线粒体膜通透性变化与细胞凋亡的关系

线粒体膜通透性转换孔是一种位于线粒体内膜的非选择性孔道,它的开放引起线粒体膜通透性改变,导致细胞色素C、凋亡诱导因子和Ca²⁺及膜间隙中的胱冬肽酶原等凋亡因子释放到细胞质中,致使细胞整体结构破坏、功能紊乱,发生凋亡。以前普遍认为线粒体膜通透性改变(mitochondrial permeability transition,MPT）是导致细胞凋亡的关键点,但一些新的研究结果表明,MPT与细胞凋亡并不存在必然的联系。作者结合细胞凋亡方面的研究着重就线粒体膜通透性转换的生物学功能和腺嘌呤核苷酸转位子、环孢素A 结合蛋白D及Bcl-2家族蛋白定位、转位在通透性转换中的作用及其与细胞凋亡的关系进行概括性论述与分析。     

寿光鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表达与克隆化细胞株的筛选

利用RT-PCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因mRNA的差异表达水平,构建ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,通过构建真核表达载体pEGFP-ADSL,利用脂质体介导法转染寿光鸡成纤维细胞,并进行阳性细胞的克隆化筛选与检测.结果表明:ADSL基因开放阅读框序列长为1455 bp,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在邻近起始密码子-28 bp处发生C→T突变,该突变使该位点变为核呼吸因子2(NRF-2)结合位点;经SDS-PAGE电泳显示,pGEX-ADSL重组融合蛋白在分子量约为80.5 ku处有特异的蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79,纯化后用Western-blot检测为寿光鸡ADSL蛋白.pEGFP-ADSL转染寿光鸡成纤维靶细胞后24、48和72 h,转染率在26.4%～41.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-ADSL融合蛋白的阳性克隆细胞株,经RT-PCR扩增与Western-blot检测确认ADSL融合蛋白基因已经整合到寿光鸡成纤维细胞的基因组中,获得正常表达.研究结果为揭示我国优良地方鸡种的风味基因结构,研究其生物学功能奠定基础.     

孕酮受体基因多态性及其与小尾寒羊产羔数的关系

设计15对引物,采用PCR-SSCP技术检测孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因全部9个外显子在小尾寒羊、湖羊、特克塞尔和多赛特中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊产羔数的影响.只有引物P9扩增片段具有多态性.对于P9扩增片段,在小尾寒羊、湖羊和多赛特中均检测到AA、AG和GG型,...     

畜禽遗传资源受威胁程度评价

本文用群体遗传学、保护生物学原理，建立了畜禽遗传资源受威胁评价方法，并对我国231个畜禽遗传资源进行了分析。结果表明，有16个畜禽遗传资源为受严重威胁资源，建议由国家采取保种场方式进行紧急保护；9个遗传资源为受威胁资源，必须采取相应措施进行保护，可采取保种场或划定保护区的方式进行保护；17个遗传资源为最低威胁资源，需视具体情况有必要进行保护，可采取由省、市、县级进行保护；57个遗传资源为潜在受威胁资源，需进行特别关注，要求在生产和利用过程中，密切监测群体的动态和性能变化；132个遗传资源为安全遗传资源。     

五指山猪8种组织IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化研究

采用Q-PCR 技术检测了胰岛素样生长因子2(IGF2)和胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因在30、60、90、120 和150 日龄五指山猪心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肌肉、胃脏和小肠等8种组织中的mRNA表达水平.结果表明:(1)IGF2基因在8种组织中的表达呈相似的变化规律:各组织mRNA表达量随着日龄的增加而降低,30日龄时表达量最高,150龄时表达量最低,差异显著(P<0.01);(2)IGFBP3基因在心脏、肺、脾脏、肾脏、肠、胃等组织中的mRNA表达规律相似:即从30～150日龄,依次递减;而肝脏和肌肉mRNA表达从30日龄开始上升,肝脏在90日龄达最高,肌肉在60日龄时达最高,随后二者开始下降,在150日龄时达最低水平.以上结果初步揭示了五指山猪IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化模式,为深入研究五指山猪生长发育及矮小性状形成机理提供了基础数据.     

