堆型艾美耳球虫单链抗体-PE40重组免疫毒素的构建

用HindⅢ对已构建的质粒pT-PE40和原核表达载体pET22-ScFv进行单酶切,回收纯化1 101 bp的PE40基因片段并将其亚克隆至pET22-ScFv载体中,构建重组免疫毒素表达质粒pET22-ScFv-PE40。将该质粒转化入感受态大肠杆菌J M109中增殖,提取质粒后用SalⅠ和NotⅠ进行双酶切鉴定,得到了1 114 bp和6 181 bp目的基因片段。测序鉴定PE40的插入方向,选取以PE40基因5′端与ScFv基因3′端连接的重组质粒,构建了抗堆型艾美耳球虫重组免疫毒素质粒pET22-ScFv-PE40。抗堆型艾美耳球虫重组质粒pET22-ScFv-PE40经1 mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌中表达约68 000的目的蛋白。使用抗PE多克隆抗体对目的蛋白进行蛋白印迹分析,结果表达产物与抗PE多克隆抗体发生抗原抗体反应,证明融合基因得到表达。     

温氏附红细胞体PCR检测方法的建立

本研究旨在建立1种快速准确检测温氏附红细胞体感染的分子生物学诊断方法。根据温氏附红细胞体的16S rRNA基因参考序列的保守区,利用软件Primer Premier 5.0设计合成了1对特异性引物,对温氏附红细胞体的基因组DNA进行PCR检测。结果表明,扩增出1段985bp的DNA序列,EcoRⅠ酶切鉴定得到2条500bp左右的条带,与预期结果一致,说明该方法扩增出了温氏附红细胞体的特异性条带。通过敏感性、特异性、重复性和临床样品检测试验证明,该方法具有特异、灵敏、快速的优点。结果提示,所建立的方法具有较高的特异性和灵敏性,可用于牛附红细胞体病诊断和流行情况监测。     

利用重组表位蛋白map0862-2154c检测牛副结核血清抗体胶体金免疫层析方法的建立（英文）

筛选牛副结核分枝杆菌的2个主要抗原map0862、map2154c中抗原指数高的抗原表位基因,将多表位基因序列合成,与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28a-map0862-2154c。重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中诱导表达,以表达的重组表位蛋白为抗原建立检测牛副结核分枝杆菌抗体的胶体金免疫层析方法(GICA,map0862-2154c-GICA),同时对河北省部分牛场采集的242份副结核病奶牛血样进行血清抗体检测。结果表明,牛副结核分枝杆菌表位蛋白map0862-2154c成功表达,表达产物能与牛副结核分枝杆菌阳性血清反应。临床血清样本检测结果表明,其敏感性、特异性和符合率分别为91.86%(79/86),94.23%(147/156)和93.38%(226/242),该方法可用于牛副结核病的血清抗体检测。     

艾美耳球虫单卵囊分离及PCR鉴定

目前为止,鸡主要有7种艾美耳球虫,在卵囊形态、结构、大小、肠道病变、寄生部位、最短孢子化时间、最短潜伏期等方面均具有自身特征[1].这使球虫诊断问题复杂化.     

牛病毒性腹泻致病机理及实验室诊断的研究

牛病毒性腹泻病(Bovine viral diarrhea，BVD)，也称牛病毒性腹泻-黏膜病(Bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD-MD)，是由牛病毒性腹泻-黏膜病毒(BVD-MDV)引起的一种呈多种临床表现的传染病。以发热、腹泻、消化道黏膜发炎、糜烂、持续感染与免疫耐受、繁殖障碍、血小板减少与出血综合征为主要特征。     

早期断奶仔猪腹泻的影响因子及防制措施

在目前集约化、规模化养猪生产中,断奶仔猪腹泻病的报道较多。大部分报道表明,腹泻病死率一般占10%~20%,高的可达40%以上。断奶仔猪腹泻已成为常见病、多发病,严重困扰着养猪业的发展。如何有效防制断奶仔猪腹泻病是当今养殖生产中最为重要的问题之一。1断奶仔猪发生腹泻的原因     

河北省部分地区致犊牛腹泻主要病原分布特征

为了明确河北省内致犊牛感染性腹泻主要病原,本研究自河北省8个地区采集775份犊牛腹泻粪便样品,根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因、牛冠状病毒(BCoV)N基因、牛轮状病毒(BRV)VP6基因和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因序列设计特异性引物,参照文献合成隐孢子虫18S rRNA和大肠杆菌16S rRNA引物,利用PCR方法对BVDV、BCoV、BRV、IBRV、隐孢子虫和大肠杆菌进行检测。结果显示,775份犊牛腹泻临床样品中,BVDV的阳性率为27.11%(205/775);BCoV的阳性率为17.52%(137/775);BRV的阳性率为9.85%(77/775);IBRV的阳性率为3.71%(29/775);隐孢子虫的阳性率为12.28%(96/775);大肠杆菌的阳性率为20.46%(160/775);还有9.10%的样品未检测出病原。在河北省部分地区采集的犊牛腹泻粪便样品中,BVDV检测阳性率最高为27.11%,在冬季犊牛BVDV的感染率最高为40.21%,且唐山和张家口地区奶牛场BVDV的感染率高于其他6个地区。本研究明确了河北省内...     

温氏附红细胞体双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用辛酸硫酸铵法从温氏附红细胞体高免血清中提取IgG,过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,建立了检测温氏附红细胞体抗原的双抗体夹心ELISA.结果显示:抗体最佳包被量为156μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶400,抗原最低检出量为6.64μg/mL,抗原及酶标抗体的最佳作用时间分别为1 h.应用建立的检测方法对河北省内222份奶牛血样进行了检测,阳性检出率为91.0%.证实:该方法灵敏度高,简便快速,适合作群体检测.     

不同剂型阿维菌素对獭兔疥螨病的治疗效果

獭兔疥螨病主要发生于秋冬季，以接触性传染迅速蔓延为特征，病兔生长发育受阻，严重者可导致死亡。阿维菌素（ＡｖｅｒｍｅｃｔｉｎＢ１）是一种广谱高效驱虫剂，许多学者已经证实其对螨类具有良好的驱虫活性。为了解不同剂型阿维菌素对獭兔疥螨病的驱虫效果及使用情况，...