H5N1型禽流感模型侵染病毒的构建与鉴定

【目的】构建含有H5N1型禽流感病毒HA、NA的侵染模型病毒,并对构建的模型病毒进行侵染活性及特异性检测。【方法】采用PCR方法扩增出H5N1型AIVHA和NA基因,经纯化回收后将其分别克隆至真核表达载体pcDNA4.0中,构建pcDNA-HA、pcDNA-NA。然后采用磷酸钙共转染方法,将pcDNA-HA、pcDNA-NA和含有LUC报告系统的HIV骨架表达载体pNL4-3.Luc.R-E-,共同转染293T细胞,构建HIV/HA-NA模型病毒,对HIV/HA-NA模型病毒进行细胞侵染活性及特异性检测。【结果】HA、NA基因片段真核表达载体pcDNA-HA、pcDNA-NA与HIV骨架载体在293T细胞中成功表达组装,获得了HIV/HA-NA侵染模型病毒;敏感细胞特异性检测及侵染活性分析表明,HIV/HA-NA模型病毒与其野毒具有共同的敏感细胞。报告系统数据显示,模型病毒可以定量检测其对细胞的侵染程度。【结论】成功构建HIV/HA-NA模型侵染病毒,可以模拟H5N1病毒的侵染过程,定量报告病毒的侵染程度,并且该模型病毒不具有增殖能力,安全可靠,可以方便地用于普通实验室AIV抗体检测和特定药物的筛选。     

禽流感病毒H5,H7,H9亚型多重RT-PCR检测方法的建立

依据GenBank中亚洲流行株禽流感病毒(AIV)H5,H7,H9亚型血凝素基因及M基因序列保守区域设计特异性引物,利用多重反转录聚合酶链式反应技术建立了AIV及H5,H7,H9亚型的检测方法.该方法能一次性检测出AIV保守区域M基因的同时,直接区分H5,H7,H9亚型.对新城疲病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒等特异性检测均为阴性.样品经100倍稀释后仍能检出.     

小鹅瘟的诊断与综合防治技术

小鹅瘟，又称鹅细小病毒感染，是雏鹅的一种急性败血性传染病，以精神萎顿、食欲废绝、严重下痢，有时出现神经症状，死亡率高为临诊特点，可经消化道和呼吸道感染，并可经卵垂直传播。目前本病呈世界性分布，常引起雏鹅大批死亡，对养鹅业的发展影响极大。     

药敏片的研制及其抑菌效果观察

选取临床中常用的部分抗菌药物,按照不同的浓度梯度制成药敏纸片,以大肠杆菌为试验菌株,测定其抑菌效果,并与市售药敏片进行对比。结果表明:该制备药敏片的方法是成功的,可在临床中推广应用,以指导生产实践。     

影响鱼粉质量的因素及其鉴定

原料、加工前的保存、加工工艺、加工后贮藏、鱼粉掺假等因素都可影响鱼粉的质量;鱼粉品质可通过颜色、气味、质地、新鲜度、发热程度、结块等方面进行判断;鱼粉质量的简易检测主要通过物理、化学和显微镜检测等方法进行.     

鸡病毒性关节炎的诊断与防治技术

鸡病毒性关节炎，也称病毒性腱鞘炎、腱滑膜炎、传染性腱鞘炎，是由禽呼肠孤病毒中的鸡病毒性关节炎病毒引起的以跗、趾关节肿大、腱鞘发炎、腓肠肌断裂为特征的一种病毒性传染病。虽然很少大面积暴发，死亡率不高，但因运动障碍、生长停滞、淘汰率高（有时废弃率高达25％～40％）、屠宰率下降、饲料转化率低以及产蛋率下降等造成的经济损失非常严重，同时可经蛋垂直传播，因此，该病对种鸡、蛋鸡和肉鸡的影响比较显著。     

小鹅瘟的常见混合感染与防治

混合感染是当前禽病流行中的一个重要趋势．目前有越来越多的规模养禽发生混合感染。小鹅瘟是危害养鹅业的重要传染性疾病．并且易与其它疾病发生混合感染，加大了防治的难度。本文就小鹅瘟常见混合感染的症状、病变及防治方法进行介绍．望能对养鹅业的健康发展提供帮助．[第一段]     

猪圆环病毒2型免疫学研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)感染猪体后,可引发猪体内相应的细胞免疫反应和体液免疫反应,同时可造成免疫系统损伤,其中包括CD4+/CD8+/MHC II T细胞和B细胞显著减少,相关细胞因子γ-干扰素、IL-a和IL-10增加,产生病毒中和抗体等。人们已鉴定了PCV2衣壳蛋白的多个B/T细胞抗原表位,其中包括PCV2特异的氨基酸残基231～233和195～202和PCV1和PCV2共有的氨基酸残基156～162和175～192位;T细胞抗原表位包括Rep蛋白的第81～100位和201～220位氨基酸和ORF3蛋白的第31～50位氨基酸。在PCV2疫苗研究中,灭活疫苗和亚单位疫苗成为现时养猪生产中的常用疫苗、病毒活载体疫苗和DNA疫苗也成为疫苗研究的热点。     

鸭病毒性肝炎的诊断与综合防治技术

鸭病毒性肝炎（DVH）,俗称＂背脖病＂,在我国大部分省区流行,是危害养鸭业的主要疾病之一。本文就鸭病毒性肝炎的诊断和防治技术作些介绍,以期为临床实践提供帮助。     

禽白血病病毒衣壳蛋白单克隆抗体研制及其双夹心ELISA的建立

为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体,本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALV p27免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA进行筛选,制备了5株能够稳定传代并分泌抗p27单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为5D3、4F12、5B10、1C5和3C6,亚类鉴定3C6为IgG2b,其余为IgG1.通过IFA、Western-blot及竞争抑制ELISA,表明该5株单抗与J亚群禽白血病病毒(ALV-J)呈阳性反应,而与其他常见禽源病毒无交叉反应.利用5D3和4F12单抗建立了双抗体夹心ELISA方法,经663份临床样本验证,该方法与商品化试剂盒的符合率达到95.17％,证明所研制的针对ALV p27蛋白的单抗及建立的双抗体ELISA方法具有较高的应用价值.