边缘革蜱GST序列生物信息学分析及表达鉴定

为挖掘边缘革蜱谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)家族功能基因,根据边缘革蜱转录组数据信息设计引物,对边缘革蜱6种GST基因进行扩增、克隆、序列测定,测序后进行比对、绘制系统进化树,进行生物信息学分析及抗原性预测;根据系统进化分析,选择4个不同亚型进行原核表达及鉴定。结果显示,经试验筛选了6种边缘革蜱GST功能基因,根据构建出的系统进化树将其命名为DmGSTE2、DmGSTE3、DmGSTK1、DmGSTM5、DmGSTM6和DmGSTZ2,将6种功能基因序列上传至NCBI的GenBank;获得的6种GST均为非过敏原;DmGSTM6有信号肽,存在跨膜区,其他GST皆无信号肽、无跨膜区、无明显疏水区,均为亲水性蛋白;DmGSTM5和DmGSTK1抗原性较强,DmGSTE2抗原性最弱。筛选构建并表达了4种不同亚型的GST,获得了相应重组蛋白。Western blot发现重组蛋白能够与相应蛋白免疫过的阳性鼠血清发生反应,说明具有一定的免疫原性和反应原性。试验结果可为边缘革蜱GST家族抗蜱候选疫苗筛选等深层研究奠定基础。     

不同季节与品种对种公牛精液品质的影响

试验旨在通过对新疆地区安格斯、和牛、利木赞、夏洛来和西门塔尔5个品种种公牛全年精液品质分析,探究不同季节与品种对种公牛精液品质的影响,为冻精生产提供理论依据。选择3～5岁的5个品种的种公牛106头,收集其2018—2019年采精量、原精活力和原精密度共2 211条数据,使用SAS 9.2软件进行分析。结果表明:季节及品种对种公牛精液品质均有极显著影响,其中夏洛来种公牛采精量高于和牛、利木赞及西门塔尔(P<0.01),利木赞种公牛的原精活力高于安格斯、夏洛来(P<0.01),和牛的原精密度高于安格斯和夏洛来(P<0.01);春季的采精量、原精活力及原精密度均高于其他季节(P<0.05或P<0.01)。综上,就新疆地区种公牛精液品质而言,利木赞、夏洛来和西门塔尔种公牛的精液品质相对好于其他品种;春、秋两季种公牛的精液品质较好,建议将精液采集的工作集中在春、秋两季。     

桑葚幼果的落果与正常果的果柄转录组分析

  目的  果实的脱落是一种常见的生理现象，会在一定程度上限制果实的产量。探究桑葚幼果在脱落过程中的代谢及生化反应，可为桑葚的脱落机制研究提供参考。  方法  通过高通量测序对白桑Morus alba幼果在落果和正常果的果柄离区进行转录组测序，筛选差异表达基因，并对其进行功能注释和代谢通路分析，采用实时荧光定量PCR技术对转录组数据进行验证。  结果  经华大基因转录组测序分析共计获得262.92 Mb的原始序列；桑葚幼果果柄在2种状态下共筛选到10 481个差异表达基因，其中，有5 239个差异表达基因上调表达，5 242个差异表达基因下调表达。经基因本体数据库(GO)功能富集分析，共发现37个显著性条目，大多数差异基因具有催化活性、膜的组成成分、氧化还原酶活性、膜的内在成分等功能；京都基因与基金组百科全书(KEGG)富集分析发现:大多数差异表达基因集中在柠檬酸循环、植物激素信号转导途径、黄酮类生物合成等代谢通路上。  结论  桑葚在脱落过程中受植物激素的调控，氨基酸、黄酮类次生代谢物和碳水化合物等物质也能调控果实脱落。图9表2参35     

新疆部分焉耆马场马梨形虫病病原学检测及序列分析

为了解新疆地区焉耆马场马梨形虫病病原感染情况，促进当地马梨形虫病的综合防控和马产业的健康发展，选取5个焉耆马场作为试验点，随机采集156匹焉耆马全血进行马梨形虫病病原DNA检测，并使用SPSS Statistics 17.0、Megalign与MEGA 11.0软件分析不同采样点、不同年龄、不同性别马匹的感染情况差异，同时进行病原核酸的同源性比较和系统进化树构建。结果显示：156匹焉耆马全血样品中，检出马梨形虫病病原核酸阳性82份，其中马泰勒虫、马驽巴贝斯虫和两者混合感染阳性率分别为33.3%(52/156)、26.9%(42/156)和7.7%(12/156)。不同采样点、不同年龄、不同性别焉耆马的马梨形虫病病原阳性率均无显著差异（P> 0.05）。通过Megalign与MEGA11.0软件分析发现：测序得到的马泰勒虫18S rRNA基因序列与选取的参考虫株同源性为95.5%～100%，马驽巴贝斯虫BC-18S rRNA基因序列与选取的参考虫株同源性为98.6%～99.6%。马泰勒虫18S rRNA基因与马泰勒虫伊犁株（OL589505.1）位于同一分支上，进化关系较近，与其他...     

