猪干扰素α、β和γ的融合表达及活性

【目的】研制高效的猪基因工程干扰素制剂用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治。【方法】采用重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）技术将PoIFN-α、PoIFN-β和PoIFN-γ成熟肽基因进行连接,形成3种融合基因PoIFN-α/β、PoIFN-α/γ和PoIFN-β/γ,并构建到原核表达载体pET30a进行融合表达,用细胞病变抑制试验和淋巴细胞转化试验测定融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ的生物学活性,同时与非融合干扰素rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-γ进行比较分析。【结果】成功构建了3种融合基因,并在大肠杆菌中实现表达,经纯化、复性得到3种具有生物学活性的融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ。细胞病变抑制试验结果表明,无论是在Marc-145还是在PK-15细胞上,3种融合蛋白均具有较强的抗病毒活性,其抗PRRSV或VSV活性明显高于非融合的rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-γ,体现出一定的叠加效应;MTT法检测淋巴细胞转化试验结果显示,rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性;而rPoIFN-α/β效果不明显。说明Ⅰ型与Ⅱ型PoIFN之间能协同调节免疫,而Ⅰ型的不同亚型之间无明显协同作用。【结论】3种融合干扰素具有较强的抗病毒活性,可以用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治,其中rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ还具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。     

猪血纤维连接蛋白的提取及其免疫血清的制备

用猪血进行纤维连接蛋白(FN)等多种活性物质联合提取的工艺研究。1)采用分段盐析、亲和层析等方法从猪血中分离和纯化纤维连接蛋白;以标准品为对照,将提取的FN样品用诊断试剂盒、波长扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳、细胞生长性能等方法进行质量检测,结果表明提取的猪血纤维连接蛋白的含量、对细胞的贴壁率、增殖率都与标准品相接近,两者无显著差异(P>0.05);样品FN电泳图谱、波长扫描图谱与标准品相一致,说明提取工艺达到了生产猪血纤维连接蛋白的标准要求。2)以上述提取的猪血FN样品为抗原,制备兔抗猪FN的免疫血清,其效价最高达1∶128,说明提取的猪FN可以诱发机体产生特异性抗体。结论认为:本研究从猪血中联合提取FN的生产工艺方法可行,为FN的规模化生产和猪血的综合利用与开发提供参考。     

河南省鸡源致病性大肠杆菌耐药性的监测分析

对来源于河南省32个县市的93株鸡源致病性大肠杆菌进行了16种抗生素药物的药敏试验和菌株耐药性与质粒图谱间关系的分析研究。结果表明:93株鸡源致病性大肠杆菌均为多重耐药菌株,耐药种类3～14种,耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,相同来源的大肠杆菌耐药图谱、质粒图谱相似,但菌株耐药种类与质粒图谱条带的多少无一定的相关性。     

核酸疫苗研究新进展

核酸疫苗是90年代初从基因治疗研究领域发展起来的一种全新疫苗,又称为DNA疫苗或基因疫苗,它是把编码免疫原或与免疫原相关的外源基因克隆到真核质粒表达载体上,然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内,使外源基因在动物体内表达,产生的抗原激活机体的免疫系统,引发免疫反应,从而达到预防和治疗疾病的目的.与传统的灭活或弱毒疫苗、亚单位疫苗相比,核酸疫苗以具有高效性、安全性和制备简单、易于贮存运输等优点,而受到全世界的普遍关注,具有广阔的发展前景.     

CO_2施肥-Zn处理对印度芥菜生物量和Zn积累的影响

在温室内对不同Zn浓度土壤中生长的印度芥菜进行2种不同浓度的CO2施肥试验。结果表明:CO2施肥能显著增加Zn污染土壤中印度芥菜的生物量。在3种Zn浓度下,CO2施肥组根重分别比对照组增加11.24%、38.05%和37.63%,且在0.01水平上有差异;地上部重分别增加37.50%、9.72%和31.05%,且在0.05水平上有差异。CO2施肥均显著地促进植株体对Zn的积累,各器官中的Zn含量均高于CO2对照组,且根中Zn浓度在0.01水平上有差异,茎、叶中Zn浓度在0.05水平上有差异。     

鸡大肠杆菌病的流行病学研究进展

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌所引起的局部或全身性感染的传染病,可以引起胚胎死亡、脐炎、败血症、肉芽肿、全眼球炎、气囊病、腹膜炎、输卵管炎等一系列病症,并且还常常与病毒和其它细菌性疾病并发,造成鸡群的高死亡率,给养禽业造成了严重的经济损失。由于该病在一些鸡场中严重发生,兽医临床上抗菌药物不得不大量地被应用,导致大肠杆菌耐药菌株不断出现,耐药谱不断扩大,形成恶性循环;同时也加剧了抗菌药物在畜禽体内的残留,给养禽业的持续发展和人类的身体健康带来潜在危害。因此,开展鸡大肠杆菌的耐药性监测工作,加强耐药性机制的研究,…     

河南省鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定

从河南省32个县市的典型大肠杆菌病病变的病、死鸡中,分离到致病性大肠杆菌93株,分别对各菌株进行致病性试验、生化鉴定和血清型鉴定。结果表明:本省致病性大肠杆菌的优势血清型为O78、O1、O2,分别占定型菌株的35.14%、18.92%、13.51%,菌株生化鉴定的结果与其致病力强弱和血清型无一定的相关性。     

新城疫强毒株分离鉴定及新城疫二价油乳剂灭活苗的研制

鸡新城疫(ND)于1926年在我国首次发生，至今虽然该病在养鸡生产中得到了较好控制，但仍然是危害较严重的疫病之一。近年来河南部分地区用Lasota疫苗免疫过的产蛋鸡场，经常发生不同程度的新城疫疫情，产蛋鸡表现为明显的呼吸道症状，产蛋量大幅度下降，有软壳蛋、沙壳蛋、畸形蛋出现，发病后期，少数鸡有神经症状。用分离株和新城疫Lasota株研制出新城疫二价油乳剂灭活苗，     

香蕉枯萎病对抗感品种营养生长期光合特性的影响

【目的】探究香蕉枯萎病不同发病程度下对抗感香蕉品种光合特性的影响。【方法】以抗病品种云蕉1号(YJ)和感病品种巴西蕉(B)为供试材料，在2个品种不同发病程度下(健康植株0级和发病植株1、2、3级),测定香蕉叶片的叶绿素相对含量(SPAD)、净光合速率(P_n)、气孔导度(G_s)、胞间CO₂浓度(C_i)、蒸腾速率(T_r)的变化。【结果】抗病品种YJ与B的光合日变化趋势相似，P_n日变化均呈“单峰型”曲线，没有“光合午休”现象，且峰值均出现在13:00—14:00时；通过光合-光响应曲线得到品种YJ的光补偿点与光饱和点分别为57.63和2630.00μmol/(m²·s),B的光补偿点与光饱和点为60.86和2250.00μmol/(m²·s);得到YJ与B的暗呼吸速率(Rd)为2.98和3.29μmol/(m²·s)。B与YJ的P_n、G_s、T_r...