利用SUMO表达系统高效表达猪O型口蹄疫病毒VP0、VP1、VP3基因

根据GenBank中公布的猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)全基因合成了FMDV结构蛋白前体蛋白P1基因,同时设计了扩增FMDV结构蛋白VP0、VP1和VP3基因的引物。以P1基因为模板,分别经PCR扩增获得FMDV VP0、VP1和VP3基因。扩增产物克隆于Blunt载体中,酶切后将目的片段连接到原核表达载体SUMO中,构建重组表达质粒SUMO-VP0、SUMO-VP1和SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见融合蛋白均获得高效表达,融合蛋白表观分子质量分别约为55、48和40 ku。在IPTG浓度为1.0 mmol/L,温度为37 ℃,诱导5 h时融合蛋白表达量最大。Western blotting结果表明,融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。     

雏鸭大肠杆菌病的诊治与体会

（一）发病情况2012年5月22日,淮安区仇桥镇范某饲养的5000只、65日龄雏鸭发生以精神萎靡、食欲减退、腹泻为主要症状的疾病,初期每天死亡8～12只,曾用土霉素进行治疗未见明显效果,至5月26日当日死亡数达到57只,于是范某前来求诊。笔者根据临床症状和病理变化,并结合实验室检验结果,确诊为鸭大肠杆菌病,并及时采取有效防治措施,很快控制了病情。现将该病例的诊治情况报告如下。     

胡子鲶腐皮病病原菌的分离鉴定和药敏试验

从玉林市某养殖场患腐皮病濒死胡子鲶的肝脏、心脏、腹水、病灶等处共分离到4株优势菌株(0907A、0907B、0907C和0907D)。据API 20NE的鉴定结果,4株菌株均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),均对胡子鲶有强的致病力,是胡子鲶腐皮病的病原菌。4株病原菌对44种药物中的头孢呋肟、氟苯尼考、菌必治、舒普深、盐酸沙拉沙星、多粘菌素B和磺胺间甲氧嘧啶钠等14种药物都高度敏感。对青霉素G、氨苄青霉素、苯唑青霉素、氧哌嗪青霉素、阿莫西林和阿洛西林6种药物都不敏感。     

牛病毒性腹泻病毒E2基因生物信息学分析及可溶性表达

为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽序列后合成并连接到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-Opti-E2;转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌,经SDS-PAGE和Western blot分析,成功获得大小为43 kDa的BVDV E2基因的最佳可溶性蛋白,且该蛋白特异性较好。本试验E2蛋白的成功表达可为后续ELISA方法的建立和亚单位疫苗的开发奠定基础。     

仔猪腹泻的病因分析

1传染病病因1.1病毒性腹泻猪传染性胃肠炎由猪传染性胃肠炎病毒引起。病毒主要存在于猪的空肠和十二指肠。能感染各种年龄的猪,尤以10日龄以内的仔猪发病率、死亡率高,幼龄仔猪死亡率可达100%,5周龄以上仔猪死亡率较低,成年猪几乎没有死亡。有明显的季节性,多     

枯草芽孢杆菌pgsA基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已发表的枯草芽孢杆菌pgsA的基因序列,设计合成了一对能扩增1 225 bp基因片段的引物。以枯草芽孢杆菌染色体DNA为模板,经PCR扩增得到目的片断,然后将其克隆到pMD18-T载体上,经蓝白斑筛选和酶切鉴定选择阳性克隆进行序列测定。经DNA Star软件将其与Gen-Bank上的pgsA序列进行同源性比较,结果表明,核苷酸同源性均在90%以上,氨基酸同源性为94%以上。核苷酸序列系统进化树分析,发现该试验株与浙江株亲缘关系最近。经ProtScale软件分析表明,该基因所编码蛋白在靠近其N端存在一个跨膜区,为跨膜表达体系的建立和新型口服基因工程疫苗的研制奠定了一定的基础。     

山东PRRSV流行株ORF5、ORF6、ORF7基因序列的分子特征

采用RT-PCR技术对2001～2007年分离自山东地区10株(ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD1、SD2、SD3、SD4、SD5、SD6和SD7)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行ORF5、ORF6和ORF7基因的扩增、克隆和测序,与已知序列的毒株的相应片段进行同源性分析比较,并对其分子特征进行分析.结果表明:该10株病毒仍属北美洲型,其中2001～2002年分离的SD1株、SD2株和2006年分离的SD6株核苷酸序列之间的ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为99.2%,99.8%,100%,均与北美洲原型代表株(VR-2332株)和疫苗毒MLVRespPRRS Repro USA遗传距离较近,同属一大分支;2006～2007年分离的PRRSV ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ 、SD3,SD4,SD5, SD7分离株ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为97.8%～100%,99.4%～99.8%,99.2%～99.7%,均与国内96年Ch-1a和2002年HB-1株及2006年分离鉴定的国内高致病性分离株(JXA1、Shanghai、HEB1)同属一个大的分支.首次证实目前山东省同时存在高致病性PRRSV和传统PRRSV,并且有由传统PRRSV向高致病性PRRSV演化的趋势.     

一例仔猪急性气喘病的诊治

猪气喘病是猪的一种慢性呼吸道传染病。主要表现为咳嗽和喘气,病变特征是融合性支气管肺炎。本病在一般情况下,病猪死亡率不高,但在饲养管理不良或流行暴发的早期及有继发性感染时会造成猪的严重死亡,特别是在集约化、高密度饲养条件下,传播更迅速,经济损失更严重,给养猪业发展带来严重的危害。     

中西药结合治疗牛胎风

中西药结合治疗牛胎风胎风系指母畜在妊娠期间，营养不足，劳役过重，致使气血不足，体质虚弱，外感风邪；或劳役汗后，腠理不固，风寒湿邪乘虚侵袭，由表及里，传入经络，郁滞不通，暴发本病，故又称妊娠中风。轻者四肢拘挛，行步艰难，精神倦怠，食欲减退；重者肢跛或腰...