IL-6、FGF21和ANGPTL8与能量负平衡奶牛卵巢静止的关系

为了确定组织细胞因子在奶牛产后能量负平衡(NEB)诱导的卵巢静止(IO)发生中的作用。本试验根据产后21 d血浆β-羟丁酸(BHBA)和葡萄糖(Glu)的水平，从100头奶牛中选取能量正平衡(PEB)组和NEB组各30头。随后，根据产后50～60 d是否发情及卵泡发育状况，选取NEB组中IO奶牛(NEB-IO)和PEB组中发情奶牛(PEB-E)各6头进行采样。利用生化和ELISA方法分别检测血浆中代谢指标和细胞因子的水平；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和ELISA方法检测组织中细胞因子的水平。结果显示：与PEB组奶牛相比，NEB组奶牛产后21 d血浆中白细胞介素6(IL-6)极显著升高(P<0.01),成纤维细胞生长因子21(FGF21)和血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)水平显著降低(P<0.05),并持续到产后50 d; 3个细胞因子与BHBA、Glu和游离脂肪酸(NEFA)之间显著相关(P<0.05);与PEB-E组奶牛相比，NEB-IO组奶牛IL-6 mRNA表达量和蛋白含量在肌肉和卵巢中显著降低(P<0.05);FGF21和ANGPTL8 ...     

花岗岩红壤侵蚀退化地不同治理模式土壤抗蚀性评价

为探究花岗岩红壤侵蚀退化地不同治理模式对土壤抗蚀性的影响，通过野外调查与室内外试验，以长汀县封禁（M1）、乔灌草混交（M2）、全坡面播草（M3）、低效林改造（M4）、条沟草灌带（M5）这5种治理模式的土壤为研究对象，选取开垦地（CK1）和裸露地（CK2）为对照，利用主成分分析法揭示土壤抗蚀性主要影响因子，并结合灰色关联分析和耦合分析对土壤抗蚀性进行综合评价。结果表明：（1）不同治理模式的土壤抗蚀性由强到弱依次为M5 > M2 > M3 > M4 > M1 > CK2 > CK1；（2）> 0.25 mm水稳性团聚体含量和有机质含量是影响土壤抗蚀性的主要因子；（3）土壤抗蚀性与土壤理化性质的灰色关联度较高（0.696），M3的土壤抗蚀性与土壤理化性质之间系统耦合度最高（0.883）。研究结果为花岗岩红壤侵蚀退化地的水土流失治理及生态恢复提供科学依据。     

水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14启动子克隆及时空表达特性分析

【目的】克隆水稻氨基酸透性酶基因OsAAP14的启动子序列并分析其时空表达特性，为解析氨基酸转运基因生物学功能及了解水稻对有机氮源的响应和氨基酸吸收利用提供理论依据。【方法】PCR扩增OsAAP14基因的启动子序列，并与pCAMBIA1391Z空载体质粒连接构建出启动子-GUS表达载体，并通过农杆菌介导侵染水稻中花11愈伤组织，获得OsAAP14基因的启动子-GUS转基因植株，通过对转基因植株不同组织部位进行GUS染色，并采用石蜡切片技术观察各组织细胞部位表达，经5种不同氨基酸处理后进行根部GUS染色，结合实时荧光定量PCR检测OsAAP14基因在GUS染色部位的相对表达量，最后综合分析该基因的时空表达特性。【结果】克隆获得OsAAP14基因启动子序列为1993 bp，与参考序列日本晴OsAAP14（LOC_Os04g56470）序列一致。该启动子序列含有MBS、P-box、ABRE、CGTCA-motif等激素或胁迫响应元件。从OsAAP14基因的启动子-GUS植株T₀代中鉴定获得16个阳性转基因株系。T₁代材料不同组织部位GUS染色及实时荧光定量PCR结果均显示，OsAAP14基因在水稻芽伸长的基部和叶片相对表达量较高，在根、叶鞘和穗也有一定表达，但在茎中的相对表达量最低。石蜡切片分析结果显示，OsAAP14基因在根部皮层薄壁细胞、叶片的叶肉细胞、穗的颖壳内部细胞有较高的表达。碱性氨基酸的组氨酸处理下根中的OsAAP14基因表达量随着处理时间的增加显著提高（P<0.05，下同），且赤霉素和脱落酸处理下，根中的OsAAP14基因相对表达量也显著提高。【结论】OsAAP14基因在水稻不同组织均有表达，正常情况（未处理）下在水稻基部和叶片中相对表达量较高，但外源氨基酸和激素处理时，在根中该基因被诱导表达上调，说明OsAAP14基因正常情况下可能主要参与调控水稻地上部分氨基酸的运输，但当外界氨基酸和激素含量增加时则参与调控水稻根部氨基酸的运输。     

