进境韩国兰花细菌性褐腐病菌的分离与鉴定

[目的]鉴定进境韩国兰花细菌性褐腐病菌。[方法]从韩国进境的大花蕙兰植株病变叶片中分离到细菌菌株,并通过形态鉴定、培养特征、生理生化及16S rDNA序列分析和致病性测定对其进行了鉴定。[结果]确认该病菌为兰花细菌性褐腐病菌(Erwinia cypripe-dii),这是我国首次从进境兰花中检出该病害。[结论]为我国兰花细菌性褐腐病菌的预防及控制奠定了基础。     

烟草bar基因的转化及其转化体快速检测方法的研制

用改良的叶圆盘法进行了烟草bar基因高效转化并获得11个转基因株系，转化率高达32．4％。提出构建以bar基因为选择标记的新型植物表达载体的设想，实验分析了不同PPT浓度与GS酶的解抑制量及外植体存活、分化率的关系，结果表明，100mg／L以上的PPT可完全抑制非转化外植体的存活，从而证实了设想的可行性。研制出检测抗除草剂转基因植物的微量、快速、有效的检测新方法，并用实际检测实验和统计学手段验证了该方法的可靠性和实用性。     

基于TaqMan MGB探针的葡萄茎枯病菌实时荧光PCR检测方法

 葡萄茎枯病菌是我国进境植物检疫性有害生物。带菌植物材料是病害传播的重要载体,准确、灵敏、快速的检测方法是严格执行口岸检疫措施及研究病害防控措施的有力工具。根据葡萄茎枯病菌及其近似种的细胞骨架蛋白(Actin)基因序列差异,设计并合成1对引物和1条特异性TaqMan-MGB探针,建立了葡萄茎枯病菌的实时荧光PCR检测方法。通过对反应体系的优化,确定了葡萄茎枯病菌的实时荧光PCR最佳反应条件:引物终浓度为0.6 μmol·L^-1,探针终浓度为0.6 μmol·L^-1。灵敏度试验结果显示,最低检测限为总DNA含量20 pg(20 μL反应体系)。此方法快速灵敏,整个反应1 h即可完成,检测过程完全闭管,无需PCR产物后续处理,为快速检测葡萄茎枯病菌提供了重要参考。该方法用于口岸疑似菌株检测,可成功检测出葡萄茎枯病菌。本研究建立的基于TaqMan MGB探针的荧光定量PCR检测方法为葡萄茎枯病菌的早期快速检测监测提供了有力工具。     

不同绵羊品种杂交后代微卫星标记

绵羊的产羔数是一个遗传力只有0.1左右的数量性状,难以用常规的育种技术来改良产羔性状.如果想加快育种进程,采用基因分析是有效的途径之一.     

边缘假单胞菌的分离鉴定及其特性

边缘假单胞菌Pseudomonas marginalis是假单胞菌科假单胞菌属植物病原细菌,能引发百合软腐病、草莓花疫病、番茄细菌性髓部坏死病、马蹄莲块茎软腐病等,还可引发洋葱、莴苣、中国白菜、大蒜、姜、花椰菜、水稻等软腐病。边缘假单胞菌具有如此广泛的宿主致病性取决于其生理特点,尤其是在0 ℃生长良好、5 ℃能大量繁殖等特点。2007年在我国甘肃发现由边缘假单胞菌边缘致病变种引发的马铃薯腐烂病,而有关边缘假单胞菌分离鉴定和特性的研究则鲜有报道。本试验从苗木中分离得到边缘假单胞菌,对其形态特征、生理生化特性和致病性进行研究,并通过16S rRNA序列分析进一步验证其分类地位。     

柿果软化过程中α-淀粉酶活性与Cx纤维素酶活性变化研究

[目的]为了探索柿果在采后软化过程中α-淀粉酶和Cx纤维素酶活性的变化规律。[方法]以国内主栽涩柿品种"磨盘柿"为研究材料,对磨盘柿采后贮藏过程中果肉硬度与α-淀粉酶和Cx纤维素酶活性以及蛋白质含量的变化关系进行了研究。[结果]随着柿果硬度的降低,α-淀粉酶活性呈逐渐上升的趋势,Cx纤维素酶活性呈先上升、后下降的趋势,蛋白质含量呈总体上升的趋势。当柿果硬度小于2.00 kg/cm2时,α-淀粉酶活性最大[为3.214 mg/(g.min)],Cx纤维素酶活力达最小值(0.314 U/mg),蛋白质含量达最大值(为0.927μg/mg)。[结论]该研究为柿子采后的保鲜处理提供了科学依据。     

