丰花月季体细胞无性系变异的研究

以丰花月季腋芽为外植体进行芽分化诱导,将获得无菌苗用NaN3进行化学诱变以获得变异植株,用ISSR分子标记进行检测。结果表明,腋芽是诱导芽分化的很好的外植体,诱导率可达80%,分化率可达90.6%,诱导分化的苗强壮;半致死剂量200 mg.L-1 NaN3处理2 h可作丰花月季丛生芽的诱变处理;从遗传相似系数和聚类图总的结果表明,15个亲本材料间相似系数很大(0.97),说明本次参试材料的遗传差异性小,亲缘关系近。另外,在相应的材料之间,仍存在一定的差异,其相似性最高的为0.99,最低的为0.87,这表明运用ISSR技术可以灵敏地分析亲本材料的遗传背景,在体细胞无性系变异研究中具应用价值。     

百合愈伤组织的诱导及植株再生

试验以东方百合(Oriental hybrids)"bernini"的花柱、花丝、花瓣为外植体,利用组织培养技术,探讨不同外植体愈伤组织的诱导、胚状体发生及植株的再生状况。结果表明,三种外植体均能诱导愈伤组织,花柱和花瓣诱导的愈伤组织为绿色致密的非胚性组织,而花丝诱导的愈伤组织为黄色疏松的胚性组织,将胚性愈伤组织继续培养一个月可发生胚状体。花丝愈伤组织诱导率、分化率以及分化速度均高于花柱和花瓣。诱导愈伤组织的最佳培养基为改良MS(盐酸硫胺素的浓度为4mg·L~(-1))+2,4-D2mg·L~(-1)+水解乳蛋白300mg·L~(-1);最佳分化培养基为MS+KT0.1mg·L~(-1)+BA 0.5mg·L~(-1)+NAA 1mg·L~(-1);最佳生根培养基为MS+IBA 0.5mg·L~(-1)。     

野生大豆S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及功能分析

干旱、盐碱和低温等非生物逆境是危害作物诸多因素中最为严重的自然灾害, 它可以使作物减产, 甚至死亡。目前通过生物技术手段获得可利用的抗性基因是提高植物抗性的重要途径。东北野生大豆具有丰富的基因资源, 是基因克隆的理想材料。从低温(4℃)、干旱(30%PEG)及盐胁迫(200 mmol L^-1NaCl)处理的东北野生大豆幼苗叶片中提取总RNA, 经反转录合成cDNA第一链, 并以此链为模板, 从已构建的盐胁迫全长cDNA文库和东北野生大豆盐胁迫EST数据库中筛选出与渗透胁迫直接相关的EST序列, 根据该序列设计一对PCR引物扩增S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶基因的全长序列, 经Blast比较分析, 确定所获得的SAMS基因全长序列。构建以pBI121为基础的CaMV35S启动子调控的植物表达载体; 利用农杆菌介导法将其导入烟草, 获得了180株转基因烟草, 并进行了低温、干旱和盐胁迫处理, 通过测定在不同胁迫处理下的生理指标, 分析了基因的功能。野生大豆的SAMS基因在烟草中的超量表达提高了转基因烟草的抗低温、干旱和耐盐能力。     

CBF1转录因子基因的克隆及两种启动子调控下的植物表达载体的构建

CBF1转录激活因子能调控一组抗干旱、抗低温基因的表达,更有效地提高植物抗干旱、抗低温的能力。现在国内外许多研究机构已经利用导入该转录因子来提高植物的抗寒性、抗旱性,并且获得一定的成功,但在园林植物上的应用还有待探讨。因此,本研究以拟南芥叶片为材料,通过PCR方法对其基因组DNA扩增,成功地克隆了逆境诱导型启动子和CBF1转录因子并分别构建了花椰菜花叶病毒CaMV35s启动子和rd29a启动子调控下的CBF1融合基因表达载体,为下一步转化园林植物,利用CBF1基因综合改良园林植物抗逆性及进一步探讨CBF1基因的抗逆分子机理奠定了物质基础。     

