重组H5N1亚型禽流感病毒NA基因腺病毒的滴度测定及遗传稳定性研究

为了研究表达H5N1亚型禽流感病毒NA基因重组腺病毒pAdN1的遗传稳定性及重组病毒的滴度,将重组腺病毒pAdN1在293细胞上连续传代20次,取第5、10、15、20代的重组病毒,采用PCR 方法扩增禽流感病毒NA基因,并进行基因序列分析;用绿色荧光蛋白做标记计算出20代次时重组病毒的滴度.结果显示:从各代重组病毒DNA 中均扩增出了约1 400 bp的目的条带,序列分析结果表明,第5、10、15代重组病毒中的NA基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有2处发生了点突变(516位A→G,1 323位T→C),但其编码的氨基酸未发生变化,即蛋白抗原表位未发生变化;采用快速测定法计算出重组腺病毒的滴度为109.5 pfu/mL.     

豫北地区致病性鸡大肠杆菌的分离鉴定

笔者于2004年9月至2005年7月从豫北地区采集病料,通过对所采集的88份样品进行分离鉴定,最终确定出该地区主要的血清型是O1、O2、O78、O111。1材料与方法1.1材料1.1.1标准菌株购自中国兽医药品监察所。1.1.2病料采集于新乡市畜牧兽医工作站,河南科技学院兽医院等的病鸡中共采集到88份样本。1.1.3培养基三糖铁琼脂,购自北京奥博星生物技术责任有限公司;麦康凯琼脂,购自北京双旋微生物培养基制品厂;伊红美蓝琼脂,购自杭州微生物试剂厂;邓亨氏蛋白胨水溶液、葡萄糖蛋白胨水溶液,Simmons氏固体柠檬酸盐等培养基均按常规方法制备。1.1.4生化试剂…     

可溶性干酒糟（DDS）在育肥猪日粮中的应用研究

研究了可溶性干酒糟（DDS）作为饲料原料对生长育肥猪生长性能的影响。选用72头健康体重约70 kg的三元育肥猪,随机分成2个处理组,每个处理组2个重复,每个重复18头猪,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂含40%DDS的试验日粮,试验正式期20 d。结果显示,与对照组相比,试验组育肥猪的平均日增重、平均采食量和料肉比方面无明显差异（P>0.05）,从经济效益分析来看,与对照组相比,试验组猪在日采食成本和日增重成本方面分别下降了1.41元/kg和1.50元/kg,整个育肥周期每头猪可多获利约75元。试验证实在生长育肥猪的日粮中添加DDS能够完全满足育肥猪的生长需要,并可降低养殖成本,进一步提高经济效益。     

猪瘟病毒E2基因活载体疫苗研究进展

猪瘟病毒(CSFV)E2囊膜蛋白是猪瘟病毒的主要保护性抗原蛋白,也是研究猪瘟基因工程疫苗的首选抗原。常用的猪瘟病毒E2基因活载体主要有腺病毒载体、逆转录病毒载体、痘病毒载体、伪狂犬病病毒载体、杆状病毒载体等,且每种病毒载体各有其优势特点。国际上应用病毒载体已成功研制出猪瘟新型疫苗并应用于临床。论文主要介绍了目前常用的病毒载体,并分别列举了使用这些表达载体进行猪瘟基因工程疫苗研究的进展情况。     

牛源防御素类抗菌肽的生物信息学分析

为研究牛源防御素类抗菌肽的生物学功能,本研究利用Prot Param工具分析了抗菌肽的理化性质,利用SOPMA分析了抗菌肽的二级结构,利用NetOGlyc 4.0 Server分析了抗菌肽的糖基化,利用NetPhos 3.1 Server分析了抗菌肽的磷酸化,利用Target P 1.1 Server分析了抗菌肽的亚细胞内定位。结果表明,牛源防御素类抗菌肽为阳离子型抗菌肽,等电点在9.31~11.20之间;TAP、bBD-1、BNBD2、BNBD3、BNBD7、BNBD8和BNBD9为稳定性多肽,其他牛源防御素类抗菌肽为不稳定多肽;BNBD12和BNBD13为疏水性多肽,其他牛源防御素类抗菌肽为亲水性多肽;TAP、LAP、b BD-1、BNBD2、BNBD3、BNBD4、BNBD6、BNBD7、BNBD8和BNBD10由α螺旋、β折叠、β转角和无规则卷曲构成,EBD、BNBD1、BNBD5、BNBD11、BNBD12和BNBD13由β折叠、β转角和无规则卷曲构成;没有糖基化位点,除了BNBD7不存在磷酸化位点外,其他16种防御素类抗菌肽存在丝氨酸和苏氨酸的磷酸化位点,但不存在酪氨酸的磷酸化位点。根据分析结果推测牛源防御素类抗菌肽可作用于细胞壁或细胞膜,从而导致细菌死亡。     

猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及抗E2蛋白单克隆抗体的制备

利用DNA重组技术将猪瘟病毒（CSFV）石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法转入293T细胞中包装逆转录病毒假病毒.用包装的假病毒感染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞术（FACS）分析,结果表明CSFV E2基因在SP2/0细胞膜上成功表达.将表达E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体.取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经克隆和筛选获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗可与CSFV产生特异性反应并具有中和活性.