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒磷酸钙共沉淀法转染293T细胞,包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞，经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞仪技术（FACS）分析，结果表明,HCV E1E2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E1E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠，经FACS分析免疫鼠血清，成功诱导小鼠产生了抗HCV E1E2蛋白的抗体，Western blot检测结果表明该抗体能与原核系统表达的E2蛋白结合。     

兽用基因工程疫苗的研究现状及其生物安全性问题

基因工程疫苗的研究发展日新月异,已从理论研究进入到实际生产应用,成为生物制品产业发展的一种趋势。文章就兽用基因工程疫苗的种类和研究进展,及在应用基因工程疫苗过程中可能出现的潜在生物安全问题作一简要概述。     

甘草多糖对雏鸡新城疫抗体效价和体质量的影响

了解甘草多糖对雏鸡新城疫抗体效价和体质量的影响。将40只1日龄AA雏鸡随机分为4组,每组10只。第Ⅰ组为对照组,第Ⅱ组、第Ⅲ组和第Ⅳ组为试验组。各组均用新城疫低毒力活疫苗(lasota株)在2日龄时进行滴鼻点眼免疫1羽份,在9日龄肌内注射1mL进行加强免疫,其中对照组不加甘草多糖进行免疫;第Ⅱ组、第Ⅲ组和第Ⅳ组在鸡疫苗中分别加入质量浓度为5、10和15 g/L的甘草多糖。分别在2日龄、9日龄、16日龄对各组鸡只进行全体空腹称量并记录结果,同时对各组试验鸡分别随机抽取6只采血,分离血清,进行新城疫(ND)抗体效价检测。结果表明,甘草多糖对雏鸡免疫力和生长性能有一定作用,其中10 g/L的甘草多糖作用最显著。     

乳酸菌株植物乳杆菌和粪链球菌对肉鸡免疫性能的影响

将植物乳杆菌和粪链球菌2株乳酸菌分别添加到肉鸡饲料中,通过检测免疫器官指数、胸腺和脾脏的T细胞百分数、白细胞吞噬率、红细胞花环率、血清中新城疫(ND)血凝抑制(HI)抗体效价等指标,探讨了乳酸菌对肉鸡免疫性能的影响.结果表明,2株乳酸菌均能够促进肉鸡胸腺、脾脏和法氏囊的发育,增强白细胞的吞噬功能,增加胸腺和脾脏中的T细胞数,提高E-C3bR和E-ICR的花环形成率,以及提高机体产生ND疫苗HI抗体的水平.     

猪圆环病毒病临床表现类型及其防治

为了更有效地控制猪圆环病毒病的发生,采取流行病学调查、临床检查、病理剖检、猪圆环病毒抗体检测试剂盒检测,对确诊为猪圆环病毒病的3 500头猪的临床表现类型进行统计分析.结果表明,腹泻型占15.5%,衰竭型占23.0%,皮疹型占2.8%,繁殖障碍型占8.5%,混合感染型占50.2%;针对不同的临床类型,采取不同的防治方案,治愈率达95.0%以上.     

可视化RPA-LFD技术快速检测猪链球菌

旨在建立一种可视化、操作简便的猪链球菌快速检测技术.针对猪链球菌种特异性基因谷氨酸脱氢酶(gdh)序列设计特异性引物,建立可同时检测出所有血清型的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测技术,优化反应温度与反应时间,评价其特异性与灵敏度,同时利用该法对45例疑似猪链球菌感染标本进行检测.结果 显示:猪链...     

EM在蜜蜂养殖上的应用

1992年我同从日本引入EM技术,即有效微生物（Effective Microorganisms,简称EM）应用技术,其效果在农业、畜牧业、环境净化等多方面得到广泛试验和验证。EM是日本琉球大学比嘉照夫教授研制出来的新型复合微生物菌剂,南光合细菌、放线菌、酵母菌、乳酸菌和同氮菌等5科10属80多种微生物复合培养而成,