pEGFP-loxP-Lox2272载体的构建及牛胎儿转基因阳性细胞筛选程序的优化

绿色荧光蛋白(GFP)是一种分选细胞的理想标记,将绿色荧光蛋白基因定点整合到牛的Y染色体上是利用GFP分选X和Y精子的关键.本研究通过特殊的引物设计和高保真酶PCR扩增将loxp位点和Lox2272位点引入pEGFP-N3载体中,构建了重组质粒pEGFP-loxp-Lox2272.采用LipofectamineTM (Lip)2000介导线性化质粒p EGFP-loxp-Lox22 72转染牛胎儿成纤维细胞,结果显示,在质粒用量一定的情况下30μL Lip 2000转染细胞的效果最理想;转染后的牛胎儿成纤维细胞用G418筛选,结果显示,浓度为600μg/mL的G418最适合筛选转基因细胞.本实验的结果为载体改造提供了一种有效的方法并为牛体细胞基因打靶阳性细胞系的筛选提供了重要的技术参考.     

卵丘细胞在牛卵母细胞体外受精生产胚胎中的作用

牛体外胚胎生产是解决胚胎移植产业化胚胎来源的有效技术方法,其包括卵母细胞体成熟、体外受精和受精卵体外胚胎.而体外受精胚胎的质量是影响胚胎移植妊娠率与犊牛成活率的重要因素.体外受精过程中卵丘细胞分泌的一些重要物质(类固醇激素、细胞生长因子等),对牛卵母细胞体外成熟、体外受精以及受精卵体外发育都具有重要的促进作用.本文综合了近年来该领域的研究进展,着重分析了卵丘细胞对卵母细胞体外成熟,以及体外受精过程中卵丘细胞的分泌功能、质量和共培养体系对卵母细胞体外受精效率的影响.     

集约化养鸡场鸡新城疫的综合防控措施

鸡新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)-禽副黏病毒(APMV-1)感染引起,对养鸡生产威胁极大的一种急性、烈性、高度接触性传染病。国际兽疫局(OIE)将其定为A类传染病,我国列为一类传染病。至今,世界范围内已发生过4次大流行,给养鸡生产造成了巨大经济损失。有效防控鸡新城疫威胁,是广大养禽与禽病防治工作者的共同目标。     

新疆地区羊传染性无乳症病原的鉴定

从新疆地区患乳房炎的山羊、绵羊乳汁中分离到9株霉形体,其形态特征、培养特性、生化特性和血清学反应等均与无乳霉形体国际模式株 PG_2一致,为无乳霉形体(Magalactiae)。     

山东省岸堤水库鱼病调查及防治

岸堤水库位于山东省蒙阴县城东部,是山东省第二大水库,2003年鲤养殖网箱(5m×5m)500个,鲫养殖网箱200余个,鲢等滤食性鱼养殖网箱近9 000个。笔者于2003年4—9月,走访调查了岸堤水库的铁城、石桥、重山、石宝玉等村庄23户鲤、鲫养殖户,调查网箱253个,统计分析了这6个月内岸堤水库吃食性鱼类鲤和鲫的发病情况,并对鲤粘孢子虫病和2龄鲫营养障碍症进行了防治探讨,以期为今后水库网箱养鱼的防病和治病工作提供参考。     

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(耐热保护剂)活疫苗的中试生产及区域试验

按照拟定的<鸡马立克氏病HVT(耐热保护剂)活疫苗制造及检验规程>(草案)在辽宁益康生物制品厂进行了5批该疫苗的中试生产,计3542万羽,检验全部合格;耐老化试验及保存期测定结果表明:该产品在2～8℃可保存24个月.在北京、河北、辽宁、广西、广东等地选择几个大型孵化厂进行区域试验,共免疫鸡700万羽,均未出现任何不良反应,跟踪观察,免疫鸡也未发生马立克氏病,表明该疫苗安全有效.     

基于选择消除分析挖掘豌豆耐冻相关基因

近年来，冬季的低温对豌豆生产造成严重损失。本试验对16 份极端耐冻豌豆和14 份极端冷敏感豌豆的全基因组重测序数据与参考基因组进行比对获得SNP，再基于过滤后的SNP 数据对所有材料进行系统发育树构建、主成分分析、连锁不平衡分析以及选择消除分析等，并依据选择消除分析的群体多样性（θπ）、杂合率（Hp）和群体分化（Fst）三者交集的前5%候选区域，最终筛选获得34 个与豌豆耐冻相关的基因。研究结果为豌豆耐冻品种选育和“冬豆北移”栽培模式提供理论支撑。