供体细胞状态对牛重组胚发育的影响

本试验通过比较供体成纤维细胞的不同血清饥饿培养天数、传代次数、冻存复苏等方面试验条件对重组胚发育的影响因素进行了深入的研究。结果表明：供体细胞血清饥饿0、1～3、4～6、7～9d之间重组胚卵裂率没有显著差异（P〉0.05），但囊胚率以饥饿1～3d的最高，与4～6和7～9d组别差异显著（P〈0．05）；以传代0、1～3、4～6、7～9代的细胞作为供体细胞，卵裂率没有显著差异（P〉0.05），桑椹胚率以传1～3代最高，差异显著（P〈0．05）；2代细胞解冻后的卵裂率显著高于4和8代细胞，而以2和6代冷冻解冻后细胞为供体，卵裂率并无明显差异，8代细胞的桑椹胚率显著低于其它组。本试验为提高供体成纤维细胞在卵母细胞中重新程序化及后续重组胚发育等相关研究提供参考。     

山西晋南黄牛的超数排卵配种研究

试验采用两种不同来源的促卵泡素对山西晋南黄牛进行了超排处理.并对发情配种过程中注射促黄体素释放激素A3的超排效果进行了观察.结果表明.超排处理时使用国产的促卵泡素平均每头可用胚胎达3.9枚,平均可用胚胎率为51.5%.与新西兰产的促卵泡素平均每头可用胚率23.1%比较,差异显著(P0.05).在配种的同时注射促黄体素释放激素A3后冲胚,对照组获取的平均可用胚胎(34.1%)较试验组(75.8%)的差异显著(P0.05),说明超数排卵过程中使用国产激素也能获得较好的效果,同时在超排过程中使用促黄体素释放激素A3,可以获得更加理想的效果.     

绵羊骨形态发生蛋白受体IB（BMPR-IB）基因部分3′非翻译区的多态性分析

根据绵羊骨形态发生蛋白受体IB（bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB）基因部分调控区的mRNA序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术检测BMPR-IB基因部分3′非翻译区序列在绵羊（Ovis aries）高繁殖力品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力品种（特克塞尔和中国美利奴绵羊）中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊和湖羊高繁殖力的影响。结果发现,引物P1扩增片段存在多态性,其余2对引物的扩增片段均不存在多态性。对于引物P1,只在湖羊中发现AA和BB两种基因型,其余3个品种均为AA型;测序表明BB型与AA型相比有2个碱基突变（121T→C和195T→C）;湖羊AA和BB基因型频率分别为0.575和0.425,湖羊AA和BB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著（P〉0.05）。研究结果初步表明,检测的BMPR-IB基因位点对小尾寒羊和湖羊高繁殖力都没有显著影响。     

雷州山羊和隆林山羊遗传多样性的微卫星分析

为了调查中国热带、亚热带主要山羊品种的遗传资源现状,应用14对微卫星引物,检测了隆林山羊和雷州山羊不同分布地区的群体遗传多样性水平。隆林山羊（柳州）、隆林山羊（百棚）、雷州山羊（徐闻）、雷州山羊（海南）各群体平均多态信息含量（PIC）分别为0.645、0.600、0.483、0.518;平均杂合度（H）分别为0.281、0.421、0.121、0.157;平均等位基因数（k）分别为5.17、4.93、4.64、4.5,3组数据综合说明两个山羊品种遗传多样性相对匮乏,群体遗传变异较低;NJ法聚类显示,隆林山羊两个群体聚为一类,再与雷州山羊（徐闻）聚在一起,最后为雷州山羊（海南）,这与两个品种的来源及地理分布基本一致。此研究结果为中国热带、亚热带山羊品种资源开发利用提供了基础资料和科学数据。     

GnRHR基因多态性及其与小尾寒羊高繁殖力关系的研究

设计8对引物,应用聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测促性腺激素释放激素受体（gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR）基因外显子1、外显子2和外显子3在高繁殖力品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力品种（南非肉用美利奴、考力代和中国美利奴绵羊）中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果发现引物P4和P7扩增片段具有多态性,其余6对引物的扩增片段都不存在多态性。对于P4扩增片段,在湖羊中检测到AA和BB基因型,在其余4个绵羊品种中只检测到AA基因型,BB型与AA型相比在外显子1有5个突变（+692G→A、+706T→A、+747T→C、+748A→T和+802T→A）,并引起氨基酸改变（Gly→Ser、Asp→Glu和Leu→Pro）。对于P7扩增片段,在小尾寒羊和湖羊中都检测到CC和DD基因型,在低繁殖力的3个绵羊品种中均只检测到CC基因型,DD型与CC型相比在外显子2有+50A→G和+101A→C两个突变,并引起氨基酸改变（Glu→Gly和Gln→Pro）;小尾寒羊CC和DD基因型频率分别为0.87和0.13,突变纯合型（DD）小尾寒羊平均产羔数比野生型（CC）多0.81只（P<0.01）。