IL-10对感染口蹄疫病毒的树突状细胞的影响

树突状细胞(dendritic cells,DC)是机体中重要的抗原递呈细胞,在病毒感染机体后的免疫调节过程中具有重要作用。为研究调节IL-10的分泌是否会影响DC感染病毒后的免疫反应,本研究用FMDV感染DC后发现,IL-10的分泌量可以影响DC在免疫过程中各种细胞因子的表达,故认为IL-10在口蹄疫病毒感染过程中对机体的免疫调节具有重要的影响。     

香菜腐烂病及其检疫重要性

本文综述了香菜腐烂病菌(Mycocentrospora acerina(Hartig)Deighton)的病原学、寄主、地理分布、形态特征及鉴定、生物学特性、传播途径及检疫重要性.     

基于gpd基因的大蒜黑腐病菌实时荧光定量PCR鉴定技术

【目的】大蒜黑腐病菌（Embellisia allii (Campanile) Simmons）的检疫鉴定主要采用形态鉴定方法。不仅耗时长,而且大蒜黑腐病菌与本属其他种以及其他属的分生孢子非常相似,极难分辨,需要建立快速、有效的分子诊断方法。研究旨在建立实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)体系以准确、灵敏地鉴定大蒜黑腐病菌。【方法】从NCBI的GenBank数据库中,选取大蒜黑腐病菌和其他大蒜病害以及近似种的3-磷酸甘油脱氢酶（gpd）基因核酸序列数据15种,应用引物设计软件Primer express,根据探针设计原则从理论上选出1条探针和3对引物。根据试验结果对上述引物进行筛选,筛选出能够鉴定出大蒜黑腐病菌的特异性引物对和TaqMan探针。同时对反应体系中复性-延伸温度的反应参数进行优化,设计56、58、60℃ 3个温度梯度;将大蒜黑腐病菌基因组DNA在紫外核酸分析仪上进行定量后进行10倍的梯度稀释,对探针灵敏性进行测试,从而建立大蒜黑腐病菌TaqMan水解探针法qPCR检测体系。【结果】从基于GenBank上的15种gpd基因核酸序列设计的引物和探针中,筛选出能够鉴定大蒜黑腐病菌的特异性引物对Emb21/Emb32和TaqMan探针Emb。在供试的6种菌株中,只有靶标菌大蒜黑腐病菌利用该引物对和探针能够被特异性的检测到阳性,空白对照和其他参试菌均没有荧光信号的增加,检测为阴性。复性-延伸温度反应参数优化中,△Rn荧光信号增加值在58℃时达最大,56、60℃荧光信号增加值降低,经过多次重复试验,确定最佳的复性-延伸温度为58℃。灵敏度测试中,大蒜黑腐病菌DNA浓度稀释到140 pg时,所得的图形较好;当体系中模板浓度稀释到14 pg时,所得的图形较差。最终DNA检测灵敏度为140 pg。应用该引物和探针建立的qPCR检测方法能够从供试的菌株中特异性地检出大蒜黑腐病菌。【结论】建立了大蒜黑腐病菌TaqMan探针法qPCR检测体系,该检测技术能够从供试的6种病原菌中特异性检测出大蒜黑腐病菌,检测灵敏度可达140 pg。建立的基于gpd基因的大蒜黑腐病菌qPCR方法具有高度的特异性和灵敏度,适合口岸大蒜黑腐病菌的快速检测。     

柿果软化过程中几种生理指标的变化

[目的]探索柿果软化过程中呼吸速率、乙烯释放量及蛋白酶含量的变化规律。[方法]以我国主栽涩柿品种＂磨盘柿＂为试验材料,研究磨盘柿采后贮藏过程中中呼吸速率、乙烯释放量、蛋白酶含量与果肉硬度变化间的关系。[结果]随着柿果硬度的降低,呼吸速率和乙烯释放量均呈先上升后下降趋势,蛋白酶含量总体呈下降趋势。[结论]柿果软化是多因素共同作用的结果。