鸡传染性法氏囊病病毒抗血清的研制

[目的]确保鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗血清高效力的同时又彻底解决安全性和免疫应激问题,旨在研制出一种高效、安全的鸡传染性法氏囊病(IBD)预防和治疗制品.[方法]以SPF鸡为免疫动物,按照《兽用生物制品试验研究指导技术原则》和《中华人民共和国兽药典》(2010年版)的要求研制IBDV抗血清,经脱毒处理后,对其半成品及成品进行检验.[结果]以IBDV NJ株免疫4周龄SPF鸡获得的抗血清,未脱毒处理前的血清效价≥1∶64,脱毒处理后的成品效价≥1∶32.半成品和成品的检验结果显示,经过脱毒处理后的IBDV抗血清制品呈橙黄色,无菌、无支原体、无外源病毒,对小白鼠、豚鼠和SPF鸡均安全,甲醛和硫柳汞残留量也未超过规定标准.[结论]研制的IBDV抗血清制品符合《中华人民共和国兽药典》的要求,完全可用于IBD的紧急预防和早期治疗,今后可作为一个正规产品上市以满足市场需要.     

松材线虫伴生细菌的分离鉴定及其致病性

从松材线虫虫体上分离到两个细菌菌株:GD1和R,经鉴定,菌株GD1为坚强芽孢杆菌.利用水培马尾松离体松枝作接种材料,接种消毒后的松材线虫(Bx)、GD1、R、Bx GD1和Bx R.结果表明,松材线虫和坚强芽孢杆菌混合接种,松枝发病,松枝流脂减少至停止,蒸腾作用降低,单独接种松材线虫或坚强芽孢杆菌,松枝不发病.菌株R对松材线虫病的发生没有影响.提出松材线虫及其伴生细菌均是松材线虫病不可缺少的致病因素.     

不同施肥模式对水稻产量及养分利用效率的影响

为了解决长江中下游中低产稻田产能提升应用,在湖北当阳开展大田试验,设置当地常规施肥(T₁)、常规复合肥+3000 kg/hm²生物有机肥(T₂)、有机无机复混肥(T₃)、生物炭基肥(T₄)、水稻专用配方肥(T₅)及不施肥(CK)共6个处理,在同等施肥量下研究了不同施肥模式对水稻产量及养分利用率的影响。结果表明：不同施肥处理下,水稻产量及产量构成因素均呈现为T₄>T₅>T₃>T₂>T₁>CK,与T₁处理相比,T₂～T₅处理分别增产4.27%～19.27%;在相同施氮处理下,T₂～T₅处理氮素累积量较T₁处理增加了4.08%～32.03%,T₂～T₅...     

猪肺炎支原体P46蛋白单克隆抗体制备

P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,且与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。制备针对该蛋白的特异性单抗能为猪肺炎支原体的检测及机理研究提供有效的资源。本研究取猪肺炎支原体全菌抗原免疫小鼠,用大肠杆菌表达的P46蛋白作为筛选抗原制备了2株特异性单克隆抗体1A4和3C11。结果显示,2株单抗ELISA效价最高可达1∶64 000。Western-blot结果表明,2株单抗均能与原核表达的P46蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中46 000大小的蛋白发生特异性反应;2株杂交瘤细胞株经3个月冻存或连续传代3个月均能保持较高的滴度。本研究成功制备了2株针对猪肺炎支原体P46蛋白的特异、稳定且高滴度的单克隆抗体。     

鸡传染性法氏囊病病毒JSNJ株的分离鉴定及其部分特性研究

从江苏南京疑似传染性法氏囊病病毒感染的鸡场采集病料,通过临床症状、病理剖检变化、人工感染、SPF鸡胚接种、琼脂扩散试验和PCR扩增鉴定等,证实了该鸡场发生了鸡传染性法氏囊病,且从病料中分离到了纯净的传染性法氏囊病病毒.同时,证实该毒株的毒力较强,具有标准毒株的理化特性,免疫原性也比较好.     

山羊支原体肺炎的CT影像分析

旨在研究羊感染肺炎支原体后胸部C T影像学特征.将20只山羊分为2组,对照组5只、试验组15只,试验组通过气管注射感染5 mL绵羊肺炎支原体(1×107 CCU·mL-1)人工诱发山羊支原体肺炎,对照组注射等体积生理盐水.感染后观察两组羊的临床症状,在感染后第0、7、14、21、28天对两组羊胸部进行C T扫查,分析支...     

圆支清疫苗中猪圆环病毒2型对猪肺炎支原体的免疫增强作用

用相同量猪肺炎支原体(Mhyo)和不同量猪圆环病毒2型(PCV2)混合后的4组疫苗分别免疫BALB/c小鼠、新西兰大耳白兔和健康仔猪,测定小鼠、兔和仔猪血清中PCV2和Mhyo抗体水平,并在仔猪二免后进行Mhyo济南系强毒攻击.结果:小鼠和兔免疫疫苗后产生的Mhyo抗体水平随着疫苗中PCV2抗原含量的增加而提高.仔猪免...     

猪肺炎支原体量子点荧光原位杂交研究方法的建立与应用

利用生物素化的猪肺炎支原体核酸探针和量子点荧光显色系统,对人工感染组、自然感染组和健康对照组的试验猪肺样品,以及临床样品进行量子点荧光原位杂交检测。结果表明：按照探针质量浓度为1mg／L、80～90℃变性10min、37℃杂交10h和QDs—SA复合物浓度为10nmol／L的条件进行猪肺炎支原体的量子点荧光原位杂交检测结果比较理想;而人工感染组、自然感染组和健康对照组样品的QD-FISH检测结果与分离培养结果和PCR检测结果相比,符合率均达到100％刘占床样品的QD-FISH检测结果与PCR检测结果相比,符合率为83．3％。从而证明猪肺炎支原体量子点荧光原住杂交法是一种直观和敏感的检测方法,可以用于猪肺炎支原体的检测、定位和致病机理研究,也为其他病原的研究提供了参考方法。     

猪鼻支原体TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立

为建立快速检测猪鼻支原体(M.hyorhinis)的荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的p37基因序列设计并合成引物及MGB探针,构建含有p37基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性.结果显示该方法具有良好的特异性,与猪肺炎支原体、猪絮状支原体、猪滑液支原体、鸡毒支原体、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒、猪瘟病毒及猪流感病毒无交叉反应,对M.hyorhinis的检测敏感性为10拷贝/μL,并且稳定性好,变异系数小于2％.利用建立的荧光定量PCR方法对55份临床样品进行检测,阳性检出率为87.3％(48/55),而分离培养方法和普通PCR的阳性检出率分别为41.8％(23/55)和29.1％ (16/55).该结果表明,建立的方法特异性强、敏感性高、稳定性好,可以用于M.hyorhinis临床样品的检测,对M.hyorhinis的快速和定量检测具有重要意义.     

巢式PCR检测猪鼻支原体方法的建立及应用

应用巢式聚合酶链式反应(Nested PCR)建立了一种检测猪鼻支原体(Mycoplasmah yorhinis)的方法,试验中以酚-氯仿法制备模板DNA,根据猪鼻支原体P37序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法.在特异性检测试验中,设计的引物不能扩增出猪絮状支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡毒支原体、胸膜肺炎放线杆菌、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒等病原体;敏感性试验表明,第1次PCR和第2次PCR的敏感度分别为3.01 mg/L和3.01×10-4mg/L.对41份临床样品肺组织的检测中,普通PCR和巢式PCR的检出率分别为29.3％(12/41)和82.9％(34/41).结果表明,巢式PCR方法明显优于常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性,为猪鼻支原体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术.