马铃薯卷叶病毒CP基因的突变及其原核表达

通过人工合成DNA的方法,对马铃薯卷叶病毒外壳蛋白(CP)基因第52～177核苷酸(126bp)这段序列进行了突变,将其中12个AGA、AGG、CGA等精氨酸稀有密码子变成了原核高效表达的同义密码子CGT与CGC,将另外两个AGA精氨酸密码子变成了错义密码。构建了突变基因的原核表达载体pBAD-LRCP2,Bsp1407Ⅰ与MssⅠ酶切及DNA测序结果表明,基因突变符合要求,表达载体的构建正确。在37℃,大肠杆菌工程株TOP10(pBAD-LRCP2)用0.2%L-阿拉伯糖诱导培养4h,SDS-PAGE显示蛋白图谱上有一条36ku的诱导表达的融合蛋白条带,结果表明突变基因在PBAD启动子驱动下在大肠杆菌中实现了表达。     

简易、快速提取大葱叶绿体、线粒体DNA的方法

叶绿体、线粒体是进行光合作用、呼吸作用的细胞器,在绿色植物中占有重要地位.它们具有相对独立的遗传物质,叶绿体DNA、线粒体DNA.研究表明,细胞质雄性不育(CMS)、抗除草剂等性状与mtDNA或cpDNA有关.因此cpDNA、mtDNA的研究越来越受重视,另外,cpDNA或mtDNA还被用来研究植物的系统发育、分类等.然而,cpDNA、mtDNA的提取是限制深入研究的重要因素.传统的方法利用梯度离心提取cpDNA和mtDNA,其成本高,耗时长,产率低,对设备的要求也较高,不宜广泛应用.大葱雄性不育性在杂种优势利用中有重要价值,由于其母性遗传的特性,不育性与细胞质遗传物质有密切联系.然而大葱cpDNA、mtDNA的研究报道很少,本文报道了简单、快速提取大葱cpDNA、mtDNA的方法,为从分子水平研究大葱雄性不育性提供了条件.     

不同条件下芍药花粉的贮藏寿命

为解决杂交育种花期不遇的问题,研究了芍药花粉短期和长期贮藏技术.含水量和贮藏温度是影响花粉贮藏寿命的重要因素.芍药干燥花粉室温保存寿命7d左右,4℃条件下的安全贮藏期在90d左右,-20℃条件下芍药花粉的安全贮藏期在180 d左右,-86℃务件下的安全贮藏期在1年以上.自来水冲洗是超低温贮藏解冻的有效措施.4℃和-86℃贮藏是解决芍药育种花期不遇的有效措施.     

不同条件下牡丹花粉的贮藏寿命

以2个牡丹品种“凤丹白”和“鲁荷红”为试材,以花粉萌发率和授粉结实率为依据,研究了室温(25℃)、4、-20、-86℃条件下的牡丹花粉贮藏寿命,以建立花粉贮藏技术.结果表明:牡丹花粉室温下保存7d、4℃下保存90 d、-20℃下保存180 d仍有很高的萌发率,-86℃下贮藏la,花粉萌发率没有明显下降、授粉结实率高.室温干燥24 h花粉贮藏后萌发率显著高于未干燥花粉.温度和含水量是影响牡丹花粉贮藏寿命的重要因素.自来水冲洗解冻效果最好.4℃和-86℃贮藏是解决牡丹育种花期不遏的有效措施.     

6个玉米杂交种种子纯度的SSR鉴定

玉米杂交种纯度是影响玉米产业发展的重要因素之一,建立快速、准确可靠的纯度检测技术是控制杂交种纯度的有效措施。从30对SSR引物中筛选出6对表现为双亲互补型的引物,建立了6份杂交种纯度鉴定的SSR体系。Umc1002、bnlg1112、bnlg238、Umc1153、phi072、bnlg240可分别用于玉米杂交种农大108、浚单20、郑单958、莱农14、莱农15和鲁玉16的纯度检测。双亲互补型等位变异基因频率在0.028～0.072之间,可较准确地检出样品中的自交株和大部分异型株。SSR鉴定玉米杂交种纯度结果略低于幼苗鉴定,但二者差异不显著,相关系数为r=0.8434。本试验建立的SSR技术体系可用于6个玉米杂交种纯度的快速检测。     

山东省玉米骨干自交系和杂交种的SSR指纹图谱构建

构建骨干品种（系）指纹图谱,可为新品种的审定和品种保护建立准确可靠的依据,也是适应玉米育种快速发展的需要。分别利用74对SSR引物对35份骨干自交系和19份主栽杂交种进行了SSR分析。筛选出10对和20对适于玉米自交系和杂交种分析的核心引物,分别检测出115和124个等位变异,将扩增条带数字化,构建了自交系和杂交种的指纹图谱,出现相同指纹图谱的概率分别为3.13×10-11和5.59×10-25。构建的指纹图谱用于玉米品种鉴定是可行的,对玉米新品种审定和品种权保护具有重要意义。     

利用地温构建菏泽牡丹花期预测模型

针对山东菏泽市的国际牡丹花会召开时间难与牡丹花期吻合,影响当地牡丹产业和牡丹文化发展这一现状,通过分析菏泽地区土壤温度与牡丹盛花期之间的关系,建立了地温(1月20日距地温稳定高于4℃的首日的天数和首日距4月10日的平均地温)与盛花期之间的多元非线性回归预测模型,并利用该模型对28 a来的盛花期进行了预测。预测结果与实际开花期的最大误差为±4d,预测效果较好,为确定菏泽国际牡丹花会的召开时间提供了预测方法和模型。     

SRAP构建玉米杂交种指纹图谱的研究

摘 要：【研究目的】SRAP（相关序列扩增多态性）是近年来发展起来的一种新型的DNA标记技术,本文旨在探讨SRAP技术用于玉米品种鉴定的可行性,并建立相应技术体系。【方法】采用25个引物组合对19个玉米杂交种进行了SRAP扩增。【结果】19个引物组合扩增出了多态性条带,共扩增出152条多态性条带,平均每个引物组合产生8条多态性带,多态性频率从44.4%（me4/em3）～91.7%(me4/em1)。19个引物组合检测到的平均PIC为0.879,而引物组合me4/em1可区分供试的所有19个玉米品种。进一步筛选了5对引物,构建了供试材料的指纹图谱,为SRAP用于玉米鉴定奠定了基础。【结论】SRAP具有很高的分辨率,而且操作简便、稳定可靠,具备了用于作物品种鉴定的条件,用于玉米品种鉴定是可行的,可作为SSR技术的重要补充。     

牡丹PsZFP1转录因子的特性及表达分析

含保守锌指结构域的锌指蛋白(ZFP)是一类在调控植物生长发育和逆境响应过程中具有重要作用的转录因子,为了探究转录因子PsZFP1在牡丹休眠解除过程中的功能和作用机制,以牡丹鲁菏红花芽的RNA为模板,通过5′-RACE扩增PsZFP1的全长cDNA序列,利用EditSeq和MEGA 6.0进行氨基酸序列和系统进化树分析,...     

农杆菌介导的β-1, 3-葡聚糖酶基因转化花生的研究

以花育22号成熟胚萌发5-7 d的幼叶为外植体,以农杆菌为介导将含有β-1,3-葡聚糖酶基因的表达载体pATC940转入花生,获得转基因植株。结果表明,外植体经预培养1-2 d,于OD600为0.5-1.0之间的农杆菌菌液中浸泡10-15 min,再共培养3 d,有利于提高转化率。并对再生的抗性植株进行了PCR检测。