高温对马蹄莲生长发育的影响

选择生长发育程度不同、生长健壮的白色马蹄莲(Zantedeschia aethiopica Spreng)植株,将马蹄莲植株放置于人工气候箱内,在每天2h40℃高温处理,而光照强度、空气湿度、土壤湿度等环境条件均为仿自然生长条件下,对不同马蹄莲的开花数量、株高、叶片生长量、植株生长速度、叶片数等进行观察与分析。结果表明,马蹄莲植株初始高度和终了高度都与其叶片数呈正相关,高温对株高在8～15 cm范围内的马蹄莲中小植株的高生长影响较小,而对株高小于5cm的幼小植株的叶片的生长抑制较小,高温对植株高度大于15 cm的大苗影响较大。     

复叶槭FtsZ基因的克隆、RNA干扰载体的构建及其在烟草中瞬时表达

利用简并引物RT—PCR,克隆复叶槭FtsZ基因的cDNA序列,利用马铃薯X组病毒载体pgR107,构建RNA干扰重组病毒载体pVX—AnFtsZi,并转化农杆菌GV3101（含辅助质粒pJICSa—rep）侵染烟草。40d后,检测烟草内源FtsZ基因的表达量。研究结果表明：从复叶槭中克隆到的569bpFtsZ基因cDNA片段,具有FtsZ蛋白的核心功能序列GGGTGSG。构建的hpRNA型RNA干扰载体抑制了FtsZ基因的表达。为培育槭树类彩叶新品种奠定分子理论基础。     

百合遗传转化体系的建立

通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,建立了百合金黄精灵(ButterPixie)鳞茎的遗传转化体系。确定了适宜百合转化的筛选剂草甘磷的浓度:芽分化阶段为1.6mg.L-1,根分化阶段为0.8mg.L-1。除菌剂头孢的使用浓度为500mg.L-1。并且确定OD600=0.5的菌液浓度侵染20min,共培养pH5.2培养3d时对百合有最高转化效率。研究确定了预培养时间为4d,在共培养培养基中去除NH4NO3或加入阿魏酸均可提高转化效率。得到抗性植株12株,PCR初步检测发现其中7株为PCR阳性植株,转化效率为58.3%。     

几种百合杂交育种试验的初步研究

以10个不同百合品种为试材,根据不同的花色和抗寒性来选育新品种,对于亚洲百合之间的杂交采用常规的方法,而对于亚洲与东方百合之间的杂交采用了3种不同的方法,并进行了比较分析。结果表明,百合种间杂交不同的杂交组合适合不同的杂交方法。     

卷丹百合珠芽发育形态特征及生理变化研究

运用石蜡切片技术观察卷丹百合珠芽发育形态学特征,通过测定珠芽发育过程相关生理指标变化,研究其发育机理。结果表明,珠芽发育可分为3个阶段,珠芽启动期、膨大期和成熟期。植物内源激素IAA、ZR、GA_3对珠芽发生与发育起促进作用,而ABA、JA有利于珠芽成熟。蔗糖、淀粉等物质积累及相关酶活性变化在卷丹百合珠芽形成发育过程有重要作用,为卷丹百合繁殖发育研究提供参考。     

不同稗草密度对草地早熟禾土壤微生物变化的影响

通过稀释平板菌落计数法,对不同密度稗草(Echinochloa crusgalli L.Beauv)共生对草地早熟禾(Poapratensis L.)根际土壤微生物产生的阶段性影响进行了研究。结果表明,草地早熟禾根际土壤中细菌数量随着稗草密度的增大而增加,并有随稗草生长而数量增加的趋势,直到枯萎期才开始减少;在稗草苗期和枯萎期放线菌的数量受稗草密度的影响较小;但在生长期随着稗草密度的增大;数量有一定减少,抽穗期有所增加;土壤真菌的数量随着稗草密度增大,在稗草苗期和生长期数量逐渐减少,而在枯萎期逐渐增加。