油莎豆基因组大小、倍性和系统发育分析

为明确黄淮地区油莎豆主栽品种和特色种质资源的基因组特性及与其近缘类群的系统发育关系，利用流式细胞仪和基因组Survey分析对6个油莎豆材料基因组大小、倍性进行评估，并基于核糖体DNA的外转录间隔区（External transcribed spacer,ETS）和内转录间隔区（Internal transcribed spacer,ITS）序列分析其与近缘类群间的系统发育关系。流式细胞仪分析结果表明，6个油莎豆材料基因组在0.808 6～0.858 5 Gb，均值为0.826 4 Gb；基因组Survey分析结果表明，3种粒型油莎豆材料豫油莎2号、豫油莎3号、YYS-4的基因组大小、重复序列占比、GC含量、杂合率分别为0.697 9 Gb、81.02%、34.7%、0.28%,0.778 7 Gb、84.45%、36.4%、0.08%,0.790 6 Gb、83.75%、34.9%、0.19%；基因组Survey分析和花粉粒染色结果显示，3种粒型油莎豆材料均为三倍体。系统发育分析结果显示，6个油莎豆材料聚为油莎豆分支，该分支与香附子和头状穗莎草构成的分支形成亲缘关系较近的姐妹群，并与其...     

边缘革蜱aqp基因的生物信息学分析及克隆与表达

蜱类水通道蛋白(AQP)是负责胞内外水分子运输的蛋白质，属于内在蛋白超家族成员。该蛋白是一种潜在的抗蜱疫苗候选抗原。为探究边缘革蜱(Dm) AQP (Dm AQP)的生物学特性及其是否具有抗原性，本研究利用PCR扩增Dm两条不同的Dmaqp基因，分别得到582 bp的Dmaqp1基因和1 094 bp的Dmaqp2基因，并将其翻译成相应的蛋白，经各种生物信息学软件分析后显示，Dm AQP1和Dm AQP2蛋白理论等电点分别为4.76和8.65,Dm AQP1有4个跨膜区及1个天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸(NPA)结构，Dm AQP2有4个跨膜区以及2个NPA结构；Dm AQP1和Dm AQP2蛋白分别有5个和9个B细胞抗原表位，11个和25个磷酸化位点，两种蛋白均为疏水性蛋白；Dm AQP1和Dm AQP2蛋白二级结构均主要由α-螺旋以及无规则卷曲组成，分别占34.02%、39.69%和32.93%、39.52%。基于Dmaqp1和Dmaqp2基因，从其编码区选择抗原决定簇密集且跨膜区域少的片段进行截短基因的PCR扩增，构建原核表达质粒p ET-32a-jd Dmaqp1和p ET-28a...     

红壤侵蚀退化坡面植被恢复过程中的水土保持效益演变

为探究花岗岩红壤侵蚀退化坡面植草措施实施中植被在不同生长阶段水土保持效益的演变规律，设置条带型（D1）、随机型（D2）、斑块型（D3）3种不同植草格局坡面，并以侵蚀退化裸地坡面（CK）作为对照开展试验，在天然降雨条件下监测整个植被生长过程中的坡面土壤侵蚀变化特征。结果表明：（1）植被的生长可显著提升坡面的水土保持能力，随着植被生长阶段的推进，坡面的产流产沙量明显下降，减流效益达20.74%~79.03%，减沙效益达97.42%~99.40%，但在不同降雨类型下，随着植被生长，坡面减流减沙效益表现出的递增变化规律具有差异。（2）植被生长能逐渐削弱降雨因素对坡面产沙的影响，使得坡面减沙率在不同雨型间的差异逐渐减小，最终稳定在一个较高水平，不同雨型间坡面减流率的差异在植被生长各时期皆较大。减流率、减沙率与植被生长时间二者之间存在对数函数关系，相关系数分别大于0.491和0.792。植被生长指标（分蘖数、盖度、株高）与坡面产流产沙量之间呈显著或极显著负相关关系。（3）从整个植被生长过程来看，3种植草格局的水土保持效益大小表现为D1>D3>D2，在植被生长的前期以及前中期，高植株密度的分布格局强于低植株密度分布格局，后期各格局差异较小。研究结果为南方红壤水土流失区严重侵蚀退化地植被恢复提供科学依据及技术支撑。